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Aplicación de luminol

en huellas
de escena del crimen

William Ivan Alejandro LLANOS TORRIC

Julio de 2.010

El lugar de los hechos

La fase más importante en la
investigación
 Es

irrepetible
 Han de localizarse todos los indicios
para su posterior envío al laboratorio.
 Si los indicios no se detectan, no se
preservan,
no
se
embalan
adecuadamente, no llegará a haber
identificación criminalística.

Situaciones características en el
Lugar de Hechos
Siempre es posible que se hayan producido
mezclas, contaminaciones o pérdida de indicios.
 Los indicios son frágiles y pudieron haberse
manipulado.
 Los indicios pueden pasar inadvertidos.
 Los indicios pueden sufrir alteraciones en sus
características

Tipos de indicios

Sangre:
Sustancia viscosa, roja y espesa, presente en el
sistema circulatorio (arterias, arteriolas,
capilares y venas), constituidas por una parte
líquida o plasma y una parte de elementos
celulares (hematíes, leucocitos y plaquetas).

.Identificación del individuo de quien procede  “Podemos asegurar que con respecto al ser humano.999.  “Cada nuevo individuo es único en su información genética. propio de cada individuo y diferente de cualquier otro. Karl Landsteiner Disertación Nobel. 1930. existen numerosas diferencias sanguíneas individuales que ya han sido puestas de manifiesto. e indudablemente todavía existen otras que aún no han sido establecidas”. de aquí el término de individualidad biológica. excepto en el caso de gemelos monocigotos”. Zannoni – Primarrosa 1. En cualquier parte del organismo siempre se encuentra el mismo material genético.

 Termorregulación. .Sangre: Entre sus funciones se tienen:  Trasportar el oxígeno y eliminar el anhídrido carbónico.  Promover las defensas del organismo frente a las infecciones.  Regulación osmótica.  Nutrición celular.

Cálculo:  6 – 8 % del peso corporal.Sangre: Volemia: Volumen normal de sangre de una persona.  13 / 14 parte del peso corporal. . M – 10%.

Sangre: Agua – 90% Fracción Líquida Sólidos – 10% Composición Glóbulos Rojos. Proteínas. Glúcidos. Enzimas. Plaquetas. . Sales Minerales. Lípidos. Fracción Sólida (Elementos Celulares) Glóbulos Blancos.

500.  5.Sangre: Elementos Celulares Glóbulos Rojos (Hematíes o Eritrocitos):  Anucleados.5 m diámetro. circulares.000.  4.  2 – 3 m espesor. bicóncavos.000 x mm3H. .000 x mm3H.  85 M volumen.  7 – 7.

00 mm3.  Granulocitos E: 1. .5% parásitos.  Linfocitos: 26% detectan y atacan células cancerosas.  Monocitos: 6% devoran células muertas o dañadas (Macrófagos).500 – 7.5% respuestas alérgicas.Sangre: Elementos Celulares Glóbulos Blancos (Leucocitos):  Nucleados.  Granulocitos B: 0.  6.

Hemo: Núcleo porfirínico formado por cuatro grupos pirroles unidos por puentes de meteno (=C) que constituyen anillos tetrapirrólicos. 1 Molécula de Hemo = 4 Grupos Hemo. 16 Isómeros – Nº 9 presente en elementos biológicos. Un átomo de hierro está ligado a los cuatro nitrógenos en el centro del anillo.500 – 96% Globina – 4% Hemo Globina: Fracción proteica constituida por cuatro cadenas polipeptídicas.Hemoglobina: Estructura: Cromoproteína PM 64. .

 Reconstrucción de los hechos.  Forma.  Ubicación.  Intensidad de las lesiones.  Identificación de sujetos. .  Color.  Admitir o refutar alegatos.  Dimensiones.  Número. Importancia Criminalística:  Data de los hechos.Sangre: Examen visual preliminar:  Aspecto.

Reciente: Roja.Color: Ropa blanca y soportes claros y absorbentes:     Contornos muy nítidos por penetrar la sangre en los tejidos. Antigua: Morena o parda y aún negruzca. más o menos resquebrajadas según condiciones ambientales. . ligeramente elevadas como pequeñas escamas brillantes. Una vez seca: diminutas masas.

 Manchas por contacto. Manchas de proyección.  Manchas por limpiamiento.  Manchas por arrastre. Forma:  Manchas por impregnación.  Manchas por escurrimiento. .

 Reconstrucción de los hechos. Importancia:  Intensidad de las lesiones.  Admitir o refutar alegatos. .

Determinación de especie. Identificación del individuo. Cantidad de sangre que compone la mancha. Grupo etario. Región del cuerpo de donde procede la sangre. agentes patógenos). Agentes extraños a su naturaleza (medicamentos. drogas ilícitas. Sexo genético de la persona de quien procede la sangre. Data de la mancha de sangre.Problemas forenses que plantea una muestra de sangre:          Naturaleza sanguínea. .

000 Luminol Hidracida del Ácido Quimioluminiscencia Alfa Amino ftálico blanco azulada 1 / 5.000 .000.000 O .Tolidina Orto – Tolidina Azul Verdoso 1 / 200.000 Medinger Verde de Malaquita (leuco derivado) Verde 1 / 1.000.Naturaleza Sanguínea: Métodos de Orientación: ¿Es Sangre? TÉCNICA INDICADOR SEÑAL SENSIBILIDAD Adler Bencidina Azul Intenso 1 / 200.000 K – Meyer Fenolftaleína Rojo 1 / 1.000.

 Biológicos.  Microquímicos. . Histológicos. Métodos De Certeza:  Físicos (Cromatográficos – Instrumental).

Takayama → Cristales de Hemocromógeno. . Guarino → Cristales de Hematoporfirina (Ácida – Alcalina).Métodos de Certeza: Microquímicos Teichmann → Cristales de Clorhidrato de Hematina.

Determinación de Especie: Histológicos Uhlenhutt: Proteínas Séricas (Halo Isogenético). . Hb F y Hb S. HbA2. Métodos Bioquímicos ADN Hexagon Obti – Test (Banda Azul): Hemoglobina Humana Sub Tipos HbAo.

c. C. E.Sistemas tendentes a la determinación de la identidad biológica: Sistemas Eritrocitarios:  ABO: A. Kidd. MN. N. AB. Cc. Ee. y Sub Grupos.  MNS: M. otros.  Rh: D. e.  Otros sistemas: Kell. d. Diego. Lewis. P. O. . B.

Sistema ABO: Antecedentes A Antígenos Aglutinógenos B α → Alfa – Anti A Anticuerpos β → Beta – Anti B Test de Landsteiner Incompatibilidad Sanguínea .

LA PRUEBA DE LUMINOL Fe .

.4-diona) fue sintetizada por Smicthz en el año de 1902. 3-dihidro-phthalazino-1.LUMINOL El Luminol químicamente denominado como: 3 aminophtalahidrazida (5-amino2. que esta sustancia produce una brillante quimioluminiscencia (producción de luz por reacción química: Una fuerte luz fluorescente azul en soluciones ácidas con pH menor de 7). comprobando a la vez.

Posteriormente. en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel. . Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno. observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7). En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina. por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba. En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL.

por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba. En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL. en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel. . Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno.Posteriormente. En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina. observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7).

Este investigador roció sangre en varios substratos como paredes. como prueba presuntiva de detección de sangre. . Seguidamente aplicó el Luminol y fotografió los resultados.En el año de 1937 se reportó la primera aplicación forense del Luminol. y tierra dejándola expuesta por 14 días a las condiciones ambientales. En esta ocasión el Luminol funcionó bien con manchas de sangre frescas y viejas. que en las manchas frescas o nuevas. piedras. se observó mayor respuesta quimioluminiscente en las manchas de sangre viejas. gradas. dicho ensayo fue realizado por Walter Specht. Todas las áreas que contenían manchas de sangre presentaron luminiscencia que perduró por 15 minutos.

McGrath. debido a que en estas. para la detección de sangre. los investigadores Moody y Proescher. en papel. él notó que las manchas de sangre viejas. tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad. hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática. En 1942.En el año de 1939. daban respuestas más fuertes y prolongas. recomendó el uso de la prueba de Luminol. . obteniendo resultados satisfactorios. basándose en la investigación de Specht. aplicaron el Luminol.

ni análisis de marcadores genéticos (ADN). pero no reportan los efectos del reactivo en la determinación de grupo ABO en las manchas. En 1986 Thornton y colaboradores detectaron luminiscencia. a simple vista.Los investigadores Lytle y Hedgecock. en el año de 1978 estudiaron los efectos del Luminol en solución alcalina. en la sangre detectada por la prueba. concluyendo que no afectaba la actividad enzimática de los eritrocitos. proveniente de sangre que fue diluida 1:10000 partes. La prueba de Luminol es extremadamente sensible en la detección de sangre. .

daban respuestas más fuertes y prolongas. tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad. los investigadores Moody y Proescher. en papel. obteniendo resultados satisfactorios. McGrath. aplicaron el Luminol. él notó que las manchas de sangre viejas. recomendó el uso de la prueba de Luminol. En 1942. debido a que en estas.En el año de 1939. basándose en la investigación de Specht. . hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática. para la detección de sangre.

• Perborato de Sodio como agente oxidante. . La sangre es el sistema peroxidasa que cataliza la reacción. y el • Luminol como la sustancia a ser oxidada con la subsecuente emisión de luz.8.4-10.Fundamento teórico de la prueba de luminol La prueba del Luminol emplea: • el Carbonato de Sodio para crear una solución alcalina de pH 10.

Carbonato de Sodio 2. Luminol (5-amino-2.4-dione) . Perborato de Sodio Trihidratado 3.3-dihydrophthalazine 1.Reactivos utilizados para la prueba de luminol 1.

5 gramos de Perborato de Sodio en una balanza analítica.000 ml de capacidad. Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una probeta de 1. . 3.Preparación del reactivo 1.5 gramos de Luminol en una balanza analítica y colocarlos juntos en un recipiente limpio. Depositar la medida en un beaker de 1. Pesar 25 gramos de Carbonato de Sodio y 0. Pesar 3. 2.000 ml de volumen.

Agregar a esta solución la medida de Carbonato de Sodio y Luminol.Preparación del reactivo 4. 5. 8. Agitar hasta disolver por completo. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los 3. Agitar hasta disolver por completo. 7.5 gramos de Perborato de Sodio. Verter la solución disuelta en el atomizador. . 6.

• Aplicar el reactivo por aspersión. • Se debe procurar una completa oscuridad para la aplicación del reactivo.Cómo se aplica la prueba • Antes de la aplicación del reactivo el personal debe vestir prendas que lo protejan del contacto directo con el Luminol. Es imprescindible la utilización de mascarillas que impidan la inhalación del atomizado. en las zonas del escenario en donde se sospecha la presencia de sangre. .

esto con el objetivo de facilitar el levantamiento de muestra y el registro fotográfico.Cómo se aplica la prueba • En un lapso no menor de 10 segundos debe aparecer una reacción lumínica que evidencia la actividad peroxidasa que posee la sangre entre otras sustancias. . • De sospechar que los focos lumínicos se deben a la presencia de sangre (manchas de color y aspecto característico). se debe delimitar el área de reacción positiva con cinta adhesiva o con un marcador a base de agua. • Después de localizar los diferentes focos lumínicos se procede a evaluar la naturaleza de estos.

.

• La prueba de Luminol es presuntiva para detectar la presencia de sangre.Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba • Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto directo con la sustancia. Es necesario asegurarse de que todo el personal presente este debidamente protegido. . • La vida media del Luminol ya preparado. es de 8 horas. esto significa que requiere de otras técnicas como la determinación de especie para afirmar la presencia de sangre. por lo que debe tenerse la precaución de no exceder este tiempo en su aplicación.

permitiendo la realización de análisis posteriores de ABO y ADN. . es común obtener reacciones inespecíficas.Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba • Esta sustancia no es corrosiva y no mancha • Se ha observado que no tiene efectos destructivos e inhibitorios sobre la sangre. detergentes y productos de limpieza en general. • Una desventaja de esta técnica es que por ser basada en la actividad peroxidasa y esta estar presente en muchas sustancias tales como ciertos metales. jugo de fruta.

• El reactivo de Luminol muestra una alta sensibilidad ante la presencia de sangre.Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba • Antes de la aplicación de la prueba se debe realizar un ensayo previo con controles positivos. falsos positivos y negativos. se observan reacciones positivas en muestras diluidas. . hasta diez mil veces y capaz de detectar manchas de 25 años de antigüedad. para evaluar la efectividad del reactivo.

Esto coloca al indicio por debajo de los límites de detección.  Debido a que el luminol es hidrosoluble.Varios estudios han demostrado que el luminol provoca la pérdida de diversos marcadores genéticos.  . también puede diluir una muestra ya diluída.

arrastre. ya que ella muestra toda la labor realizada por el equipo de aplicación. etc. . como se manifestaron las manchas de sangre. como a la vez permitirá al juzgador en el proceso del debate.Fotografía de la prueba luminol La fotografía en la Prueba del Luminol es de suma importancia para la investigación criminalística. su dinámica.

.Fotografía de la prueba luminol Fijar fotográficamente escenarios reactivados con Luminol. espacio y luz. depende de varios factores: • ISO de la película • Tiempo de exposición • Duración de la luminiscencia del químico • Intensidad de la luminiscencia • Tomas en total oscuridad Para obtener imágenes positivas de la escena se deben de controlar varios factores. sujetos algunos a variaciones como el tiempo de exposición.

Fluoresceina .Luminol .Bluestar .Comparación con reactivos para pruebas de campo de sangre .

Pruebas comparativas .

Sangre lavada y repintada FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s .

Sangre lavada y limpiada del piso FLUORESCEINA BLUESTAR LUMINOL Tiempo de exposición: 20 s Tiempo de exposición: 1 m 15 s .

Sangre lavada en alfombra FLUORESCEIN BLUESTAR LUMINOL Tiempo de exposición: 20 s Tiempo de exposición: 1 m 15 s .

Sangre lavada con detergente para ropa FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s .

Gracias .