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VALIDACIÓN DE

METODOS
ANALITICOS
ROSA MARIA HIGUERA ARDILA
QUIMICA ESPECIALISTA EN INGENIRIA AMBIENTAL

VALIDACIÓN
NUMERAL 5.4.5.1
 LA VALIDACIÓN ES LA CONFIRMACIÓN POR
EXAMEN Y SUMINISTRO DE EVIDENCIA OBJETIVA
DEL
CUMPLIMIENTO
DE
LOS
REQUISITOS
PARTICULARES PARA UN USO ESPECÍFICO.

NORMA NTC-ISO-IEC 17025

VALIDACIÓN
TÉCNICA:

aplicación de un  PROCEDIMIENTO:

principio científico del cual se
ha demostrado

su utilidad

para

información

proveer

analítica. Ej: AA .

conjunto

de

instrucciones detalladas necesarias
para llevar a la práctica un método,
presentadas en forma escrita.

 PROTOCOLO:

Conjunto

de

MÉTODO: Adaptación de una

instrucciones que se deben seguir

técnica

sin

para

específica
determinado.

una
con

medición
un

fin

excepción

resultados

uniformes

procedimiento
laboratorio.

para
en

garantizar
de

un

cualquier

Seleccion
Metodos

Metodos Normalizados

Ultima Version Disponible

de

los

Metodos No Normalizados
Validados

Responder a las necesidades del cliente .
Informar al Cliente del metodo elegido
Apropiado para los ensayos que se
realizan

 Métodos no estandarizados
 Métodos desarrollados
 Métodos estandarizados usados fuera del
alcance propuesto
 Métodos estandarizados
modificados

ampliados

o

VERIFICACION
Es comprobar que el método
establecido en el laboratorio
funciona
para
las
condiciones disponibles en
el laboratorio

OBJETIVO DE LA
VALIDACIÓN O
VERIFICACION
Demostrar que el método utilizado por un
laboratorio es adecuado para los ensayos que
realiza.
También demostrar que las modificaciones que
pudieron haberse realizado no afectan su
desempeño, ni la confiabilidad de los
resultados-.

GRADO DE VALIDACION

CARACTERISTICAS DE LA
VALIDACIÓN

PARAMETROS DE
VALIDACION O
Selectividad
VERIFICACION
Especifico para el analito de interés

Sensibilidad

Aplicabilidad
Incertidumbre
de la medicion

Recuperacion
Repetibilidad

Exactitud
Sesgo y recuperación

Presicion

Rango de
aplicacion

Limite de
detección
del método
Responder a necesidades del cliente

CARACTERÍSTICAS DEL
MÉTODO
 QUÍMICOS:
 VOLUMÉTRICO
 GRAVIMÉTRICO

 TIPO DE
INSTRUMENTACIÓ
N

 PRECISIÓN
 POTENCIOMÉTRIC
NECESARIA
O
 GRADO DE
 MICROBIOLÓGICO
SENSIBILIDAD
 ESPECTROFOTOM  TIEMPO ANÁLISIS
ETRICO
 COSTO ANÁLISIS

ETAPAS DE LA
VALIDACION
 SELECCIÓN DEL MÉTODO:
 Rango de aplicación de acuerdo a las necesidades del
laboratorio
 Resultados reproducibles
 Que sea económico
 Que los reactivos y materiales se puedan conseguir
fácilmente en el mercado
 Que se cuente con los equipos
 Que los residuos que se generen se puedan eliminar
fácilmente.

ETAPAS DE LA
VALIDACION
 Una vez seleccionado el método se debe
tener una copia del procedimiento
analítico para conocer el método que se
va a aplicar, con el fin de llevar a cabo
el proceso.
 Fundamento del método: Se debe
elaborar un resumen de la parte química
y física del método.

ETAPAS DE LA
VALIDACION
 INVENTARIO DE EQUIPOS MATARIALES Y REACTIVOS.
Se debe tener un listado:
Reactivos : que sean grado analítico, que los patrones
para la estandarización sean trazables a la NIst
Equipos: Se debe asegurar que los equipos se
encuentran funcionando perfectamente y que estén
calibrados
Materiales : Se debe contar con los materiales necesarios
para la validación. El material de vidrio para mediciones
ser clase A

ETAPAS DE LA
VALIDACION

Plan de validación

Realizar
un plan para la preparación de
reactivos, estándares, muestras y muestras
adicionadas de acuerdo con el tiempo de vida
útil de cada uno y la estabilidad del analito.
Se debe contar con un formato de captura de
datos

ETAPAS DE LA
VALIDACION
PARTE EXPERIMENTAL O MEDICIONES (PREVALIDACIÓN)
Antes de iniciar el proceso de validación se debe establecer por
mediciones programadas:
Límite de detección instrumental
Límite de detección del método
Intervalo lineal del método
Linealidad
Sensibilidad
Variables instrumentales o metodológicas particulares del
laboratorio que puedan afectar el proceso de medición en aquellos
aspectos en que no se pueda seguir estrictamente el método.

PREVALIDACIÓN
LIMITE DE DETECCIÓ INSTRUMENTAL
Límite de detección instrumental (LDI): concentración de
analito que produce una señal superior a cinco veces la
relación señal/ruido del instrumento; se ha establecido en
1,645 veces el valor s ( desviacion estándar) de los
análisis de blancos. Resulta muy útil para valorar la
concentración de analito necesaria para producir una
señal que permita calcular un LDM estimado.

1,645 s

Bk

PREVALIDACIÓN
LIMITE DE DETECCION DEL METODO
LDM
Concentración de analito que, cuando se
procesa a través del método completo,
produce una señal con una probabilidad del
99% de ser diferente del blanco

LDM  C  t  s
Eb

n 1

Se añade el analito al agua grado reactivo o
a la matriz de interés para obtener una
concentración (CEb) próxima al LDM
estimado y se analizan diez partes de esta
solución

PREVALIDACIÓN
Valores de la distribución t (99%) para
calcular LDM
gl

99%

 

gl

99%

 

gl

99%

 

gl

99%

1

31,82

 

11

2,72

 

21

2,52

 

40

2,42

2

6,96

 

12

2,68

 

22

2,51

 

50

2,40

3

4,54

 

13

2,65

 

23

2,50

 

60

2,39

4

3,75

 

14

2,62

 

24

2,49

 

70

2,38

5

3,36

 

15

2,60

 

25

2,48

 

80

2,37

6

3,14

 

16

2,58

 

26

2,48

 

90

2,37

7

3,00

 

17

2,57

 

27

2,47

 

100

2,36

8

2,90

 

18

2,55

 

28

2,47

 

2,33

9

2,82

 

19

2,54

 

29

2,46

 

 

 

10

2,76

 

20

2,53

 

30

2,46

 

 

 

PREVALIDACIÓN

INTERVALO LINEAL

Intervalo en el cual la respuesta del
instrumento
o
señal
es
directamente
proporcional a la concentración y se
relacionan mediante una ecuación lineal
Aplica para métodos espectrofotométricos y
electrométricos, principalmente
No aplica para volumetría ni gravimetría
Para gravimetría depende de condiciones
particulares y del instrumento de medida

PREVALIDACIÓN
LINEARIDAD
Se refiere a la proporcionalidad entre la
concentración y la señal producida por
el instrumento y se debe verificar si en
el laboratorio se cumple el rango y tipo
de linealidad que reporta la literatura
del método.

PREVALIDACIÓN
SENSIBILIDAD:
Es una medida del factor de respuesta del
instrumento
como
una
función
de
la
concentración.
Normalmente se mide como la pendiente de la
curva de calibración.

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Bk

Blanco de reactivos y procedimiento

Eb

Estándar de concentración baja, ~LDM

Em

Estándar de conc. ~ 50% del rango

Ea

Estándar de conc. ~ 90% del rango

M1

Muestra natural conc. ~ <50% del rango

M2

Muestra natural conc. >>M1

M1Ab M1 adicionada con ~30% del valor de M1
M1Aa M1 adicionada ~50% del valor de M1
MC

Muestra o estándar certificado

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Antes de iniciar las mediciones, el analista
debe garantizar que el método está montado
y que el equipo funciona en condiciones
óptimas para la lectura de muestras. La parte
experimental consiste en la corrida de las
“muestras” y el registro de los resultados
para cada grupo diario de ENSAYOS (ensayo
No 1, ensayo No 2, ...ensayo No 7).
En total se deben correr un mínimo de 7
ensayos en días diferentes que pueden ser
continuos o alternos, con una diferencia
máxima de 3 días entre un ensayo y otro

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
CONDICIONES
Cada grupo de muestras se analiza en el
mismo día
Es recomendable que el proceso se inicie
siempre a la misma hora y temprano para
que se pueda cumplir con el análisis de
todas las muestras (posibles imprevistos)
Todo el material deberá ser lavado de
acuerdo con el procedimiento establecido
para cada uso y deberá ser sometido a la
revisión o control de calidad respectiva

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Es recomendable que el procedimiento sea
efectuado por un profesional Químico o con
la supervisión del mismo
El formato de captura de datos se deberá
diligenciar en el mismo momento en que se
obtienen los datos (no transcribir, copiar,
etc.)
Las cifras erradas se deben corregir
inmediatamente dejando constancia por
parte del analista en forma clara en que
consistió el error

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS
RESULTADOS
Se obtienen 14 datos por cada estándar
muestra

o

RECHAZO DE DATOS
Ordenar los datos menor y mayor (xbajo, xalto)

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS
RESULTADOS
Calcular T como: T = (xalto - xprom)/s para un
valor alto; T = (xprom - xbajo)/s para un valor
bajo
Si T calculado > T de tablas, el dato se
rechaza
Se pueden rechazar como máximo dos
datos; si la aplicación del criterio de
rechazo da positiva para más de dos datos,

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Valores críticos T para rechazo de datos
n

95%

 

n

95%

 

n

95%

 

n

95%

3

1,15

 

11

2,24

 

19

2,53

 

27

2,69

4

1,46

 

12

2,29

 

20

2,56

 

28

2,71

5

1,67

 

13

2,33

 

21

2,58

 

29

2,72

6

1,82

 

14

2,37

 

22

2,6

 

30

2,74

7

1,94

 

15

2,41

 

23

2,62

 

40

2,87

8

2,03

 

16

2,44

 

24

2,64

 

50

2,96

9

2,11

 

17

2,47

 

25

2,66

 

60

3,03

10

2,18

 

18

2,50

 

26

2,67

 

100

3,21

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
CÁLCULO DE VARIABLES QUIMIOMÉTRICAS
PROMEDIO
n

x 

x
i 1

i

n

Calcular el promedio de los 14 datos o
de los que quedaron después del
rechazo de datos

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION

EXACTITUD: Es el grado de aproximación entre
el valor obtenido experimentalmente y el valor
real o aceptado; normalmente se expresa en
términos de error. Se tendrán como referencia
los Patrones preparados en el laboratorio, y por
lo menos un patrón externo CERTIFICADO. La
concentración de estos patrones deberá estar
localizada dentro del rango de aplicación del
La
delexactitud
método expresada como el porcentaje de error,
se calcula por:
X exp  X real
% Error 
 100
X real

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
PRESICIÓN:
Indica el grado de concordancia entre los
resultados obtenidos para réplicas de una
misma muestra, aplicando el mismo
procedimiento
experimental
bajo
condiciones prefijadas. Usualmente se
expresa en términos de la DESVIACIÓN
ESTÁNDAR (S). Otra forma de expresar la
precisión es la Desviación Estándar Relativa
o COEFICIENTE DE VARIACIÓN (CV), que se
calcula :
n

s

 (x
i1

2

x
)
i

n -1

CV  s100
x

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
RECUPERACIÓN: Es la capacidad que
tiene un procedimiento analítico para
determinar
cuantitativamente
una
especie química que ha sido adicionada
a una muestra. Se expresa como
Porcentaje (%R) y se calcula como:
%R M 

C MA  C M
100
CA

donde:
CM = concentración promedio de la muestra no adicionad
CMA = medida de la concentración en la muestra adicionad
CA = concentración conocida adicionada a la muestra.

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION

MUESTRA ADICIONADA:
Es una muestra natural o real a la cual se le ha
adicionado una cantidad conocida del analito que se
estudia . Esta adición debe hacerse en la forma
prevista en el diseño de las condiciones de
estandarización para que sea reproducible.