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Cintica enzimtica

Manuel D. Concha
Toledo
20140901

UNIVERSIDAD PERUANA UNIN


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
E.A.P. de Nutricin Humana

Cintica enzimtica
Estudia las propiedades de la actividad
enzimtica y los factores que la
afectan

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Velocidad enzimtica
Es la cantidad de producto formado
por unidad de tiempo

Generalmente se expresa en:


micromoles/minuto

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Y = Cantidad de producto = Velocidad


X
tiempo

Producto
formado

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Tiempo

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Por qu la velocidad
de reaccin no es
indefinidamente
lineal?

Producto
formado

50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Tiempo

Por lo siguiente:
La reaccin ha llegado al equilibrio

La enzima se desnaturaliza despus de un tiempo


El producto de la reaccin tiene un efecto inhibidor
sobre la enzima
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Esquema de una reaccin


catalizada por enzimas

E
Enzima

+S
Sustrato

ES E
Complejo
enzima-sustrato

Enzima

+P
Producto

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E+S

Sitio activo

ES

E+ P

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Baja [S]:

Intermedia [S]:

Saturante [S]:

+
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Exceso [S]

Gran Exceso [S]

+
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Velocidad maxima = Vmax

Velocidad
de la
reaccin

Km = Vmax / 2

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Concentracin
de sustrato

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Cul es la
relacin entre [S]
y la velocidad de
una reaccin
catalizada por
una enzima?

60
50
Velocidad
de la
reaccin

Velocidad maxima = Vmax

40
30
20

Km = Vmax / 2

10
0
Concentracin de sustrato

Son las siguientes:


A baja [S], la velocidad es directamente proporcional a [S]
A muy alta [S], la velocidad es independiente de [S] y es mxima
Existe una [S], en que la velocidad es la mitad de la Velocidad
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mxima (Vmax). Esta [S] se denomina FACULTAD
constante
de Michaelis
o Km
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Constante de MichaelisMenten

Es

la
concentracin de
sustrato a la cual
la velocidad de
reaccin es la
mitad de la Vmax
(Km= Vmax/2)

Su smbolo es Km
La ecuacin matemtica

de MichaelisMenten relaciona [S] con la velocidad de


la reaccin, originando una curva
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Constante de Michaelis-Menten
Es caracterstica de la enzima y particular
para un sustrato
Refleja la afinidad de la enzima por ese
sustrato en una relacin inversamente
proporcional
Km no vara con la concentracin de
enzima
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Significado de una Km pequea


Refleja una alta afinidad de la
enzima por su sustrato, porque a una
baja concentracin del mismo, la
enzima a desarrollado ya la mitad de
la velocidad mxima

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Significado de una Km grande


Refleja una baja afinidad de la
enzima por su sustrato, porque a una
concentracin elevada del mismo, la
enzima desarrolla la mitad de la
velocidad mxima

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Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de MichaelisMenten. Se dice que su cintica no es Michaeliana. Esto
ocurre con los enzimas alostricos, cuya grfica v
frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide. En
la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S]
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en una zona crtica (cercana aFACULTAD
la Km)
se traduce en
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grandes variaciones en la velocidadE.A.P.
dedereaccin

Actividad enzimtica
El katal es una unidad de actividad
enzimtica
Se define como la cantidad de enzima
que transforma 1 mol de
sustrato/segundo
Su smbolo es kat

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Factores que afectan la actividad


enzimtica
1.Concentracin de la enzima
2.Concentracin del sustrato
3.Temperatura
4.pH
5.Presencia de inhibidores
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1. Concentracin de la enzima

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2. Concentracin del sustrato

Si se mantiene constante la concentracin del E, la


velocidad de la reaccin aumenta exponencialmente al
incrementarse la concentracin del sustrato, ya que al
existir ms molculas de sustrato es ms probable el
encuentro con el enzima y la formacin del complejo E-S
Si continuamos aumentando la concentracin del
sustrato, entonces la E se satura y alcanza la velocidad
mxima

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3. Efecto de la temperatura

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4. Efecto del pH

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5. Inhibidores

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a tra


interacciones con el centro activo u otros centros especfi
(alostricos)

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inact


la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula e
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro act


II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte d
molcula, causando un cambio conformacional
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repercusin negativa
en
la
actividad
enzimtica
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Inhibicin enzimtica
isostrica

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Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:


1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la
enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
(competitivos, no competitivos, acompetitivos, por
producto)
E+I
EI
ES + I

ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a


la enzima: (uniones covalentes)
E+I

E
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Inhibicin competitiva
sustrato
inhibidor

Enzima

Sin inhibidor

Enzima

con inhibidor

Los inhibidores competitivos son sustancias, muchas veces similares


qumicamente a los sustratos, que se unen al centro activo impidiendo
con ello que se una el sustrato. El proceso es
reversible y depende de la
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cantidad de sustrato y de inhibidor, pues
ambos
la
FACULTAD
DEcompiten
CIENCIAS DEpor
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enzima

S
E
I

ES

E+P

Inhibicin
Competitiva

EI
Las fijaciones de sustrato e inhibidor son mutuamente
exclusivas; el complejo EI no es productivo
A muy altas concentraciones de sustrato desaparece la
inhibicin
Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo
qumico del
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sustrato
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El inhibidor es tan especfico como elE.A.P.
sustrato
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cido Flico y Sulfanilamida


La sulfanilamida es un anlogo estructural
del cido p - aminobenzoico (PABA)
PABA es el punto de partida para la
sntesis de cido flico en las bacterias
El cido flico es una vitamina esencial
para la proliferacin (divisin) bacteriana
Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones

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Inhibicin no competitiva
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima
en un sitio diferente del sitio activo

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S
E
I

ES
S

EI

E+P
Inhibicin
No Competitiva

ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la E libre y al complejo


ES; ni el complejo EI ni el complejo ESI son productivos
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Inhibicin acompetitiva

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Inhibicin acompetitiva

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S
E

ES

E+P

I
ESI

Inhibicin
Anticompetitiva

El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES


El complejo ESI no es productivo
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Inhibicin Irreversible
Los inhibidores irreversibles reaccionan con un
grupo qumico de la enzima modificndola
covalentemente
El cido flico es una vitamina esencial para la
proliferacin (divisin) bacteriana
A diferencia de la inhibicin reversible, el
efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo
de actuacin
del inhibidor
Los inhibidores irreversibles son, por lo
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general, altamente
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Inhibicin por unin covalente


sustrato
envenenador

Enzima

envenenadores

Los envenenadores son sustancias que se unen al centro


activo mediante enlaces fuertes en unUNIVERSIDAD
proceso PERUANA
irreversible,
UNIN
FACULTAD
DE
CIENCIAS
DE
LA
SALUD
con lo que impiden de manera definitiva la catlisis
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Algunos tipos de inhibidores irre


1. Reactivos de grupos -SH
2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados
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Inhibicin enzimtica
alostrica

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Enzimas Alostricas
Son enzimas cuya estructura proteica est
formada de varias subunidades
No se rigen por la cintica de MM
Adems del sitio o centro activo tienen sitios
alostricos o de regulacin
Sitio activo/sustratos
Sitio alostrico/moduladores o reguladores
La relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de sustrato sigue cintica
sigmoidea
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Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan
estructura
cuaternaria
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de
una
molcula
de
sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta
una
forma
sigmoidal
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