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Facultad de Ciencias

Químicas
Curso de microbiología
Diagnóstica
Enero 2010

Coprocultivo
Diagnóstico de laboratorio de
Infecciones bacterianas
gastrointestinales
M.A. MA OLGA GONZALEZ RANGEL
Chihuahua, Chih., enero 2010

Coprocultivo

realizados después del interrogatorio .Coprocultivo El diagnóstico de las diarreas agudas bacterianas se realiza mediante la prescripción de coprocultivos típicos u orientados.

Patógenos: Salmonella. Clostridium difficile o E coli enterohemorrágica . Diagnósticos epidemiológicos clínicos Para Vibrio cholerae. Shigella.Coprocultivo Diagnóstico de orientación: • Examen macroscópico y microscópico de las heces. Campylobacter y Yersinia E coli y Virus.

Coprocultivo Diarrea aguda según la OMS: Emisión de al menos tres heces líquidas o blandas al día con menos de 14 días de antelación. .

aspecto de las heces.Coprocultivo De importancia para el microbiólogo: Información de los signos clínicos como: Dolores abdominales. . fiebre. entre otros.

Si el análisis es diferido. la muestra se puede conservar durante 12 a 24 horas a 4 C para evitar proliferación bacteriana. .Coprocultivo Obtención de la muestra: Las heces recientemente recogidas se llevarán lo más rápidamente posible al laboratorio.

cholerae). • Transporte Tubos sellados o recipientes a prueba de pérdidas.Coprocultivo Obtención y transporte de muestras fecales para el diagnóstico de laboratorio Cuándo se toma la muestra Cuando el paciente tiene diarrea. hielo o hielo seco. para entrega al día siguiente. Remitir en una caja aislada con paquetes de congelación. colocar en un recipiente hermético para proteger del hielo o hielo seco. se prefiere la refrigeración. • Cuánto se debe obtener Un hisopo rectal o aplicador de muestra fresca en un medio de transporte. . sin embargo. • Almacenamiento después de la colección Refrigerar a 4°C si los especímenes se recibirán en el laboratorio antes de las 48 horas o congelar a -70°C. lo antes posible luego del comienzo de la enfermedad (preferiblemente dentro de los cuatro primeros días) y antes de comenzar el tratamiento con antimicrobianos. Las muestras fecales de pacientes con sospecha de tener cólera pueden ser transportadas a temperatura ambiente y mantenidas por largo tiempo si es necesario. • Medio de transporte Cary-Blair u otro medio de transporte conveniente (NO debe usarse glicerol salino de tampón para el transporte de muestras de V.

hemorrágicas. Shigella spp) o enterotoxigénico (Vibrio cholerae. mucoso – sangrientas. acuosas.Coprocultivo Examen macroscópico: Aspecto de las heces: líquidas. E coli enterotoxigénico) .. Orientan sobre patógenos responsables como: enteroinvasivo (Salmonella spp. mucosas. blandas.

Coprocultivo Examen microscópico: • En fresco: Si las heces son líquidas. hematíes o la movilidad de bacterias como Campylobacter spp o Vibrio spp. Shigella. Campylobacter) o por no invasivos productores de toxinas que inducen a lesiones mucosas cólicas (C difficile toxigénico) . • La presencia de leucocitos se relaciona a una infección por gérmenes invasivos (Salmonella. un examen directo entre porta y cubre permitirá poner de manifiesto la presencia de leucocitos.

. • Un medio más selectivo. por lo que se recomienda utilizar medios selectivos para aislar específicamente los enteropatógenas e inhibir la flora asociada. y • Un medio selectivo de enriquecimiento. elegido en función de la bacteria a investigar. La recomendación es: • Un medio lactosado poco selectivo.Coprocultivo Cultivo: La flora intestinal es una flora comensal compleja.

Coprocultivo Medios selectivos de aislamiento para Salmonellas: se recomienda los que contienen sustratos por los caracteres de lactosa y reducción de sulfatos: Agar SS. DCL (desoxicolato – citrato – lactosa). XLD. . Hektoen.

. Caldo de selenito de Leifson. Se utilizan sistemáticamente para aumentar la sensibilidad de detección de Salmonellas en las heces o en bacteriología alimentaria. se resiembra en medios de aislamiento selectivos como el Sulfito de Bismuto. Después de 24 horas de incubación. Caldo de Tetratoniato.Coprocultivo Medios selectivos de enriquecimiento: Se utiliza el medio de Müller-Kaufman.

el Agar Bismuto Sulfito no se debe utilizar para el aislamiento de S typhi si ha sido almacenado por más de 24-36 horas. es el medio de preferencia para el aislamiento de S typhi. Cuando se cultivan muestras de fecales de portadores sospechosos de tifoidea. .Coprocultivo • Agar bismuto sulfito (ABS) El agar bismuto sulfito (ABS). el cual es altamente selectivo. No obstante. Se ha notificado que ABS inhibe los otros serotipos de Salmonella no S typhi. el uso de una placa vertida de ABS puede favorecer el aislamiento. a no ser que sea refrigerado a 4°C por lo menos 24 horas antes de ser utilizado.

Pruebas como urea. movilidad. .Coprocultivo Identificación: • Pruebas bioquímicas: galerías API 20E o 10S y medio Kigler. entre otras. citrato. sustratos cromogénicos C8 estereasa.

Coprocultivo
Identificación:
• Pruebas bioquímicas:
sembrar en TSI y LIA además de
MIO.
En general Salmonella es
negativa a las pruebas
de,ureasa, indol, lactosa y
sacarosa y positiva a las
pruebas de descarboxilación
de lisina y ornitina, así como
generalmente producen H2S,
pero existen variantes atípicas
con reacciones positivas a
lactosa o no descarboxilación
de lisina.

Coprocultivo
Identificación:
Identificación antigénica
para determinar el
serotipo según el
esquema de
Kauffman- White.

Coprocultivo
Interpretación del
coprocultivo
estándar:
En el caso de diarrea
aguda, el aislamiento
de Salmonellas,
Shigella,
Campylobacter o
Yersinia tiene que ser
siempre considerado
como significativo.

Coprocultivo Procedimientos básicos en la toma de muestras biológicas para diagnóstico. excusado o pañal no son aceptadas por la contaminación ambiental a que fueron expuestas . Materia Fecal: La muestra de materia fecal (diarreica. pastosa o formada) debe ser reciente (< de 24 hrs) Las heces obtenidas del suelo.

en el recto y rotarlo ligeramente. La presencia de un ligero color café en el hisopo indica que la muestra ha sido bien tomada. Hisopo Rectal: Emplear este tipo de muestra solamente en casos sospechosos de etiología bacteriana. Introducir el hisopo con la muestra hasta el fondo de un tubo de tapón de rosca con medio de transporte Cary-Blair. previamente humedecido en solución salina estéril o medio de transporte. Tomar la muestra introduciendo la punta de un hisopo de algodón.Coprocultivo Procedimientos básicos en la toma de muestras biológicas para diagnóstico. .

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Sistema de Identificación Microbiana BBL Crystal .

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Coprocultivo .

Coprocultivo Durante un brote. y antes de que el tratamiento antibiótico se haya iniciado. Una excepción a esta regla es el caso de las heces obtenidas de pacientes con enfermedad febril: en el caso de fiebre tifoidea. en la segunda y tercera semanas de la enfermedad. y • No han recibido tratamiento antimicrobiano para la enfermedad diarreica. . Las muestras de fecales se deben obtener en los primeros estadios de cualquier enfermedad entérica. puede estar presente en las heces. cuando los agentes patógenos están por lo regular presentes en las heces en su mayor número. Salmonella ser typhi. las muestras de heces o de hisopados rectales deben obtenerse de entre 10 y 20 personas que cumplan los siguientes criterios: • Actualmente tienen diarrea acuosa (cólera) o diarrea sanguinolenta (disentería) • La enfermedad se inició menos de 4 días antes del muestreo. el agente etiológico. en la máxima cantidad.

se deben colocar en medio de transporte y refrigerar inmediatamente. y procesarse como máximo 2 horas después de haberlas obtenido. sin desinfectantes ni residuos de detergentes. en lo posible. porque pueden contener residuos de desinfectantes u otros contaminantes. refrigerarse.Coprocultivo Obtención de muestra de heces Las muestras de heces deben colectarse en recipientes limpios. Las muestras no deben sacarse de pañales. Las muestras fecales no preservadas deben. y con las tapas bien cerradas y a prueba de derrames. Las muestras que no se pueden cultivar en un plazo de 2 horas después de haberse obtenido. .

. Cuánto se debe obtener Un hisopo rectal o aplicador de muestra fresca en un medio de transporte. para entrega al día siguiente.Coprocultivo Obtención y transporte de muestras fecales para el diagnóstico de laboratorio • • • • • Cuándo se toma la muestra Cuando el paciente tiene diarrea. sin embargo. colocar en un recipiente hermético para proteger del hielo o hielo seco. Remitir en una caja aislada con paquetes de congelación. cholerae). se prefiere la refrigeración. hielo o hielo seco. Las muestras fecales de pacientes con sospecha de tener cólera pueden ser transportadas a temperatura ambiente y mantenidas por largo tiempo si es necesario. Almacenamiento después de la colección Refrigerar a 4°C si los especímenes se recibirán en el laboratorio antes de las 48 horas o congelar a -70°C. Medio de transporte Cary-Blair u otro medio de transporte conveniente (NO debe usarse glicerol salino de tampón para el transporte de muestras de V. Transporte Tubos sellados o recipientes a prueba de pérdidas. lo antes posible luego del comienzo de la enfermedad (preferiblemente dentro de los cuatro primeros días) y antes de comenzar el tratamiento con antimicrobianos.

Vibrio cholerae o Salmonella (incluido el serotipo typhi). hay veces en que se pueden enviar muestras fecales a un laboratorio para el diagnóstico de infección por S typhi . Sin embargo. Una vez que las muestras de un brote de enfermedad diarreica llegan al laboratorio. los laboratoristas deben seguir los procedimientos para el aislamiento de Shigella o V.Coprocultivo • Medios de transporte para muestras fecales Información relativa a los medios apropiados para el transporte de muestras fecales que se sospecha contienen Shigella. por lo que los laboratorios no reciben normalmente un gran número de muestras fecales durante los brotes de tifoidea. según si los informes recibidos indican que el brote parece ser disentería o una enfermedad parecida al cólera. cholerae. Las personas de quienes se sospecha que pueden tener tifoidea presentarán por lo regular fiebre sin diarrea.

hasta el fondo del tubo del medio de transporte. enfríe el medio de transporte durante 1 a 2 horas en un refrigerador o caja nevera antes de utilizarlo. también debe obtenerse una muestra en el hisopo. Para seguir el muestreo de las heces en el hisopo: a) Inserte inmediatamente el hisopo que contiene material fecal dentro del medio de transporte. Si están presentes mucus o detritus del epitelio intestinal.Coprocultivo • Colocación de las heces en el medio de transporte Si es posible. Se puede obtener una pequeña cantidad de heces insertando en ellas un hisopo de punta de algodón estéril o de poliéster y rotándolo. . b) Empuje el hisopo completamente.

d) Ponga nuevamente la tapa de rosca en el tubo del medio de transporte y ciérrela bien. . e) Coloque el tubo en el refrigerador o en la caja nevera.Coprocultivo c) Rompa la parte superior del palillo con los dedos y deséchelo.

si las muestras se van a examinar para detectar la presencia de más de un agente patógeno. El número de hisopos necesarios dependerá del número de placas a inocular.5 pulgadas) y rótelo. . c) Saque el hisopo del esfínter rectal y examínelo para estar seguro de que hay material fecal visible en el hisopo. b) Inserte el hisopo por el esfínter rectal 2 a 3 cm (1 a 1. En general. Los hisopados rectales pueden obtenerse como sigue: a) Humedezca el hisopo en medio de transporte estéril. repita el procedimiento con el mismo hisopo. debe permanecer en el tubo hasta que sea procesado en el laboratorio. (Si no. y ambos hisopos deben ser insertados dentro del mismo tubo de medio de transporte. e) Ponga el tubo en un refrigerador o caja nevera.Coprocultivo • Obtención de hisopados rectales Algunas veces se obtienen hisopados rectales en lugar de muestras de heces. será necesario obtener al menos dos hisopos con heces o rectales por paciente. Una vez que el hisopo está colocado en el medio.) d) Inserte inmediatamente el hisopo en el medio de transporte en frío (como se describe en la sección anterior).

Aislamiento y Cultivo de Salmonellas  Al igual que el resto de Enterobacteriaceae. S typhi es un bacilo (bastón) gramnegativo .

paratyphi C) son mucho menos frecuentes que los de S. las infecciones por S. enteritidis. Los serotipos “paratifoídicos” de Salmonella causan un síndrome similar a la fiebre tifoidea. como S. S. excretores persistentes o portadores crónicos asintomáticos.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas La bacteria Salmonella serotipo typhi (S.000 muertes al año en todo el mundo. typhi se transmiten por los alimentos y el agua contaminados con heces de personas con infección aguda. Como otros patógenos entéricos. En raras ocasiones. otros serotipos de Salmonella. S. agente etiológico de la fiebre tifoidea. typhi. paratyphi B y S.6 millones de casos y 600. pueden también causar “fiebre entérica”. causa alrededor de 16. Los aislamientos de los serotipos paratifoídicos (por ejemplo. paratyphi A. typhi). .

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selectivos y altamente selectivos. .Aislamiento y Cultivo de Salmonellas Las Salmonellas se pueden aislar en un Agar Sangre. pero por su importancia en muestras clínicas se han elaborado diversos medios diferenciales.

Aislamiento y Cultivo de Salmonellas NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-114-SSA1-1994. BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE SALMONELLA EN ALIMENTOS . Establece 6.2 Caldo de enriquecimiento .1.

0. .00 g • L-cistina 0.2 a 25C Preparación • Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril y distribuir en volúmenes de 10 y 225 ml en recipientes estériles. tomando entonces un color salmón.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas 6.0 . De preferencia usarlo el mismo día de su preparación. • Si se desea conservar el medio por varios días.01 g • Agua destilada 1.00 g • Lactosa 4. puede exponerse al calor en autoclave por 5 min a 110C.00 g • Selenito ácido de sodio 4.2.1 Caldo selenito-cistina Fórmula • Triptona o polipeptona 5.00 l • pH final: 7.1. según se requiera. • El caldo así preparado es transparente.00 g • Fosfato disódico 10.

.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas • Caldo de selenito (SEL) El caldo de selenito (SEL) se utiliza frecuentemente como un caldo de enriquecimiento para Salmonella. porque también puede utilizarse como enriquecimiento para Shigella. El SEL solamente debe ser incubado durante 14–16horas a 35°C–37°C. Control de calidad: Después de enriquecer toda la noche en SEL. incluida S typhi. Después de la incubación. Salmonella spp. EH o DXL). el caldo de selenito debe ser estriado en un medio de agar selectivo (por ejemplo. Para cualquier laboratorio puede ser ventajoso utilizar el SEL. produce típicamente un crecimiento de bueno a excelente cuando es estriada en agar MacConkey.

2. en porciones de 10 y 225 ml. El medio una vez adicionado de yodo no debe calentarse y debe usarse el mismo día de su preparación.0 g • Carbonato de calcio 10. Guardar en refrigeración. • Antes de usar el medio.1 Preparación • Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril.1% por cada 100 ml de caldo.0 g • Tiosulfato de sodio pentahidratado 30.0 g • Sales biliares 1. agregar 2 ml de una solución yodo-yoduro y 1 ml de solución de verde brillante al 0.0 . agitando constantemente. .0 g • Agua destilada 1. 0.0 l • pH final: 7.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas 6. en recipientes estériles.1.2 Caldo tetrationato Fórmula Ingredientes Cantidades Unidades • Proteosa peptona o triptona 5. • Distribuir.

3 Mezclar el tubo con caldo selenito cistina y estriar en agar xilosa lisina desoxicolato (XLD).2 Incubar de 18 a 24 h a 35 C o. en sustitución del caldo tetrationato puede emplearse el medio Vassiliadis-Rappaport.2 Aislamiento de Salmonella • 8.2. • Efectuar el mismo procedimiento para el caldo tetrationato. 2 h a 35C. Como alternativa. agar verde brillante (VB) y una tercera caja con cualquiera de los medios selectivos adicionales (agar entérico Hektoen. • Incubar las placas 24 hrs. • 8. para alimentos fuertemente contaminados a 42C por el mismo periodo. agar Sulfito de Bismuto o Agar SS).Aislamiento y Cultivo de Salmonellas 8.2. transferir respectivamente 1 ml de la mezcla a un tubo que contenga 10 ml de caldo tetrationato y a otro con 10 ml de caldo selenito cistina. Estriar los productos que fueron directamente enriquecidos en medios selectivos. • 8. .1 Cerrar firmemente el tapón de rosca de los matraces con los cultivos de preenriquecimiento y agitar suavemente.2.

En algunos casos las colonias pueden aparecer completamente negras.4 Examinar las placas para investigar la presencia de colonias típicas de Salmonella. .Aislamiento y Cultivo de Salmonellas 8. de acuerdo con las siguientes características: • Agar XLD: colonias rosas o rojas que pueden ser transparentes con o sin centro negro.2.

las bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias amarillas.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas  Agar VB: colonias rojas o rosas que pueden ser transparentes rodeadas por medio enrojecido. .

.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas  Agar entérico Hektoen: colonias verdes o azulverdes con o sin centro negro. En algunos casos las colonias pueden aparecer completamente negras.

incubar 24 h adicionales. con o sin brillo metálico. Generalmente el medio circundante (halo) es café. . Algunas cepas producen colonias verdes sin la formación del halo oscuro. Si las placas no muestran colonias típicas o no se observa crecimiento. grises o negras.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas  Agar Sulfito de Bismuto: las colonias típicas de Salmonella pueden ser cafés. tornándose posteriormente negro.

Las colonias fermentadoras de la lactosa son rojas. Algunas colonias dan centro negro. . ocasionalmente opacas.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas  Agar SS: colonias translúcidas.

3 Identificación bioquímica .Aislamiento y Cultivo de Salmonellas  8.

4.4 Identificación serológica • 8.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas 8.1 Ensayo de los antígenos somáticos de Salmonella (Antisuero polivalente O) .

.Aislamiento y Cultivo de Salmonellas Por lo tanto. si deseamos hacer un buen diagnóstico bacteriológico para el aislamiento e identificación de bacterias entero .patógenas debemos utilizar los medios de enriquecimiento como alternativas que nos ofrecen resultados efectivos.

Aislamiento y Cultivo de Salmonellas Algunos estudios de investigación describen un incremento en la recuperación de Salmonellas hasta de un 700% con el uso de medios de enriquecimiento .

frecuentemente conocida como “disentería”. las infecciones por Shigella causan diarrea aguda no sanguinolenta que no se puede distinguir clínicamente de la diarrea causada por otros agentes patógenos entéricos . Sin embargo. en casi la mitad de los casos.Aislamiento y Cultivo de Shigellas • El sello distintivo de la infección por Shigella es la diarrea con sangre.

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.Aislamiento y Cultivo de Vibrio La mayoría de los aislamientos de Vibrio cholerae obtenidos durante brotes de cólera serán de los serogrupos toxigénicos O1 u O139.

I .

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Antibiograma .

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Coprocultivo .

Coprocultivo Gracias .