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LIZMETH

CALDERN
JHANNON LOZANO
STEVEN CANTILLO
DAVID SILVA

PLSMIDOS

Son molculas de DNA circulares extracromosomales


que se encuentran en la mayora de las bacterias y
en algunas clulas de eucariontes.

CARACTERSTICAS DE LOS
PLSMIDOS

Donde se encuentran?

Estn presentes normalmente en


bacterias, y en algunas ocasiones en
organismos eucariotas como las levaduras.

Su tamao varia desde 1 a 250Kb. El


nmero de plsmidos puede variar,
dependiendo de su tipo, desde una sola
copia hasta algunos cientos por clula.

El trmino plsmido fue presentado por


primera vez por el bilogo molecular
norteamericano Joshua Lederberg en
1952.

Segmentos cortos de ADN (hasta 15 kb)

NATURALEZA DE LOS
PLSMIDOS

Entre las propiedades que los plsmidos poseen para


favorecer su utilizacin como vector de clonacin,
encontramos:

1. Su pequeo tamao, que lo hace fcil de aislar y manipular.


2. Su naturaleza circular, que hace al ADN ms estable
durante la extraccin.
3. Su origen de replicacin independientemente del control
directo de la replicacin del cromosoma bacteriano.
4. Su mltiple nmero de copias.
5. La presencia de marcadores seleccionables, como lo es su
resistencia a antibiticos.

ESTRUCTURA DEL
PLSMIDO

FUNCIN DE LOS
PLSMIDOS EN
BACTERIAS
Replicacin, reparacin, recombinacin.

Fertilidad.

Restriccin y modificacin.

Resistencia a agentes antimicrobianos.

Resistencia a metales txicos y detergentes.

Resistencia a bacterifagos.

Metabolismo de azcares y compuestos aromticos.

Adhesin celular, virulencia.

CARACTERSTICAS FSICAS Y
QUMICAS DE LOS PLSMIDOS

Los plsmidos que se utilizan para aplicaciones


teraputicas que contienen genes insertados y
generalmente son de mayor tamao que las
protenas,

grupos fosfatos estn cargados negativamente a pH


>4

estructura clsica de una doble hlice con giro hacia


la derecha, que se estabiliza por puentes de
hidrgeno entre pares de bases AT y GC y por
fuerzas estticas.

El eje de la hlice para el ADNp tambin puede estar


enrollado en el espacio, formando un orden
molecular superior llamado ADNp superenrrollado
(SC),

La
forma
lineal
resulta
del
rompimiento
qumico/enzimtico de los enlaces fosfodister de
cadenas de DN opuestas.

VECTORES

Un vector es un agente (microorganismo) que


transfiere informacin gentica, por algn tipo de
medio, de un organismo a otro.

Los vectores son sistemas que ayudan en el proceso


de transferencia de un gen exgeno a la clula

Se han utilizado una gran variedad de vectores con


fines experimentales, pero todos ellos pueden ser
clasificados en: vectores virales y vectores no
virales.

Los vectores pueden alcanzar un alto nmero de


copias por clula.
Las bacterias y levaduras se pueden hacer
crecer indefinidamente en un laboratorio
grandes cantidades del ADN de inters
El clonaje de fragmentos humanos de ADN en un
vector por medio de enzimas de restriccin y
AND ligasa, permite la propagacin del
fragmentos de ADN clonado junto con la
molcula del vector.

TIPOS DE VECTORES

Plsmidos: Molcula de ADN circular que se replica de


manera autnoma dentro de una bacteria.

Fagos: Molcula de ADN lineal cuyas secciones pueden


remplazarse con ADN extrao sin interrumpir su ciclo de
vida.

Csmidos: Molcula de ADN circular extra-cromosmico que


combina caractersticas de plsmidos y fagos.

BACS: Cromosomas Artificiales Bacterianos.

YACS: Cromosomas Artificiales de Levadura.

PACS: Cromosomas Artificiales Derivados de P1.

MACS: Cromosomas Artificiales de Mamferos.

HACS: Cromosomas Artificiales de Humanos.

VECTORES VIRALES
La propiedad ms eficientes de los virus es la de
integrar los genes virales dentro del material
gentico de la clula infectada y as utilizar la
maquinaria celular para reproducir las partculas
virales.
El avance en el conocimiento de la biologa de los
virus ha permitido el uso de esta propiedad para
desarrollar virus que puedan transportar genes de
inters teraputico, o vectores virales, para terapia
gentica.

VECTORES VIRALES

Ventajas
Tecnologa basada en la evolucin
Variedad de tropismos celulares disponibles
Frecuencia de transduccin robusta
2 tipos de virus: ADN y ARN
Genes pueden ser llevados episomalmente o integrados en
el genoma

Desventajas
Tecnologa viral con evolucin por infeccin y proliferacin
(no benigno)
Puede haber replicacin de virus competentes
Riesgos de recombinacin con virus salvaje in vivo
Oncognesis
Riesgo por respuesta inmune

VECTORES NO VIRALES

Tcnicas que permiten introducir genes teraputicos


sin necesidad de utilizar virus.

Bombardeo de partculas

Inyeccin directa de ADN

Liposomas catinicos

Transferencia de genes mediante


receptores

VECTORES NO VIRALES
Ventajas

Pueden infectar cualquier tipo celular.

No son txicos (en general).

No generan efectos adversos.

No tienen un lmite mximo de ADN a transportar.

Desventajas

Ingreso en la clula poco eficiente.

Slo para terapias ex vivo.

No se integran al genoma humano.

VECTORES VIRALES

VIRALES

- ADENOVIRUS
- ADENOVIRUS
ASOCIADOS
- RETROVIRUS
- HERPESVIRU
S
- VACCINIA

NO VIRALES

- LIPOSOMAS
- POLMEROS

VECTORES VIRALES

RETROVIRUS

Son virus de cido ribonucleico (ARN) que contienen


la informacin gentica viral.

Luego de infectar la clula, el ARN es convertido en


cido desoxiribonucleico (ADN). El ADN viral se
inserta en el genoma de la clula y de esta manera
se convierte en parte de ella, replicndose cada vez
que la clula infectada se replica

VECTORES VIRALES

RETROVIRUS

El genoma viral es pequeo (aproximadamente 10


kilobases) y su organizacin prototpica es muy
sencilla, comprendiendo tres genes que codifican:

Gag protena de la cpsida y de la matriz sin


actividad enzimtica.

Pol la transcriptasa inversa, proteasa e integrasa.

Env protenas de la envuelta del virus

VECTORES VIRALES

ADENOVIRUS

Vector ms usado
Facilidad de infectar tejidos (principalmente del
sistema respiratorio) 90% seres humanos
poseen anticuerpos Rpida degradacin
(24hs)
No hay integracin del gen en el genoma
humano
Bueno para clulas divisibles y no divisibles
Produce altas concentraciones de protena en
clulas mamferas
Administracin: ex vivo o in situ
Efectos adversos: Alta inmunogenicidad

VECTORES VIRALES
VIRUS ADENO-ASOCIADOS

Los vectores de base AAV son extremadamente simples.

Los extremos del genoma comprenden repeticiones


terminales (TR) de cerca de 145 nucletidos.

Contienen slo las secuencias vricas TR que bordean la


unidad de transcripcin de inters.

El nico problema parece ser que la longitud del vector


ADN no puede exceder mucho de la longitud del genoma
viral con 4680 nucletidos.

VECTORES VIRALES

GRACIAS!!