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Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas


Departamento de Microbiologa
Alumnos: Mnica Daz
Mara Ferreira
Karla Itzel Ortiz
Alejandra Trejo
Trabajo: Tincin de Ziehl-Neelsen
Grupo: 3QM1
Equipo(s): 6
Laboratorio(s): 3 y 4

Septiembre 2015

Esta tincin se utiliza para diferenciar las bacterias denominadas


cido-alcohol resistentes (BAAR) de las no cido-alcohol
resistentes (NAAR); para identificar a todas las bacterias del
gnero Mycobacterium, que comprende dos patgenos
importantes para el hombre: M. tuberculosis y M. lepra.

Tambin se utiliza para identificar cepas del genero Nocardia.


Estas bateras se consideran Gram positivos pero por la tcnica
de Gram se colorean difcil e irregularmente. De ah que se
emplee la coloracin de ZIehl-Neelsen.

Fundamento

La pared de las bacterias cido-alcohol resistentes (BAAR)


est formada por:
Peptidoglicano, unido mediante enlaces covalentes a,
Un polmero de cido miclico (que es un hidroxilipido
de cadena larga ramificada) galactosa arabinosa.
Lipidos
superficiales
(micsidos,
glicolipidos
y
sulfolipidos).

Esta tcnica se basa en la propiedad que


tienen algunas bacterias de resistir la
decoloracin con alcohol cido despus de
teirlas con fucsina fenicada concentrada.

Se usa una mezcla de fucsina bsica y fenol


(fucsina fenicada) aplicando calentamiento
progresivo para conseguir que el colorante
penetre dentro de la clula ya que al calentar
aumenta la energa cintica y disuelve las
ceras.

Composicin qumica de
los colorantes utilizados
Azul de metileno
Azul de metileno.......................... 3 ml.
Etanol de 95%............................. 20 ml.
Agua destilada..........................100 ml.

Fucsina Fenicada
Fucsina bsica 1 g.
Fenol .. 5 g.
Etanol 95% . 10 ml.
Agua destilada 90 ml.

Grupo
cromforo

Cromgeno

PROCEDIMIENTO PARA LA
TINCION DE ZIEHL NEELSEN

1) Se realiza un frotis
bacteriano

8) Lave
suavemente con
agua.

7) Realizar decoloracin
exhaustiva con Alcohol Acido
por un minuto o mas si es
necesario, no acceder los 2
minutos.

2) Secar al aire
3) Fijar al calor

6) Deje enfriar y lave


suavemente con agua.

4) Cubrir el frotis con


fucsina fenicada

5) Calentamiento con el
mechero hasta emisin de
vapores durante 5 min.

Nota: El colorante
no debe secarse ni
hervir; aadir mas
si es necesario

9) Cubra con azul de


metileno por 2 minutos.

10) Lave
suavemente con
agua y deje secar.

La reactividad radica en el grupo carboxilo


del cido miclico que reacciona con el ion
amonio de la fucsina. El fenol facilita la
penetracin de la fucsina en la capa lipdica.
Se decolora con alcohol-cido y se agrega el
contra colorante azul de metileno.
Despus de decolorar con
alcohol-cido y se agregar el
contra colorante azul de
metileno.
En el preparado se vern:
BAAR: Bacilos de color rojo
Otras bacterias y clulas que
no son cido alcohol
resistente (NAAR): de color
azul

La resistencia por el cido se debe a que el cido miclico


forma un complejo con el peptidoglicano de la pared de estas
bacterias, y dicho complejo impide de alguna manera el
contacto con el decolorante alcohol-cido en la etapa de
decoloracin.
El complejo fucsina-fenol resiste la decoloracin porque est
muy ligado a los lpidos ya que es ms soluble en ellos que en
el decolorante

Hidroxilipidos
complejos de 60 a 90
tomos de carbono

Confiere aspecto caracterstico


en cuerda a Mycobacterium

Mycobacterium phlei

Staphylococcus aureus

mezcla de ambos

BAAR

NAAR

BAAR Y NAAR

Conclusin
Aquellas bacterias que se tieron de color rojo indica
que son bacterias cido-alcohol resistentes puesto
que retienen el colorante fucsina fenicada debido a
las caractersticas de las bacterias y aquellas que se
ties de color azul se denominan no cido-alcohol
resistente pues retienen el colorante de azul de
metileno.