Identificacin y definicin del problema

Diseo del procedimiento experimental

Ejecucin del experimento y recopilacin de datos
Anlisis de los datos experimentales
Propuesta de solucin al problema

Concentracin
de
paracetamol
comprimido de Kitadol

en

un

Propiedades

Mtodos instrumentales

Emisin de radiacin

Espectroscopa de emisin (rayos X,

UV,
Visible)
fluorescencia,
fosforescencia.

Absorcin
radiacin

de Espectrofotometra,
fotometra,
resonancia magntica nuclear

Dispersin
radiacin

de Turbidimetra, nefelometra

Refraccin
radiacin

de Refractometra, interferometra

Potencial elctrico

Potenciometra,
cronopotenciometra

Carga elctrica

Culombimetra

El instrumento transforma la informacin relacionada con

las propiedades fsicas o qumicas del analito en
informacin factible de ser manipulada e interpretada.

Lo primero a realizar es definir con claridad la

naturaleza del problema analtico, para ello se debe
contestar:
I.

Qu exactitud se requiere?

II. De cuanta muestra se dispone?

III. En qu intervalos de concentraciones est el
analito?
IV. Qu componentes de la muestra interfieren?
V.

Cules son las propiedades fsicas y qumicas de

la matriz?

VI. Cuntas muestras hay que analizar?

Los criterios cuantitativos de funcionamiento de los

instrumentos que se deben considerar para decidir
si un determinado mtodo instrumental es o no
adecuado, son los siguientes:
I.

Precisin

II. Exactitud
III. Sensibilidad
IV. Lmite de deteccin
V.

Intervalo
concentracin

VI. Selectividad
VII. Robustez

de

10 L

1 mL

1 mL

3 mL

Cmo saber si se ha
cometido algn error?

Replicas o
repeticiones

Cualquier error por el que una medicin o resultado es

siempre demasiado alto o demasiado bajo, los
resultados errneos son siempre en el mismo sentido.
Su origen se puede identificar (afecta a la exactitud).

Cualquier error por el cual algunas mediciones o

resultados son muy altos o bajos , caen a ambos lados
del valor medio (afecta a la precisin).
Se manifiestan cuando un sistema de medicin se utiliza
a su mxima sensibilidad. Se debe a numerosas
variables no controladas que son parte inevitable de
toda medicin fsica o qumica, no se pueden identificar
o medir con certeza.

La frecuencia de distribucin que presenta una curva

gaussiana tiene las siguientes caractersticas:
-El resultado que se observa con mayor frecuencia es la
media del conjunto de los datos
-Los resultados se agrupan de forma simtrica alrededor
del valor medio
-Es ms frecuente encontrar pequeas divergencias
respecto

al

valor

medio

central

que

grandes

divergencias
-En ausencia de errores sistemticos, la media de un
conjunto

de

datos

grandes

se

aproxima

al

valor

Los

errores

sistemticos

son

de

tres

INSTRUMENTALES, PERSONALES Y DEL MTODO

INSTRUMENTALES:
-Deriva

en

los

circuitos

elctricos
-Fugas en sistemas de vaco
-Efecto de la temperatura en
detector
-Errores de calibracin en los
medidores, pesas y equipos

Correccin mediante calibracin peridica

de los equipos

volumtricos

tipos:

PERSONALES: se introducen en una medida como

consecuencia de los criterios que debe adoptar el analista
-Color de una disolucin en el punto final de una valoracin
-La intensidad relativa de dos haces de luz
-Leer un indicador alto de forma persistente
-Ceguera al color, etc
MTODO:
aparecen
como
consecuencia
del
comportamiento qumico o fsico no ideal de los reactivos y
de las reacciones en las que se basa un anlisis
-Reacciones lentas e incompletas
-Prdidas por volatilidad, adsorcin del analito sobre
slidos, etc

VALIDACIN DEL MTODO

E = Xi Xt
Donde xi es el valor aceptado como real y xt el valor
medido. El signo + o se mantiene para expresar si el
valor medido es mayor o menor al real.

E = xi - X t / X t x
100

 Para conocer la exactitud de los resultados obtenidos es

necesario realizar anlisis de estndares.
Para medir el nivel de interferencia de la matriz, es
necesario analizar un blanco.

Problemtica:

Determinar

mercurio en el agua

el

contenido

de

Decidir

cmo

obtener

una

muestra

para

su

anlisis depende de:

-

Tamao del lote del que se ha de tomar la

muestra
- El estado fsico de la fraccin de muestra que se
ha
analizar

Lade
toma
de la muestra va ligado directamente al
- Las caractersticas
mtodo
de anlisis qumicas del material que se
ha de analizar

 Si la muestra no es representativa los resultados del

anlisis no reflejaran con exactitud su contenido en la
muestra.
La mayora de los materiales de los cuales se toman
muestras son heterogneos.

El muestreo debe ser a tiempos regulares y fijo en

forma y mtodo

Apilar y dividir en
cuartos

Muestreo en etapas: permite conocer mejor las

caractersticas de distribucin del analito en la
matriz.

Muestreo
mltiple

jerrquico

el establecimiento de la evidencia documental de

que un procedimiento analtico conducir, con un
alto grado de seguridad, a la obtencin de
resultados precisos y exactos, dentro de las
especificaciones y los atributos de calidad
previamente establecidos.
El proceso de validacin contempla varias fases
que se deben llevar a cabo para conocer las
caractersticas de fiabilidad del mtodo, que son
las que demuestran la capacidad de un mtodo
analtico para mantener a lo largo del tiempo los
criterios fundamentales de validacin

Los
mtodos
analticos
estn
sometidos
a
interferencias qumicas y fsicas que contribuyen a la
incertidumbre del anlisis.
Cuando el mtodo est libre de estas interferencias
se puede decir que es robusto.
La robustez de un mtodo garantiza que este pueda
ser utilizado en distintas condiciones en diversas
matrices.
Variable

Bajo

Alto

ptimo

% ACN* en la fase

4.0

6.0

6.0

Flujo (mL min-1)

0.6

1.0

0.7

pH

2.2

26

2.6

mvil (v/v)

Identificar cuales son los factores que tienen mayor

influencia
Mtodo ultravioleta para determinar fosforo en suero
Fosfato + ion molibdato
molibdato fosfrico
= 340 nm

complejo

inorgnico

Almacenamiento

Tcnica manual o automa

Analistas

Tiempo y
temperatura
de reaccin

Mtodo ultravioleta para determinar melatonina en

cpsulas
Mediciones a 307 nm, solucin de 30 g/mL
Soluciones de pH 35
50C 4C

La precisin es la medida de la dispersin de los

datos entorno a un valor central y puede expresarse
como rango, desviacin estndar o varianza.
Por lo general se divide en dos categoras:
repetibilidad y reproducibilidad.
i.

Repetibilidad: precisin de un anlisis en el que

la nica fuente de variacin es el anlisis de
muestras repetidas

ii.

Reproducibilidad: precisin obtenida cuando se

comparan los resultados de distintas muestras,
distintos anlisis o distintos mtodos.

Repetibilidad

Precisi
n

Precisin
intermedia
Reproducibilidad

Instrument
al
Del
mtodo

La precisin se ve afectada por los errores

aleatorios, como se distribuyen aleatoriamente en
torno al valor central, los errores positivos y
negativos tienden a compensarse, siempre que el
nmero de mediciones sea suficientemente grande.

N de

rea (mvolts*

inyeccin

seg)

54493

55358

55401

55447

56001

55691

Promedio

55399

DE

505

 5 extractos a un nivel de sobrecarga de

0,8 ppm
Extracto
1

Extracto
2

Extracto
3

Extracto
4

Extracto
5

CV%

rea
promedio

2488,8

2203,1

2413,5

2137,3

2203,4

152,6

6,67

tr

12,185

12,185

12,183

12,182

12,182

0,0015

0,012

5 extractos a un nivel de sobrecarga de 0,8 ppm en dos das

distintos
Da 1

Da 2

Promedio

2289,2

2624,3

152,6

191,8

CV%

6,67

7,31

CV%

6,98

La exactitud es una medida de la proximidad entre la

medida de tendencia central y la verdad o el valor
esperado.
Los errores que afectan a la exactitud de un anlisis
se llaman sistemticos y se caracterizan por una
desviacin sistemtica en relacin con el valor
verdadero, es decir, todas las medidas individuales
son demasiado
pequeas
o demasiado
grandes.
Sobrecarga
g Recuperacin
DER%
mL-1

300

94 4.24

4.51

600

85 0.71

0.84

900

90 0.71

0.79

Es la medida de la
capacidad
para
diferenciar
pequeas
variaciones
en
la
concentracin del analito.
La definicin cuantitativa
de sensibilidad para la
IUPAC es sensibilidad de
calibrado, es decir la
pendiente de la curva de
calibracin
a
la
S = mc
concentracin
en estudio.

+ Sbl

Sensibilidad
de
calibracin

Pendiente
de la curva

Sensibilidad
analtica

LD y LC

Sensibilid
ad

Se define como la mnima masa de analito que se

puede detectar para un nivel de confianza dado.
Este lmite depende de la relacin entre la magnitud
de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones
estadsticas de la seal del blanco.
Segn IUPAC es la menor concentracin o cantidad
absoluta de un analito que produce una seal
significativamente mayor que la que se obtiene con
un blanco.
I. Mtodo del error tpico

II. Mtodo de la inspeccin

visual
III. Mtodo de la desv. St.
del blanco

Se define como la menor concentracin de analito

que puede determinarse con precisin y exactitud
razonables en las condiciones establecidas y se
expresa en unidades de concentracin.

Lmite de deteccin (LOD): 3

* Sbl / m
Lmite de cuantificacin (LOQ):
10 * Sbl / m

Se define como el
intervalo desde la
concentracin ms
pequea a la que se
puede realizar una
medida cuantitativa
hasta
la
concentracin a la
que la curva de
calibrado se desva
de la linealidad.

Independiente de la apariencia lineal de la recta es

conveniente evaluar los estimadores de regresin es
un intervalo de confianza dado:
Del coeficiente de regresin (r) : se determina para
evaluar el ajuste al modelo lineal propuesto
De la pendiente (m): se determina como parmetro
de sensibilidad
De la ordenada en el origen (b): para evaluar la
proporcionalidad de la funcin analtica, que la recta
pase por el origen y que cualquier desviacin pueda
adjudicarse nicamente a un error aleatorio.

Este parmetro se refiere a la propiedad del mtodo

de producir una seal medible debida solo a la
presencia del analito, libre de interferencias de otros
componentes, en la matriz de la muestra.
Indica el grado de ausencia de interferencias con
otras especies que contiene la matriz de la muestra.
Estos compuestos pueden ser excipientes de un
frmaco, productos de degradacin, subproductos o
productos laterales de sntesis de una droga,
metabolitos del mismo analito en un fluido biolgico,
etc.

Blanco de matriz de
trigo

DON

Muestra de trigo naturalmente contaminada con

deoxinivalenol

DON

Muestra de trigo con tres toxinas de Fusarium DON, HT2 y T-2

DON

HT-2
T-2

En productos farmacuticos se evalan las rutas de

degradacin con el fin de realizar un ensayo de
degradacin artificial:
Termlisis (por calentamiento de la droga a una t
fija)
Hidrlisis (por calentamiento a reflujo con agua
durante 1 hora)
Hidrlisis alcalina (por calentamiento a reflujo con
NaOH 1 N por 1 hora)
Hidrlisis cida (por calentamiento a reflujo con HCl
1 N por 1 hora)
Fotlisis (por exposicin de la droga y una solucin
de ella a radiacin UV +
o luz directa)
Oxidacin (calentamiento
a bao maria de una
pureza

Ascorbil 2-monofosfato

Alimento extruido

mAU

200

210

220

230

240

250
nm

260

270

280

290

300

Consiste en una disminucin o aumento de la respuesta

instrumental del analito debido a la presencia de otros
componentes.
El
efecto
matriz
provoca
un
error
sistemtico
proporcional, es decir, dependiente de la concentracin
de analito en la muestra.

Adems de los parmetros de calidad se deben

considerar las siguientes caractersticas:
1.- Velocidad
2.- Facilidad y comodidad
3.- Habilidad del operador
4.- Costo y disponibilidad del equipo
5.- Costo por muestra.

La exactitud de la estandarizacin depende de la

calidad de los reactivos y del material de vidrio que se
utilicen para preparar los estndares.
- Elevada pureza
- Composicin conocida
- Estable a temperatura ambiente
- Ser posible de secar en estufa

Solucin de
concentracin
conocida
Pesar X g

reactivo

cuya

pureza

hay

comparacin con un patrn primario

que

establecer

por

- Aquella estandarizacin que utiliza un solo patrn con una

cantidad conocida de analito
K = S ref
Cs
-

Cualquier incertidumbre del valor de K aumenta la

incertidumbre de la concentracin del analito

- Se prefiere la estandarizacin con varios puntos

La mayora de los mtodos instrumentales requieren

de una calibracin, proceso que implica relacionar la
seal analtica medida con la concentracin del
analito. Los tres mtodos ms utilizados son:

I. Curvas de calibrado
II. Mtodo de la adicin
estndar
III. Mtodo
del
patrn
interno

 Se requieren varios estndares de concentraciones

conocidas del analito de inters.
Se requiere un blanco que contenga los componentes de
la muestra original excepto el analito.
Se representa una grfica de respuesta del instrumento
v/s concentracin del analito.

Este mtodo se utiliza para muestras complejas en las

cuales la matriz puede interferir de manera
importante.
Se adicionan diferentes volmenes de una disolucin
patrn a varias alcuotas de la muestra del mismo
tamao.
El valor del volumen en la interseccin de la lnea
recta con el eje x es el volumen del reactivo estndar
equivalente a la cantidad de analito en la muestra.

Est ausente en la
muestra
Se
aade
en
concentracin
fija
y
conocida
Este mtodo sirve para
compensar
algunos
errores
aleatorios
o
sistemticos.

rea analito/rea st.int.

Un patrn interno es una sustancia que se aade a

todas las muestras, blancos y patrones de
calibrado en una cantidad fija.

Concentracin analito/Cst.int.

 Si el estndar interno y el analito responden

proporcionalmente a los errores instrumentales y
fluctuaciones del mtodo, la razn entre las seales es
independiente de las fluctuaciones.
La mayor dificultad es encontrar un estndar interno
adecuado, con seal reproducible y que genere una
seal similar a la del analito.

 Dgitos de una cantidad medida, incluyendo todos los

dgitos conocidos y un dgito cuya magnitud no se
conoce con seguridad.
Son importantes ya que reflejan la incertidumbre de
la medida.
Repasar las reglas para realizar redondeos de cifras
significativas en los clculos

Las cifras significativas indican el error con el cual

se midi una determinada magnitud.

Todas las cifras distintas de cero son significativas

Los ceros a la derecha o entre dos cifras distintas de
cero son significativos
Los ceros a la izquierda NO son significativos

 Cuando la cifra siguiente a la que se va a conservar es

menor a 5, la cifra que se conserva queda inalterada.
23,4533

23,45

Cuando la cifra siguiente a la que se va a conservar es

5 o mayor a 5, la cifra que se conserva se debe
aumentar en una unidad.
23,4567

23,46

Cuando un problema tiene varios datos el resultado final

debe expresarse con la misma cantidad de cifras
significativas del dato que tenga menor cantidad de
cifras significativas.
Si se obtienen resultados parciales, en los mismos se
debe dejar por lo menos una cifra significativa ms de las
que se necesita tener en el resultado final.

16.00
1.007
1.007
18.014

18.0
1

3
[(0.958)x
1
x 1022(18.0
]
1)4

El
resultado
de
una
adicin/sustraccin no puede
tener
ms
dgitos
significativos a la derecha del
punto decimal que el trmino
que menos contenga.
El
resultado
de
una
x (6.0221367 multiplicacin/
divisin tiene tantas cifras
8
significativas
como
el
factor que
menos tenga