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ANALISIS TOXICOLOGICO.

Es el conjunto de procesos
analticos que tienen por objeto el
aislamiento , identificacin y
determinacin cuantitativa de los
txicos, tanto en el sujeto vivo como
en el cadver, con el fin de permitir
el diagnstico de intoxicacin y el
esclarecimiento de los hechos.
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En sus orgenes la Toxicologa forense


era fundamentalmente analtica y su
campo de accin, el cadver.
En la actualidad las funciones de esta
rama de la Toxicologa son mucho ms
extensas, proyectndose sobre el vivo.
El cadver, la actividad laboral y el
medio ambiente.
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Esto determina la gran variedad de


muestras con que puede encontrarse el
toxiclogo forense: vsceras
procedentes de una autopsia, fluidos
biolgicos de individuos vivos para
detectar la presencia de algn txico
bajo cuyos efectos se ha cometido un
delito o se ha sufrido un accidente,
productos sospechosos (lquidos,
slidos, vegetales).
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Si se toma en cuenta la gran cantidad


de productos txicos disponibles con
los que se puede entrar en contacto,
se comprende fcilmente la
complejidad que supone responder a
la pregunta: existe algn producto
toxico en esta muestra?.
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AMPLITUD Y PROFUNDIDAD DEL


ANLISIS.
En el caso de la toxicologa forense
el toxiclogo debe ser capaz de
detectar cualquier sustancia qumica
exgena (xenobitico) presente en el
material biolgico objeto de pericia.
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Normalmente un anlisis toxicolgico


completo para detectar la presencia de
cualquier sustancia extraa no se
realiza ni tampoco es solicitado en tales
trminos, especialmente si existe una
buena comunicacin entre el patlogo,
el investigador y el toxiclogo analista.
Cada caso tiene sus peculiaridades y el soporte
toxicolgico requerido deber ser planteado y
solicitado adecuadamente.
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Solo cuando se ha hecho una autopsia


completa y el investigador ha tenido toda la
informacin del caso, con los datos del
medico, familiares y allegados, y se ha
realizado un minucioso estudio del lugar
donde se encontr el cadver debe
efectuarse una solicitud de anlisis
toxicolgico, es en este caso cuando se da
la mxima garanta de obtener resultados
tiles para la resolucin del caso, la peticin
de un anlisis toxicolgico en definitiva, debe
se lo mas especifica posible.
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El toxiclogo forense tiene 2 tipos de


necesidades en su metodologa:
1.- TEST GENERALES.- Deben ser
sensibles, aunque no necesariamente
especficos, y detectar un gran nmero
de sustancias, de modo que los
resultados negativos permitan central la
atencin en unos pocos grupos de
sustancias.
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2.-MTODOS CUANTITATIVOS
FIALES.- Una vez que se sospeche de
la presencia de una sustancia por los
tests anteriores, su presencia debe
confirmarse y cuantificarse al menos
por dos tcnicas analticas
independientes, basadas en principios
qumicos diferentes.
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Otros factores que hay que tener en


cuenta en la cuantificacin del txico son
evitar al mximo las interferencias y
conocer la precisin y exactitud del mtodo
utilizado. Esta necesidad de un resultado
cuantitativo rigurosamente exacto es lo
que caracteriza los anlisis de toxicologa
forense, de los de la toxicologa clnica
donde no se requiere tal precisin.
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TIEMPO APROXIMADO DE
ANLISIS.
Se define como el intervalo ante la
llegada de la muestra al laboratorio en
que se puede ofrecer el resultado
analtico.

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En Toxicologa forense rara vez se


requiere un resultado inmediato, lo que
permite al analista emplear el tiempo el
tiempo necesario para realizar su
investigacin. En tanto, en la
Toxicologa Clnica el anlisis
toxicolgico debe ser realizado en el
menor tiempo posible para ser til al
mdico en el diagnostico y tratamiento
del intoxicado.
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En casos excepcionales, como


la muerte por monxido de
carbono, se exigir un anlisis
inmediato para evitar mas
accidentes por aquellas causa.
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INTERPRETACIN DE LOS
RESULTADOS
La interpretacin requiere tener en
cuenta, todas las circunstancias
implicadas en el caso. La resolucin del
problema debe hacerse para cada caso
en particular por una discusin razonada
de todos los hechos y todas las partes
que de alguna forma intervienen en la
investigacin medico-legal.
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IMPLICACIONES
ANALTICAS DE LA
BIOTRANSFORMACIN DE
LOS TXICOS.

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GENERALIDADES
Desde el momento en que un toxico penetra en
el organismo recorre necesariamente un
camino mas o menos intrincado hasta
alcanzar los lugares donde va a actuar
acabando finalmente por se eliminado.
Este movimiento del toxico por el organismo
esta representado por los procesos de la
absorcin, distribucin, biotransformacin y
eliminacin.
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Absorcin

D
I
S
T
R
I
B
U
C
I
O
n

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Cada uno de estos procesos


contribuye en parte a la
toxicidad el compuesto en
cuestin y puede tambin, en
alguna medida, tener
consecuencias analticas
importantes.
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Desde el punto de vista analtico, la


biotransformacin es el proceso ms
importante. La mayora de los txicos
sufren profundos cambios metablicos
en el organismo y, en consecuencia,
aparecen en la orina a otros fluidos
biolgicos como productos de
transformacin. Por lo tanto, el
conocimiento de la metabolizacin y de
los factores que la afectan es de gran
inters para su deteccin de los fluidos
biolgicos.
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El desarrollo de un mtodo especifico de


anlisis, va a depender del conocimiento de
la metabolizacin y de las propiedades de los
metabolitos del toxico. Para txicos que sean
intensamente metabolizados y excretados
como productos de trasformacin, la
identificacin puede hacerse sobre la base
de la deteccin de uno o ms de sus
metabolitos.
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FACTORES QUE AFECTAN EL


METABOLISMO DE LOS
TXICOS
Son varios los factores que afectan el
metabolismo de los txicos, con una
influencia directa sobre su deteccin en
los fluidos biolgicos.

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1.- VA DE ENTRADA.
El metabolismo de un txico depende la
va de entrada, en particular cuando la
administracin se hace por va oral o
intravenosa. Esto puede influir en los
niveles de la sustancia y sus metabolitos
en sangre, tejidos y excretas.

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Un txico administrado POR VA ORAL


puede seguir una ruta metablica
distinta que el administrado
parenteralmente y en especial por va
intravenosa. La razn esta en que, al
administrar oralmente el toxico, se va a
encontrar con:
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a) Acidez gstrica que puede


modificar algunos compuestos.
b) Enzimas gastrointestinales
secretadas al intestino.
c) Flora intestinal, que puede
metabolizar algunos xenobiticos
d) Enzimas de la mucosa
gastrointestinal durante la
absorcin.
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En la administracin INTRAVENOSA el
compuesto llega al torrente circulatorio
directamente y evita el metabolismo en
el tracto gastrointestinal, a menos que
posteriormente sea excretado por la
bilis.
Los siguientes son algunos de los
ejemplos que ilustran la importancia de
la va de entrada:
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a) Ciertos txicos son inestables a las


condiciones cidas o alcalinas del tracto
gastrointestinal. Algunas penicilinas se
inactivan por el pH gstrico. La
talidomida se descompone en
numerosos productos de hidrlisis por el
pH alcalino del intestino.
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b) La isoprenalina, por va oral, es


transformada durante su absorcin
gastrointestinal a sulfato de
isoprenalina que es el principal
producto de excrecin. Sin embargo,
administrada por va parenteral, se
elimina principalmente sin transformar
y como derivado O - Metilacin tanto
libre como conjugado.
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Esta diferencia en el metabolismo es


debido al hecho de que por va oral la
isoprenalina es sulfatada por el tejido
intestinal y el producto resultante se
excreta fcilmente.

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Cuando se administra parenteralmente


la sustancia sufre un proceso de O
metilacin antes de sufrir la
conjugacin.

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c) Cuando el propanolol (bloqueante


adrenrgico) se administra por va
oral, aparecen grandes cantidades en
plasma.

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2.- pH urinario.
Algunos txicos originan en su
metabolismo productos de conjugacin
muy polares, como glucornidos, sulfatos
y derivados de aminocidos, que son
cidos fuertes, casi totalmente ionizados
al pH corporal y fcilmente excretados
por el rin por una combinacin de
filtracin glomerular, secrecin tubular
activa y poca o nula reabsorcin pasiva.
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Su excrecin es independiente del pH,


pero en la mayora de los casos los
txicos son cidos y bases dbiles, y
en funcin del pH urinario pueden
reabsorberse, de manera que prolonga
su permaneca en el organismo e
intensifican su metabolizacin.
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3.- EXCRECIN EXTRARRENAL.


No es extrao que la recuperacin en la
orina de ciertas sustancias, administradas
por va oral, sea incompleta, apareciendo
grandes cantidades en heces.
Ocasionalmente este hecho puede
deberse a una mala absorcin, pero en
general este fenmeno se observa aun
cuando el compuesto se administre por
va parenteral.
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La excrecin abundante en heces de


muchos txicos es consecuencia
normalmente de su excrecin biliar. En
tales casos aparecen altas
concentraciones del txico en bilis,
contenido intestinal y heces. Adems,
se almacenan elevadas
concentraciones del metabolismo en la
vescula biliar, lo cual puede ser de
gran inters e la investigacin post
mortem.
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Hay algunas implicaciones peculiares


de la va biliar fecal:
a) Consecuencia de la excrecin biliar,
un txico y sus metabolitos pueden
perdurar en el organismo en virtud de
un ciclo enteroheptico (como por
ejemplo la eritromicina, estrgenos
sintticos, etc.).
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b) Loa glucornidos excretados por bilis


son hidrolizados frecuentemente en el
tracto gastrointestinal por la
glucoronidasa bacteriana y, en
consecuencia, el txico aparecer en
forma libre en las heces.

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CUESTIONAMIENTO PARA
EL ANALISIS
TOXICOLOGICO.
En esencia son 3, que pueden resumirse de la
siguiente manera:
1.- Qu buscar?
2.- Dnde buscar?
3.- Cmo buscar?
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QUE BUSCAR?
En funcin del tipo de metabolismo, un
txico puede aparecer en los fluidos o
tejidos en su forma original o como
producto de transformacin (metabolito)
libre o conjugado con diferentes
compuestos. En el caso de que haya
varios metabolitos es importante saber
cual de ellos es el ms representativo
en cuanto a la toxicidad del compuesto
en cuestin.
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DONDE BUSCAR?
Las propiedades fisicoqumicas del toxico
y su metabolitos pueden ser muy
distintas, a veces incluso entre los
metabolitos de un mismo compuesto. Ello
determina una distribucin caracterstica
segn los casos y la conveniencia de
realizar la investigacin en orina, sangre,
bilis, etc.
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COMO BUSCAR?
Ya que se sabe qu y donde buscar, se
pueden elegir las condiciones optimas
para su extraccin.

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LA MUESTRA PARA EL ANALISIS


TOXICOLOGICO.
La seleccin de las muestras adecuadas
para el anlisis y su correcta conservacin
son requisitos indispensables en una
investigacin toxicolgico.
Las muestras para el anlisis toxicolgico
deben recogerse teniendo en cuenta las
condiciones particulares de cada caso y
las referentes a la distribucin y
metabolismo.
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PRINCIPALES MUESTRAS PARA


EL ANALISIS TOXICOLOGICO.
CONTENIDO GSTRICO.-Puede ser el
aspirado gstrico, liquido del lavado
gstrico (primeros 500 ml) o el vomito son
muestras que deben remitirse al
laboratorio siempre que sea posible.
Estas muestras son esenciales en el
screening general de txicos, ya que no
presentan problemas tcnicos en su
utilizacin.
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A menudo siempre se pueden


encontrar en ellas cpsulas o
tabletas enteras, de fcil
identificacin.

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Adems, si el toxico penetro por va


oral y no han trascurrido mas de 5
a 6 horas desde la ingesta, las
concentraciones sern
normalmente muy elevadas, lo cual
facilita su deteccin, por lo tanto, en
esta muestra se encontrara el
toxico en cuestin sin
METABOLIZAR.
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Un resultado negativo en el
screening del toxico partiendo
de esta muestra puede indicar
que el toxico no entre por esta
va o ya ha transcurrido un
tiempo excesivo desde la
ingesta, lo cual no descarta la
posibilidad de una intoxicacin.
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De cualquier forma, los


resultados obtenidos con esta
muestra no son representativos
del grado de intoxicacin,
puesto que se refiere al toxico
no absorbido.
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SANGRE
Es una de las muestras mas tiles
para la identificacin de txicos y
especialmente para el anlisis
cuantitativo. No hay que olvidar, sin
embargo, que los txicos orgnicos
bsicos alcanzan concentraciones
muy bajas en esta muestra, siendo
muchas veces difcil su deteccin
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La sangre se utiliza normalmente


para el screening
de txicos
acidos
y
neutros,
cuyas
concentraciones en caso de
intoxicacin son elevadas, y as
como para el estudio de gases y
sustancias voltiles, siempre que se
conserve en recipientes cerrados
hermticamente.
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Una de las recomendaciones muy


importantes es que se deben obtener
muestras de sangre que fluya libremente
sin necesidad de presionar ningn tejido
para obtener muestra fcilmente, por que si
se presiona se recoger tambin fluido
histico, introducindose as modificaciones
importante en la concentracin del toxico
detectado en la sangre. Este efecto ser
siempre ms evidente en aquellos txicos
que se unen a los tejidos ms que a las
protenas sanguneas.
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En caso de autopsia no se recomienda


el uso de sangre recogida de cavidades
abiertas, ya que pueden proceder de
varios tejidos y puede estar
contaminada con otros fluidos lo que
puede diluir o concentrar el toxico.

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La mayor parte de los txicos


orgnicos van disueltos en el plasma o
unidos a protenas, mientras que son
pocos los que se transportan unidos a
los hemates. Por lo que usando
sangre total nos aseguramos de que
tanto el toxico que se concentra en los
eritrocitos como los que se unen a las
protenas va a estar presentes en la
muestra analizada.
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Sin embargo, el plasma resulta ms


cmodo, ya que posee menos
interferencias y pigmentos que la
sangre, y se evita la formacin de
emulsiones con los disolventes
inorgnicos, como sucede
frecuentemente con la sangre total.

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Lo mas recomendable es el envi de


sangre total con adicin de un
anticoagulante adecuado. Tan pronto
como sea posible, se centrifuga para
separar el plasma, y evitar que la
hemlisis de los eritrocitos interfiera
con el anlisis posterior.

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Las muestras de sangre post mortem


estn a menudo hemolizados y
putrefactas, pero son las nicas
disponibles, por lo que es necesario
agitar vigorosamente la muestra para
conseguir una muestra homognea.
Para romper o disolver los cogulos,
puede aplicarse un tratamiento de
ultrasonido por 15 a 20 segundos.
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Para la toxicologa clnica, el anlisis


en esta muestra va mas all del
diagnostico etiolgico ya que tambin
permite evaluar la eficacia del
tratamiento instituido y en pocos
casos, el pronstico de la intoxicacin.

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ORINA
La orina representa una
muestra idnea para realizar
una gran variedad de ensayos
preliminares en el screening
de txicos.
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VENTAJAS
De estas muestras son que la
concentracin de un txico en este
fluido puede llegar a ser 100 veces
mayor que en la sangre y, adems, la
orina est exenta de protenas, por lo
que las interferencias son mnimas.
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DESVENTAJAS
Es que muchos txicos se eliminan
prcticamente en su totalidad como
metabolitos que a veces son
comunes, ya que en numerosas
ocasiones pertenecen al mismo
grupo farmacolgico (ejem.
Benzodiazepinas).
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Por lo que estos casos la identificacin del


txico requerir el anlisis de otros fluidos o
tejidos. Por otra parte, si la muerte se
produce rpidamente, como en el caso de la
inyeccin de un analgsico narctico o por
inhalacin de cido cianhdrico, la deteccin
del txico o sus metabolitos en orina ser
imposible.

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Es aconsejable no aadir
conservadores que podra interferir en
el anlisis, debiendo conservarse en
fro hasta su anlisis. En casos
necesarios puede usarse fluoruro
sdico o azida sdica.

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En el rea de toxicologa clnica, el


seguimiento de los anlisis
toxicolgicos en orina en diferentes
tiempos, permite adems evaluar la
respuesta al tratamiento establecido,
as a medida que las concentraciones
en la sangre descienden, las urinarias
se incrementan hasta que se llega al
estado de homeostasis.
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HUMOR VTREO
Su fcil accesibilidad, volumen suficiente
(casi 2 ml en cada ojo), no contener
demasiadas protenas, estar protegido
de la circulacin general, poseer pocas
enzimas y ser mas resistente a la
contaminacin bacteriana son factores
que hacen a esta muestra muy til para
el anlisis de alcohol y drogas.

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HGADO
Los niveles de txicos en este tejido
son en general superiores a los de la
sangre. En ocasiones el hgado
puede ser el nico tejido donde se
encuentre una sustancia toxica en
concentracin adecuada para su
identificacin y cuantificacin.
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Todo ello unido a su gran tamao,


determina su utilidad en los anlisis
toxicolgicos post mortem.
El hgado es particularmente til
cuando se trata de cuerpos
exhumados o en un avanzado estado
de descomposicin, casos en los que
es muy difcil obtener muestras de
sangre.
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Al extraer el hgado, es muy


importante evitar la contaminacin por
bilis, por lo que es aconsejable extraer
la vescula biliar antes de proceder a
tomar la muestra de hgado.

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No deben adicionarse conservadores


que puedan contaminar o producir
interferencias en el anlisis, debiendo
mantenerse, en la medida de lo
posible, a bajas temperaturas.

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CEREBRO
Es til cuando se trata de muertes por
inhalacin de disolventes ( tolueno,
cloroformo, etc.) debido a las altas
concentraciones que alcanzan esta
sustancias en el tejido cerebral,
donde, adems son retenidas tras la
muerte.
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Es til tambin para determinar la


concentracin e alcohol en
aquellos casos en que no se
dispone de una muestra adecuada
de sangre.

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Debido a la resistencia del cerebro


a la putrefaccin resulta una
muestra muy importante para el
anlisis toxicolgico cuando el
cuerpo es hallado varios das de la
muerte

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RION
Es el tejido de eleccin en
intoxicaciones por metales y otros
txicos que se acumulan
especficamente en l.

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BILIS
Es til para el anlisis de sustancias que
se eliminan por va biliar,
particularmente en las muertes por
sobredosis de opiceos, ya que
contiene altas concentraciones de los
glucornidos de dichos compuestos.
Debe extraerse la vescula intacta y
remitirse por separado de un recipiente.
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PELO
til para el anlisis toxicolgico de
txicos minerales, as como para la
deteccin de drogas de abuso, en
consumidores crnicos.

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ENVASADO Y CONSERVACIN
DE LA MUESTRA
Todas estas muestras deben ser
introducidas en recipientes
adecuados a ser posible de un solo
uso, para evitar la contaminacin. De
no ser as, deben estar
perfectamente limpios y secos.

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Las muestras lquidas (sangre, orina,


bilis) deben recogerse en tubos o
envases de vidrio o plstico con tapn
o cierre hermtico. Debe evitarse el
uso de tapones de goma o material
similar, ya que puede absorber
algunas sustancias o contaminar las
muestras (por ejemplo plastificantes).
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Cuando se sospeche que las


concentraciones del txico vayan a ser
muy bajas (<10ng/ml), es conveniente
silanizar los recipientes de vidrio a fin
de evitar la adsorcin del txico sobre
las paredes de los tubos.

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Las muestras slidas pueden


disponerse en envases de plstico de
boca ancha. El recipiente debe quedar
completamente lleno. Esto tiene la
doble finalidad de evitar la perdida de
componentes voltiles y reducir al
mnimo la oxidacin de los txicos por
el oxigeno atmosfrico.

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Las tapaderas deben cerrar


hermticamente, y los recipientes, ir
correctamente etiquetados. En la
etiqueta deben indicarse
circunstancias especiales tales como
si la muestra esta infectada con VIH,
hepatitis C.

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Hay que insistir que las muestras


destinadas al anlisis toxicolgico no
deben contener conservantes que
puedan interferir en el anlisis. Pero si
se considera necesario se pueden
utilizar;
* Azida sodica
*Fluoruro de sodio
*Oxalato de potasio
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Los lquidos utilizados para el


embalsamamiento producen
interferencias en el anlisis toxicolgico,
excepto los inorgnicos (metales y
aniones). Por ello las muestras deben
tomarse antes de llevar a cabo ninguna
manipulacin del cadver.

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Las muestras deben tomarse antes de


llevar a cabo ninguna manipulacin del
cadver, igualmente, el formol, utilizado
para conservar las muestras
destinadas al anlisis
anatomopatolgicos interfieren en el
anlisis toxicolgico.

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ALMACENAMIENTO DE LAS
MUESTRAS.
Descomposicin qumica y biolgica.
Un txico presente en una muestra
biolgica
puede
descomponerse
durante el almacenamiento, por lo que
ya no ser detectado en el anlisis.
Este hecho es importante cuando no
se conoce la identidad del txico o no
se sabe si realmente existe algn
toxico en una muestra.
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Son muchos los txicos que pueden


descomponerse durante el
almacenamiento de muestras, las mas
importantes son:
* Sangre o hgado a 4C
* Benzodiazepinas
*Cocana
*Metadona
*Morfina
*Paracetamol.
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FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA


DESCOMPOSICIN QUMICA Y LOS
PROCESOS DE PUTREFACCIN:
LUZ
OXIDACIN
HIDRLISIS
TEMPERATURA.

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LUZ
Los alcaloides del cornezuelo del centeno y las
Fenotiacinas son fotolbiles. Aunque en
muestras slidas como el hgado u opacas
como la sangre suelen estar protegidas, como
norma general deben protegerse de la luz.
Las muestras de orinas y las soluciones
acuosas de txico fotolbiles son muy sensibles
a la luz, siendo recomendable recubrir con papel
aluminio los envases e incluso los recipientes
utilizados durante el anlisis.
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OXIDACIN
Sustancias como las catecolaminas,
barbitricos, son compuestos fcilmente
oxidables, por lo que los envases deben
estar llenos y perfectamente cerrados
para excluir el oxgeno atmosfrico.

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Se pueden adicionar antioxidantes


como el cido ascrbico o metabisulfito
sdico al 1 %, p/v para eliminar el
oxgeno de la solucin, pero estos
agentes reductores pueden reducir los
metabolitos oxidados de algunos
txicos
presentes
en
la
orina
transformndolos de nuevo en sus
productos
originales
como
los
Antidepresivos Tricclicos.
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Un factor importante en los procesos


oxidativos es la presencia de iones
metlicos
que
actan
como
catalizadores. El efecto de los iones
pueden disminuirse adicionando una
protena, como la seroalbmina bovina.

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HIDRLISIS.
Muchos txicos son steres, como los
anestsicos locales, herona; pueden ser
fcilmente
hidrolizados
durante
el
almacenamiento a temperatura ambiente e
incluso a bajas temperaturas por las estearasas
presentes en la sangre y tejidos. De la misma
manera, el pH alcalino durante la extraccin
puede promover la hidrlisis de algunos
compuestos.
La actividad estearsica puede contrarrestarse
con la adicin de fluoruro sdico al 1 %, p/v.
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TEMPERATURA
Las
bajas
temperaturas
favorecen
la
conservacin de las muestras para el anlisis
toxicolgicos.
En trminos generales se recomienda
almacenar a 4C. siempre que vayan a ser
analizadas en unos pocos das.
Si van a almacenarse por mas tiempo, deben
congelarse a -20C, pero teniendo la precaucin
de descongelarlas una sola vez antes de ser
analizadas.
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Durante la congelacinDescongelacin puede producirse la


reduccin de ciertos metabolitos.
Si las muestras han de guardarse
mucho tiempo, es recomendable la
liofilizacin, sobre todo en el caso de
muestras que vayan a ser usadas
como patrones.
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