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Biotecnologia

2012
THE GRAPEVINE GUARD CELL-RELATED
VVMYB60 TRANSCRIPTION FACTOR IS
INVOLVED IN THE REGULATION OF STOMATAL
ACTIVITY AND IS DIFFERENTIALLY EXPRESSED
IN RESPONSE TO ABA AND OSMOTIC STRESS

Andreia Medeiros n31871


Diana Marques n32800
Nicole Rodrigues n32178
Rute Morais n31483
LBCM

Caractersticas da videira
A espcie Vitis Vinifera possui :
Bom ajuste osmtico
Sistema radicular grande e profundo
Controlo eficiente da abertura dos
estomas
Mecanismo de escape cavitao

Genes MYB
Factores de transcrio regulam respostas
fisiolgicas nos poros estomticos
Subfamlia MYB R2R3 :

Ao ABA
perda de funo do mutante atmyb60-1

Genes MYB especficos expressos nas


clulas-guarda ajudam na compreenso da
regulao estomtica
Alvos moleculares para melhoramento da
sobrevivncia das culturas e produtividade
durante a secura

O que foi feito... ?


Identificao de dois genes homlogos
do gene AtMYB60
Estudo em linhas transgnicas de
Arabidopsis
Comparao de regies reguladoras
Complementao dos defeitos
estomticos do mutante atmyb60-1

Resultados
Relaes filogenticas de homlogos MYB60

Subgrupo 1:

AtMYB60 - regulao dos estomas


pela luz (subgrupo 1.2) ;
AtMYB30 regulao de genes por
brassinoesterides (subgrupo 1.1);
AtMYB94 funo desconhecida
(subgrupo 1.1);
AtMYB96 medeia a sinalizao
pelo ABA , resistncia a agentes
patognicos (subgrupo 1.1)

Subgrupo 2: comtempla,
tambm, membros
relacionados com a resposta
secura pela sinalizao
com ABA

Genes MYB classificados em 4


grupos segundo a estrutura
dos genes

VvMYB30, VvMYB60, AtMYB60


Grupo 1

Expresso de VvMYB30 e VvMYB60 em tecido de


videiras e em resposta a factores hormonais e de stress

Expresso gnica em diferentes orgos da videira

Perfil de expresso em tecidos


de videira
B - Perfil de
expresso gnica
de VvMYB60 e
VvMYB30
durante o
desenvolvimento
da- semente
C
Perfil de
expresso gnica
de VvMYB60 e
VvMYB30
durante o
desenvolvimento
da pele da baga

Resposta a Stress
hormonal - ABA

VvMYB60

VvMYB30

Soluo
controlo
50 M ABA
100 M ABA

Resposta a stress
osmtico

Realizou-se uma experincia in vitro:

Entrens foram colocados verticalmente


em meio MS suplementado com :
3mM

NaCl
100 mM NaCl
200 mM NaCl

O Padro de expresso de VvMYB60 e


VvMYB30, em resposta ao aumento de
NaCl, oposto.

Actividade dos promotores de VvMYB30 e


VvMYB60 em linhas transgnicas de Arabidopsis

Usou-se um gene reprter Glucuronidase (GUS)

pVvMYB60:GUS
pVvMYB30:GUS

Construes
introduzidas em
Arabidopsis thaliana
por transformao
mediada por
Agrobacterium

15 dias depois:

Plntulas pVvMYB30:GUS

Plntulas pVvMYB60:GUS

Mudanas na expresso de GUS em


resposta ao tratamento com ABA

Controlo: pAtMYB60:GUS
pVvMYB60:GUS

pVvMYB30:GUS

Ocorrncia de motivos especficos no


promotor VvMYB60 das clulas guarda
Os resultados sugerem que os promotores de MYB60 em
Arabidopsis e na videira partilham elementos cis comuns,
responsveis pela expresso do gene reprter nas clulas guarda:
Factor de transcrio DOF
Sequencia consensus de DNA: [A/T]AAAG

Complementao funcional do mutante


atmyb60-1 de Arabidopsis por VvMYB60
atmyb60-1 alelo nulo
do gene AtMYB60 de
Arabidopsis

Ensaio in vitro
Abertura estomtica induzida pela luz

Abertura reduzida no
mutante atmyb60-1 em
relaco ao tipo selvagem

No h diferenas
significativas na abertura
estomtica entre
atmyb60-C30 e
atmyb60-1

Ensaio in vitro
Abertura estomtica induzida pela luz

Abertura reduzida no
mutante atmyb60-1 em
relaco ao tipo
selvagem

atmyb60-C60 exibem
uma resposta idntica ao
tipo selvagem houve
complementao total da
mutao do atmyb60-1

Ensaio in vivo: estimativa da quantidade de


gua perdida
por transpirao, de toda a planta, sob condies
de stress

Aspecto das plantas: mutante e


tipo selvagem aps 8 dias de
cessar a irrigao
(Cominelli et
al., 2005)

Ensaio in vivo
Perda de gua por transpirao

Muito reduzida no
atmyb60-1 em relaco
ao tipo selvagem

atmyb60-C30 no
mostram diferenas
comparadas com
atmyb60-1

Ensaio in vivo
Perda de gua por transpirao

Muito reduzida no
atmyb60-1 em relaco
ao tipo selvagem

atmyb60-C60 perda de
gua muito idntica ao
tipo selvagem
completo restauro das
deficincias estomticas
do atmyb60-1

Discusso
Identificao de um ortlogo de videira do factor de
transcrio AtMYB60

Gene VvMYB60 da videira ortlogo funcional do gene


AtMYB60
de Arabidopsis envolvido na regulao da abertura
estomtica,
induzida pela luz

Caractersticas de expresso do
VvMYB60 nos orgos da videira

Promotor de VvMYB60 leva expresso do gene


reprter nas clulas guarda de Arabidopsis

VvMYB60 um ortlogo funcional de


AtMYB60

Concluses

Bibliografia

Agarwal M, Hao Y, Kapoor A, Dong CH, Fujii H, Zheng X, Zhu JK: A R2R3
type MYB transcription factor is involved in the cold regulation of
CBF genes and in acquired freezing tolerance. J Biol Chem
2006,281(49):37636-37645.

Clough S, Bent A: Floral dip: a simplified method for Agrobacterium


mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J 1998,
16(6):735-743.

Cominelli E, Galbiati M, Vavasseur A, Conti L, Sala T, Vuylsteke M,


Leonhardt N, Dellaporta SL, Tonelli C: A guard-cell-specific MYB
transcription factor regulates stomatal movements and plant
drought tolerance. Curr Biol 2005, 15(13) :1196-1200.

Galbiati M, Matus J.T, Francia P, Rusconi F, Can P, Medina C, Conti L,


Cominelli E, Tonelli C and Arce-Johnson P: The grapevine guard cellrelated VvMYB60 transcription factor is involved in the regulation
of stomatal activity and is differentially expressed in response to
ABA and osmotic stress. BMC Plant Biology 2011, 11:142

http://www.delawarewildflowers.org/plant.php?id=0122