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UNIVERSIDADE FEDERAL DO OESTE DO PAR

INSTITUTO DE SADE COLETIVA


BACHARELADO EM FARMCIA
BROMATOLOGIA II

THE IN VITRO GENOTOXIC EFFECT OF


TUCUM (Astrocaryum aculeatum),
an Amazonian Fruit Rich in
Carotenoids.

INTRODUO
TOXICIDADE
nutracuticosCELULAR
presentes

Os
em frutas e
legumes tm recebido uma ateno
considervel por causa de seu baixo
EFEITOS
custo e margemGENOTXIC
de segurana ampla.
OS

EFEITO DE

ANTIOXIDAN
CITOTOXICIDA
TES
DE

ANTI DE
EFEITO
INFLAMATRI
GENOTOXICID
OS
ADE

ANTI
EFEITOS
MUTAGNICO
MICROBIANO
S

NOME CIENTFICO: Astrocaryum aculeatum G. Mey;


FAMLIA : Arecaceae;
CARACTERSTICAS MORFOLGICAS:
RVOREsolitria e espinhenta, de 8 e 20 metros de altura.
FRUTOgloboso, de com 4,5-6 cm de dimetro, de casca lisa,
dura e amarelo-alaranjada, de polpa carnuda e comestvel, e
dotado de um caroo, preto, consistente e lenhoso.
SEMENTEglobosa ou alongada, e raramente elptica, de 4 cm
de dimetro, revestida por um tecido fino de colorao
castanho-escura, e dotada em seu interior de uma massa
homognea, consistente e branca e, mais internamente, de
um lquido incolor, ambos comestveis.

Fonte: http://www.umpedeque.com.br/arvore.php?

TUCUM

TUCUM Astrocaryum
aculeatum
O mesocarpo, contm:
412,732,12 kcal;
44,90,30 g de contedo
molhado;
3,50,07 g de protenas;
8,50,6 g carboidratos;
40,50,5 g de lipdios;
10,9 0,1 g de fibras.
O extrato de leo, contm:
74,4% de cidos
insaturados;

graxos

25,6% de cidos graxos


saturados ricos em Omega
3, 6 e 9.

64,31 mg de
Caroteno/10
0g de
amostra
seca
2,960,05m
g de
Quercetina/1
00g de
amostra
seca

795mg de
Catequinas/1
00g de
amostra
seca

OBJETIVO
Investigar se diferentes concentraes
de extratos da casca e da polpa de
Tucum
(Astrocaryum
aculeatum)
possuem ao genotxica em culturas de
Clulas
Mononucleares
do
Sangue
Perifrico CMSPs.

MATERIAIS E MTODOS
PRODUO DE
EXTRATO
Alta
concentrao

Baixa
concentrao

CARACTERIZAO
QUMICA

Teor de c.
fenlicos totais

Teor de
alcalides
Quantificao de caroteno e
quercetina

Teor de taninos

MATERIAIS E MTODOS
ENSAIOS DE
GENOTOXICIDADE

Ensaio do PicoGreen

Ensaio de espcies reativas


de oxignio
DNA cometa alcalino e
Instabilidade cromossomica

Ensaio de atividade da
caspase-1

Anlise estatistica

RESULTADOS
Mtodo de FolinCiocalteu;
COMPOSTOS FENLICOS TOTAIS
EXTRATOS DA
CASCA

EXTRATOS DA
POLPA

941,80,07
mg/GAEg

872,10,06
mg/GAEg

As caractersticas do
produto
qumico
de
outros
compostos
bioativos
tambm
mostrou concentraes
mais elevadas na casca
quando comparada com
extratos de polpa.

FIG. 1. Os compostos bioactivos detectados por


espectrofotometria (flavonoides, taninos, e alcaloides
totais) e HPLC (-caroteno e quercetina) presente em
extratos da casca e polpa do Tucum comparadas pelo
test t de student (* P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001).
Barras grficas representam a mdia de erro padro.

ENSAIO DE PICOGREEN
Avaliou o efeito agudo do tucum na fragmentao
das CMSPs de DNA;
Efeito Gentipo Protetor.

FIG. 2. A desnaturao do DNA de CMSPs aps os tratamentos com extratos da casca do tucum (A) e a
polpa (B) concentraes correspondentes a 5 (
), 10 (
), 100 (
), 500 (
), E 1000 (), e
expressos como g/mL. Porcentagens de dsDNA foram calculados em relao ao grupo controle no
tratado, e cada um dos smbolos representa erro padro da mdia (SEM) (N = 8 poos) obtidos nos
experimentos. (*) Diferenas significantes (P <0,05) em comparao ao controle ( ) avaliadas por
anlise de medida repetida de varincia seguido de post hoc no teste de Tukey.

TESTE COMETA
Todas as CMSPs expostas
extratos de casca de Tucum
apresentam degradao de DNA
mais elevado do que o grupo
controle (P=0,0001);
No entanto, em CMSPs expostas
a extratos da polpa de Tucum,
51,4% de dsDNA foi degradado
em apenas 1000 g/ml de
extrato
de
polpa
quando
comparada
com
o
grupo
controle, indicando algum efeito
de genotoxicidade (P=0,0001);
O ndice de danos foi mais
elevado
em
todas
as
concentraes de ambos os
extratos, quando comparado
com o grupo controle CMSPs
(P=0,0001).

ndice de danos: (1,2,3,4 classe cometa)/100.


0, ncleos sem danos no DNA.

TESTE COMETA
O efeito potencial do extrato de tucum na instabilidade
do cromossomo tambm foi avaliada, e os resultados
so apresentados na Tabela 2 e Figura 3;
O MI (ndice mittico) foi influenciado pela presena de
extratos de Tucum.

n:
nmero
de ncleos contados
em de
cada
tratamento presentes
na regio
central dacromossmica
lmina de
FIG.
3. Microfotografias
de ensaios
genotoxicidade:
(A) anlise
de instabilidade
vidro.
utilizando
a tcnica de citogentica G-band mostrando caritipo com metfases intactas,
:
Porcentagem
de clulas (B)
na fase
de do
metfase
ncleos
totais.
quebrado e cariopicnose;
ensaio
cometadeDNA
alcalino
mostrando ncleo sem danos, e o

PRODUO DE EROS

Apesar das concentraes de 500 e 1,000 g/mL, em


ambos os extratos, foi encontrada uma tendncia para
diminuir 23-25% da produo de ROS;
Quando comparado com o grupo controle (Fig. 4A), essas
diferenas no foram estatisticamente significativas
(extrato da casca P = 0,167; extrato de polpa P = 0,232).

FIG. 4A. Os EROs tm nveis avaliados por ensaio


fluorimtrico DCFH-DA (A) e da atividade da caspase
(pg/mL) de CMSPs humanos avaliada por imunoensaio.

ATIVIDADE DA CASPASE I
Observar o potencial da cascata de apoptose
em CMSPs expostas ao extrato de tucum >
100g/ml;
Os extratos de casca apresentaram mais
elevada ativao de caspase I em 500 e 1000
g/mL do que os extratos de polpa. (P =
0,0001).
FIG. 4B. Aps 24 h de exposio casca
tucum (A) e polpa (B) as concentraes
dos extratos so expressas como g/mL.
Nenhuma diferena estatsticas foram
observadas nos nveis de ROS. A
atividade
da
caspase
em
cada
tratamento representado por meio
SEM (n = 8 poos). Representam
diferenas significativas (P <0,05) entre
os tratamentos avaliados por anlise de
varincia de duas vias seguido pelo
teste post hoc de Tukey.

DISCUSSO
GENOTXI
CO

Ensaio Cometa / Tratamendo de PBMC /


Instabilidade cromssomica: extratos com
concentraes > 500 g / mg

GENOPROTET
OR

PicoGreen para desnaturao do DNA: alta


concentrao de compostos antioxidantes,
principalmente, b-caroteno.

Uma vez que no foram encontradas diferenas na produo


EROS entre o grupo controle e PBMC tratadas com extratos
Tucum, podemos supor que os compostos antioxidantes
presentes nos extratos foram metabolizados pelas clulas
na primeira hora.

DISCUSSO
PRESENA DE ALCALIDES E TANINOS: efeito txico
sobre a clula
OUTROS ESTUDOS: tm mostrado efeitos antioxidante, proxidante, ou ambos efeitos.

Krinsky e Johnson (2005): utilizao de metodologias


diferentes entre os estudos.
Tratament
o agudo

Tratament
o crnico

de PMBC

de PMBC

DISCUSSO
CONCENTRAO DE TUCUM NOS EXTRATOS PRODUZIDOS

HORMESE: efeitos opostos em doses altas e


em doses baixas
Doses baixas possui mais efeitos positivos que doses altas.

DISCUSSO
Ativao
da
caspase-1

Eliminao
de
precursores
malignos
por morte
celular
programada

Biologia
do cncer

Produo
de fatores
trficos
para clulas
cancerosas

Extrato de
tucum em
[ ]: no
benfico
sobre
PBMC

DISCUSSO
O extrato de tucum tambm apresentou
outros importantes polifenis como a
quercetina.
. Quercetina possui ampla gama de propriedades biolgicas.
. Associao positiva entre ingesto de quercetina e baixo risco
de inflamaes no sistema cardiovascular.

Russo et al.
(2012)

Prottipo de um agente quimiopreventivo


natural porque desempenha papis
fundamentais no desencadeamento da
marcas de cncer.

DISCUSSO
Tempo de
exposio

Wnuk et al.
(2009)

Limitaes
metodolgic
as

EFEITO BENFICO
DO TUCUM

Concentra
o da dose

A Erva-mate (Ilex paraguariensis)


apresenta comportamento parecido ao
do tucum.
Variao da dose pode levar
apoptose e necrose de linfcitos.
Estudo realizado in vitro, necessrio
outros estudos complementares
adaptados ao sistema in vivo para
entender o funcionamento dos
extratos de Tucum.

CONCLUSO
Em resumo, extratos de Tucum, apesar de seu
grande contedo e atividade antioxidante,
apresentam em efeitos genotxicos em PBMCs,
dependendo de sua concentrao e tempo de
exposio. Estes resultados precisam ser
considerados para futuros estudos in vitro e in
vivo dos efeitos do Tucum.

Referncias Bibliogrficas
SOUZA FILHO ET AL. The In Vitro Genotoxic Effect of
Tucum (Astrocaryum aculeatum), an Amazonian
Fruit Rich in Carotenoids. JOURNAL OF MEDICINAL
FOOD, J Med Food 16 (11) 2013, 10131021;
http://www.umpedeque.com.br/arvore.php?id=663.