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COLORACION

ES
TRICRÓMICA
S

COLORACIONES
TRICRÒMICAS

Tinciones especiales que permiten
identificar fibras colágenas
principalmente

Utiliza colorante nuclear + 2
colorantes aniónicos

El fundamento de estas tinciones
depende de varios factores
 1



Permeabilidad:

De acuerdo a la interacción del colorante en la estructura, se
genera un gradiente de penetración distinto para cada grupo
de colorantes, responsable de la diferente coloración de cada
estructura; por ello los colorantes utilizados para las
diferentes tinciones tricrómicas se clasifican en:
Colorantes nucleares: laca de hematoxilina férrica
Colorantes citoplasmáticos: ácido pícrico, naranja G, naranja
de metilo, ponceau de xilidina, escarlata Biebrich, azofloxina.
Colorantes del conectivo: derivados del anillo trifenilmetano:
fucsina ácida, azul de anilina, verde luz SF.

 2-

Afinidad:
Las fibras tienen afinidad por los colorantes
ácidos que están cargados negativamente.

3-Valor del pH a que se utiliza los colorantes:
Tienen mejor apetencia por las fibras
colágenas en medio fuertemente ácido
(específicamente a un pH optimo en torno al
1.5), mientras que un pH de 2.5 su afinidad por
los aniones decrecen hasta el
50%, de forma
que con este pH se obtiene una coloración difusa
e incompleta del estroma finamente fibrilar.

 4-

Fenómenos de mordiente:
Existen numerosos mordientes de
distinta naturaleza, entre los más
importante: Ácidos: fosfotúngstico,
molíbdico, crómico, pícrico. Sales:
sublimado de oro, sulfato aluminico
potásico. Otros: tetróxido de osmio,
permanganato potásico.

Tipos de métodos tricrómicos: .

. por ejemplo para el de Mallory el fijador debe contener dicromato. sin embargo la de Gomori y Masson son consideradas confiables por la reproducibilidad de sus resultados y la simplicidad operativo. Van Gieson cualquier fijador. Se considera la coloración de Van Gieson la más selectiva de las fibras colágenas.  Para el procedimiento técnico debe tenerse en cuenta la fijación del tejido ya que dependiendo del método a utilizar varían los fijadores. para el de Masson y Gomori es de elección el Bouin.

Tinción de Mallory  Frank Burr Mallory (18621941) fue un patólogo estadounidense en el  hospital de la ciudad de Boston  y profesor de patología en la  Escuela de Medicina de Harvard      Sus contribuciones en el campo de la patología incluidos mejora las técnicas y la normalización de la tinción de tejidos  .

. la fibrina y algunas estructuras del sistema nervioso central. piel. etc.  Orange G  Azul de anilina. Mallory está constituida por tres colorantes:  Fucsina ácida. lengua. glándulas. Desarrollada por Frank B. Es utilizada para el estudio del tejido conectivo.Tinción de Mallory (1900) Para colorear selectivamente las estriaciones musculares. hongos.

eritrocitos. Fucsina ácida. Tiñe de color rojo a amarillo. citoplasma. músculo.  Orange G Colorante ácido que se fija al tejido conectivo.  Azul de anilina. Colorante básico que en presencia del ácido fosfotúngstico tiñe la colágena de color azul. Colorea de rojo a los núcleos. .

                 25 gr.                    3. Nota: agregar 5 ml de ácido acético glacial a 95 ml de la solución de Zenker al momento de usarla. Orange o Naranja G. ml. Yodo                                            1.                      100.                   50 gr.0 gr. Tiosulfato de Sodio al 3 %. Fijador de Zenker. Tiosulfato de sodio.5 gr.5 gr. .000 ml.   Solución de Yodo. Agua destilada. Yoduro de potasio.0 gr.                 2. ml. Dicromato de Potasio.0 gr. Cloruro de mercurio.Fuschina ácida 0. Azul de anilina.                          0.5 % Agua destilada                100 ml Fuschina ácida                     0.   Ácido fosfotúngstico                1.                          300 ml. Azul de anilina Orange G. Sulfato de Sodio.0 gr.                         100. Agua destilada.                        10 gr.            Agua destilada                            1.0 gr.                      2. Agua destilada.

 Fuschina ácida de 1-5 min.  Remover los cristales de cloruro de mercurio con Yodo por 5 min.  Deshidratar en alcoholes de 96% . .  Transferir directamente al Azul de Anilina Orange G por 30-60 min.  Cubrir con resina sintética. Aclarar con Tiosulfato de sodio 5 min.PROCEDIMIENTO:  Desparafinar e hidratar en agua destilada.  Enjuagar en agua destilada por 2 min.100% y aclarar en Xilol: 2 cambios de 2 minutos cada uno.  Lavar en agua corriente por 10 a 20 min.

 Fibras colágenas             azul.  Eritrocitos.  Células cromófobas        amarillo .  Células basófilas.                      amarillos.            azul.RESULTADOS  Núcleos                            rojo.

El tejido conectivo denso modelado se forma por el ordenamiento paralelo de las fibras colágenas (teñidas de azul) entre las que podemos observar a los fibroblastos (núcleos ovoides de cromatina laxa) y fibrocitos (núcleos alargados de cromatina densa) que se disponen paralelos también a las fibras colágenas. Las fibras colágenas son las más abundantes y gruesas del tejido conectivo(color blanquecino) A la derecha se observa la inserción con el músculo estriado esquelético cuyo citoplasma presenta bandas oscuras y claras. .

FOTOMICROGRAFIA S DE FIBRAS COLÀGENAS Tricròmico de Mallory Tricròmico de Van Gieson .

Tricròmico de Masson H/E .

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 Esta preparación digital muestra lóbulos hepáticos del hígado de cerdo en un corte en parafina de 7 um de espesor teñido con la técnica del Tricrómico de Mallory.  .

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TRICROMICA DE MASSON .

. donde se graduó en 1909.PIERRE MASSON(18801959)  Patólogo canadiense. También fue autor de un libro de tumores cerebrales (1923) y de más de 120 artículos científicos.  Masson fue muy conocido por sus trabajos sobre los tumores del cerebro y el sistema nervioso. además de su reconocimiento por el desarrollo de la famosa técnica de coloración tricrómica. Estudió medicina en la Universidad de París. que se convirtió en la estándar de los laboratorios de patología de la época.

las fibras reticulares. es una técnica de coloración especial que permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces. el citoplasma y las  fibras de colágeno. aunque en menor intensidad. . Se emplean tres colorantes para diferenciar el  núcleo celular.Tricrómico de Masson  La tinción tricrómica de Masson. diseñados para dar resistencia. también evidencia. al igual que otras tinciones tricrómicas.

Solución B: Cloruro férrico + Agua destilada + Acido clorhídrico *Solución de Escarlata de Biebrich/Fucsina ácida .Solución A: Hematoxilina + Alcohol 95% .Acido fosfotúngstico + Acido fosfomolíbdico + Agua destilada *Solución Azul de anilina o Azul de toluidina .Azul de anilina + Agua destilada .Escarlata de Biebrich + Fucsina ácida + Acido acético *Solución Acido Fosfotúngstico/Fosfomolíbdico .Colorantes  *Hematoxilina férrica de Weigert .

Ya que el citoplasma es mucho menos permeable que el colágeno. Las secciones entonces se tratan con  ácido fosfotúngstico y/o fosfomolíbdico.  Los ácidos fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos tienen numerosos grupos ácidos que probablemente actúen como medio de unión entre el colágeno y el azul de la  anilina. el pH de la solución fosfotúngstico/fosfomolíbdico también aumente la coloración y ayude al colágeno en la difusión o el retiro de los colorantes  . el músculo y el colágeno se unirán a los tintes ácidos.Fundamento En primer lugar. que es el tinte del colágeno. Probablemente.  Todos los elementos acidófilos del tejido tales como el citoplasma. los ácidos fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colágeno pero no del citoplasma. se tiñen las secciones con un tinte  ácido tal como escarlata de Biebrich.

96º y 100º  Hematoxilina férrica de Weigert  Fucsina escarlata  Ácido fosfomolíbdico al 5 %  Verde luz  H2O destilada  H2O corriente  Medio de montaje .Materiales  Xileno  Etanol de 50º. 90º. 80º. 70º.

Procedimiento .

queratina y fibras musculares = Rosa.Resultados * Núcleos = Negros * Citoplasma. rojas y café * Fibras colágenas = Azules-Verdes .

IMAGENES .

Zona profunda de la lengua de una rata.seccion de parafina de 8um de grosor teñidas con tricròmico de Masson .

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TRICROMICO DE GOMORI .

pH ácido se encuentra entre 2. El tricrómico de Gomori es un método idóneo para teñir fibrina.5 y 2.7 (ligeramente por encima del óptimo para la tinción del colágeno . tejido muscular y citoplasmas.

El tratamiento previo de las secciones con solución de Bouin caliente intensifica la tinción.FUNDAMENTO  Esta técnica combina un colorante plasmático y un colorante de fibras conectivas (verde luz/azul de anilina) en una solución de ácido fosfotúngstico y ácido acético . . Las fibras de colágeno toman los iones de tungstato formando un complejo al que se une el verde luz. El ácido fosfotúngstico favorece la coloración roja de músculo y citoplasmas. El baño de ácido acético hace los colores más trasparentes pero no altera el balance de color.

se debe lavar la muestra en abundante alcohol de 70º hasta la decoloración de la misma para asegurar la total eliminación del ácido pícrico. Una vez fijado se puede almacenar el tejido en etanol de 80º.  Solución tricrómica:  0.  Solución verde luz (el verde luz puede ser sustituido por el azul de anilina):  5 g de verde luz.8 g de ácido fosfotúngstico.6 g de cromotropo 2R.  250 cc de agua destilada. .REACTIVOS  Solución de Bouin: tras la fijación.3 g Verde luz  1 cc de ácido acético glacial.  0.  2 cc de ácido acético.  0.  100 cc de agua destilada.

 Solución acuosa de ácido acético al 0.  1 ml de ácido clorhídrico concentrado. .  Se deben utilizar a partes iguales cada una de las soluciones matrices.0 g de cloruro férrico al 29%.5%.  Solución diaria de hematoxilina férrica de Weigert:  Solución matriz A:  1.  95 ml de agua destilada. La hematoxilina de Weigert puede ser sustituida por la hematoxilina de cromo de Gomori. La solución diaria de la hematoxilina de Weigert puede reutilizarse durante aproximadamente 2 semanas.  Solución matriz B:  4.0 g de hematoxilina de Weigert en 100 ml de etanol al 95%.

5% durante 15 s (se puede utilizar también ácido acético al 1%) 8. 7. Teñir con hematoxilina de Weigert (ver variantes) durante 10-13 minutos. 5. se diferenciará con una solución de ácido acético al 1%. Lavar en agua destilada. 3. 6.7 gr de ácido fosfotungstico. Desparafinar e hidratar. Diferenciar en la solución de ácido acético al 0. 2. Teñir con la solución tricrómica durante 15 minutos. a la cual se le agregarán 0. Deshidratar con alcoholes. Si las secciones son muy rojas. 4. Lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo. 9.PROCEDIMIENTO 1. aclarar con xileno y montar . 11. Teñir con la solución de verde luz durante 20 o 30 s (ver variantes). 10. Realizar mordentaje en líquido de Bouin durante 1 hora a 56 ºC o 24 horas a Tª ambiente. Realizar un lavado prolongado con agua corriente.

Fibras musculares.ANALISIS DE RESULTADOS 1. Núcleos: azul negruzco. fibrina y citoplasma: rojo. cartílago. . Colágeno. 2. mucinas y membranas basales: verde. 3.

Tricrómico de Gomori X40.Numeroso bastoncillos fucsinófilos dispersos por las fibras musculares. .

Los espacios vacíos corresponden a las células caliciformes.Coloración de Tricrómico de Gomori. Primer mes TRICROMICO DE GOMORY 100X . .Se aprecia compromiso subendotelial caracterizado por infiltrado inflamatorio transmural que obstruye la pared vascular (vasculitis / arteritis).

TRICRÓMICO VAN GIESON .

bacteriólogo y neuropatólogo. • Van Gieson introdujo la mancha de ácido pícrico (tinción de Van Gieson) para neurohistología en 1889.24 marzo de 1913. Long Island . .TINCION TRICROMICA DE VAN GIESON • Ira Thompson Van Gieson (1866. Nueva York Murió a los 47 años en el Hospital Bellevue) fue un neurólogo americano. psiquiatra.

 MEZCLA .ácido pícrico .la hematoxilina férrica de Weigert .fucsina ácida  COLOREA  Tejido conjuntivo (fibras) .

.aplica al tejido conjuntamente.La hematoxilina y el mordiente se almacenan por separado .El color resultante es negro o púrpura muy oscuro.Hematoxilina de Weigert o hematoxilina férrica .tinción de núcleos .mordiente :aluminio potásico o aluminio amónico .HEMATOXILINA FÉRRICA DE WEIGERT . .Fórmulamolecular:C16 H14 O6 .

de ahí su nombre de "ácido".ÁCIDO PÍCRICO  .2.4. C6H2OH(NO2)3 .  sales del tipo picrato coagulan las proteínas de los tejidos .6-trinitrofenol….. haciendo que el H del grupo OH se disocie con facilidad. dando entonces una disolución ácida del mismo.  fijador de muestras histológicas.Además los grupos nitro (fuertemente  electronegativos) estabilizan la base conjugada.

 color rojo purpura . modificados mediante la adición de grupos sulfónicos.FUCSINA ACIDA  Fórmula químico: C20 H17 N3 Na2 O9 S3  Ácido fucsina es una mezcla de fucsina básica.

FUNDAMENTO  Se inicia con la tinción nuclear con Hematoxilina de Weigert. Fibras colágenas rojas. permitiendo la coloración con la fucsina ácida o una solución acuosa saturada de ácido pícrico. Por otra parte al ser el ácido pícrico una molécula de pequeño tamaño logra teñir el citoplasma célular de color amarillo. glicina e hidroxilisina). . Luego es una solución en medio ácido se entrega a los aminoácidos carga positiva (prolina.

48 g .. 90 ml Se debe dejar madurar durante algunas semanas o si está recién preparada.FeCl3 6H2O ………………………………….Cloruro férrico anhidro (FeCl 3 o ……………..Hematoxilina cristalizada ……………………. . 2.Agua destilada ……………… 100 ml Solución de trabajo: Solución 1 ………………………………………………….PROCEDIMIENTO FIJACIÓN: cualquier fijador es válido SOLUCIONES: Hematoxilina férrica de Weigert: Solución 1: .. se le agrega inmediatamente antes de su uso 0.Etanol al 95% …………………………… 100 ml Solución 2: . 1. 1 g .Agua destilada ………………………………100 ml Solución 2: Solución acuosa saturada de ácido pícrico: .25 ml de ácido clorhídrico concentrado .Fucsina ácida ………………………………… 1g . En este momento la solución se torna de color negro-azulado que rápidamente vira a pardo-negruzco. 1 ml Picro-fucsina de Van Gieson: Solución 1: . 2 g . 10 ml Solución 2 ………………………………………………….5 g .Preparar en fresco y añadir: * Ácido clorhídrico concentrado ………………………….Ácido pícrico ………………….Agua destilada ………………………………100 ml Solución de trabajo: -Mezclar a partes iguales la solución 1 y 2..

Núcleos: azul – negruzco .Teñir en la solución de trabajo de Van Gieson durante 30 segundos a 1 minuto.Completar la deshidratación con rapidez. .Colorear los núcleos con hematoxilina férrica de Weigert durante 10 minutos.Xilol: 2 enjuague .Citoplasmas: amarillo . 2 minutos c/u.Lavar rápidamente en etanol al 70%. .Colágeno: rojo intenso   . . .Alcohol 95%: 3 baños.Montar    RESULTADOS: . .Alcohol – xilol: 1 enjuague . OPERACIÓN: .Aclarar en agua destilada. .Desparafina e hidratar: .Alcohol 95%: 3 enjuague . aclarar: . 2 minutos c/u.Lavar en agua corriente durante 5 minutos.Secar con papel de filtro. . .Xilol: 3 baños.Colocar las láminas en la estufa a 60º por 3-4 minutos. .

VAN GIESON H. Nódulos de gran tamaño: dentro del nódulo superior se observa un espacio porta.COLORACION TRICROMICA DE VAN GIESON TRICROMICO NUCLEAR COLAGENO T. FERRICA FUCSINA ACIDA Arteri a CITOPLASMA ACIDO PICRICO CIRROSIS MACRONODU LAR . Los nódulos están delimitados por bandas netas de tejido .

Van Gieson. Van Gieson (400X). Van Gieson. próstata. 400x. (FP).Corte longitudinal de la inserción dorsal de la valva atrioventricular derecha (VAVD) a la pared ventricular (VD). . 8x Corte histológico del músculo papilar posterior del ventrículo izquierdo que muestra fibras de conducción cardíaca. Estroma glandular constituido por tejido conjuntivo con fibras colágenas (rojo) y musculares lisas (amarillo).

10X .Corte longitudinal del yeyuno Tinción: Van Gieson Tinción de Van-Gieson: Afectación de arterias de pequeño y mediano calibre en la grasa  del perimisio.