Etapa pre analítica

Antes de iniciar el estudio de la muestra , se debe conocer
algunos datos concernientes al paciente:

• Edad
• Género
• Factores Predisponentes
• Síntomas
• Antecedentes de ITU
• Tratamiento actual o previo con antibióticos

Recomendaciones previas para la muestra

Mujeres:
Hombres:
Se debe higienizar la zona genital
Se debe retraer el prepucio e
con agua y jabón, de adelante hacia
higienizar el glande y surco
atrás, secarse con toalla limpia, se
balano prepucial con agua y
deben colocar un tapón vaginal
jabón(no usar antisépticos).
(torunda de gasa o algodón) y se
recomienda orinar separando los
labios mayores.

Obtención de muestra
Tipo de muestra

Método Invasivo Método no Invasivo

Punción supra Cateterización Bolsa Sonda
púbica Chorro medio
vesical recolectora urinaria

Asa 10 ul recuento de colonias entre 100 y 1.000 UFC/ml. Utilizar micropipetas diferentes para cada volumen.A.000 UFC/ml. infecciones mixtas y hongos. . Macconkey Agar chocolate: Orina de riñón o muestras colectadas quirúrgicamente por cistoscopia. Método del Asa: Uso de nicrom o plástico. Método de la micropipeta ✓ Usar una micropipeta calibrada de 1 a 10 ul ✓ Puntas de pipetas estériles Comentario. Medios cromogénicos permite la detección rápida de los uropatógenos más comunes. porque ir de un extremo al otro del rango. Tamaños Asa 1 ul recuento de colonias mayores de 1. tiende a descalibrar el instrumento. PROCESO ANALÍTICO DE CULTIVO DE ORINA FASE ANALITICA • Medios de cultivo Agar Sangre .

Un organismo observado a 1. PROCEDIMIENTO Examen directo • Colocar 10 ul de orina bien mezclada sin centrifugar sobre una lámina portaobjetos. y deje que se seque al aire sin extenderla. Comentario: La tinción de Gram determina rápidamente el tipo y el recuento de bacterias y células en la orina. Coloración de Gram: • Colocar 10 ul de orina bien mezclada sin centrifugar sobre una lámina portaobjetos.000 UFC/ml en — 85% de los casos.000x correlaciona con un recuento de colonias de 105/ml de orina. pero una sensibilidad de solo 37%. . • La presencia de una bacteria/campo de inmersión tiene buena correlación con 100. • La presencia de muchas células epiteliales y morfotipos microbianos diferentes sugieren contaminación. colocar un cubreobjetos y observar a 40x • La presencia de más de 5 leucocitos por campo es considerado como indicativo de piuria. Nota: este resultado tiene una especificidad de 90% para predecir una infección urinaria asociada a catéter con más de 105 UFC/mL. • Determinar el número de organismos por campo de aceite de inmersión.

las muestras deben se sembrarse con asa de 1 ul.Métodos de cultivo • Agar Sangre y Agar Macconkey medio enriquecido. recolector y catéter. Las demás placas deben ser estriadas de tal forma que se obtengan colonias aisladas. las muestras pueden sembrarse con asa de 10ul(1colonia = 100 ufc/ml) y 1 ul (1 colonia = 1000 ufc/ml). • Para orinas obtenidas por cateterización vesical. • Orinas de chorro medio. El desarrollo de una colonia en el cultivo debe multiplicarse por 1000. Comentario: El recuento de colonias se debe realizar en el agar sangre. .

. MÉTODOS DE INOCULACIÓN PARA EL RECUENTO DE COLONIAS MÉTODO DEL ASA CALIBRADA • Para el aislamiento de colonias usar Agar Macconkey siguiendo el procedimiento anterior.

Sangre en 5% de CO2 para mejorar el desarrollo de los organismos gram (+) y bacterias dependientes de CO2. Comunicarse con el médico tratante ya que existen otras causas de sedimento urinario alterado que no corresponden a ITU o para saber si el paciente está recibiendo antibióticos. • En los siguientes casos se debe incubar el cultivo hasta por 48 horas: La muestra ha sido obtenida por una técnica invasiva.INCUBACION • Incubarse 16 a 18 horas a 35 . • Incubar el A.37° C. ambiente aeróbico. Paciente inmunosuprimidos incluye pacientes que han sido trasplantados. • Incube 48 horas urocultivo negativos con sedimento urinario alterado y sembrar en Agar Sangre con estría. como Cateterización Pequeñas o pocas colonias que hacen una lectura discernible. • Realizar cultivos anaeróbicos en aspiración suprapúbica. LECTURA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO • Lectura final es a las 24 hrs. . en una fístula vesiculoentérica y cuando se observen diferentes morfotipos bacterianos en el examen directo pero no crecen en cultivo aeróbico. Se requiere cultivo para hongos o levaduras ( ejm: cultivos de UCI neonata!).

0.UROCULTIVO POSITIVO Los cultivos (+).001ml 1colonia=1000UFC/ml 0.01ml 1colonia=100UFC/ml Cuando las colonias son demasiado numerosos para contar. • El máximo recuento usando el asa de 1ul es >105 UFC/ ml. • El máximo recuento usando el asa de 10ul es >104 UFC/ml. • Streptococcus agalactiae debe ser reportado de mujeres en edad fértil y de diabéticos conocidos. utilicé métodos de identificación rápida para identificar esta especie. independientemente del recuento. • Mantenga las muestras de orina en refrigeración por lo menos 24 horas para resolver cualquier problema con la muestra o resultados del cultivo. ESTUDIO POSTERIOR DE LOS CULTIVOS POSITIVOS: • Determine el recuento de colonias de cada morfotipo en el cultivo por separado examinando el agar sangre. • Mantenga las placas con cultivo positivo a temperatura ambiente hasta 48 por si el médico solicitara algún estudio adicional. • No informar recuento en levaduras . examinar los medios de cultivo para la cuantificación y tipo morfológico de los organismos presentes. • Debido a que E. coli representa el 80% de los patógenos en cultivos de orina.

FASE POST-ANALITICA REPORTE DE RESULTADO a) Reporte de la Tinción Gram: resultados de bacterias y células. • Reportar el recuento de colonias de cada patógeno por separado. reportar: Se detectó inhibidor antimicrobiano con su recuento respectivo. se sugiere nueva muestra. • Los cultivos mixtos son reportados con el recuento en UFC/ml. reportar como cultivo negativo y el recuento será de "10. . por 24 o 48 horas.000 UFC/ml de microbiota urogenital normal. Negativo dil 1/100 UFC/ml Negativo dil 1/1000 UFC/ml. posible contaminación. b) Cultivos Negativos. Reportar: de acuerdo al asa calibrada utilizada. reportar: Si solamente se observa microbiota urogenital o de la piel. • Cuando se observa inhibición por antimicrobianos. • c) Cultivos positivos. seguido por "múltiple morfotipos bacterianos presente.

INTERPRETACION • El criterio de >_ 105 UFC/ml para significancia puede ser aplicado a la mayoría de las muestras enviados para cultivo. • Un cultivo mixto en un paciente ambulatorio no complicado probablemente indica contaminación. • Recuentos menores (<104/ml) de bacterias comúnmente encontrados sobre la piel y genital interno y externo son considerados ser contaminantes. pero en circunstancias especiales. un recuento de Enterobacteriaceae de 102 UFC/ml o más. . lo siguiente será cierto. pueden ser considerado significativo. • Recuento de colonias <105 UFC/ml en muestras emitidas con presencia de disuria y síntomas de ITU puede ser significativo. Sin embargo.

Gérmenes normalmente encontrados en la piel o genitales externos e internos. Hacen diagnóstico de ITU. saprophyticus o Enterococcus spp. Recuentos entre 105 y 103 UFC/ml. si el paciente es sintomático o si el gérmen es S. c) Generalmente. el aislamiento de tres o más especies bacterianas indican que la muestra se ha contaminado por recolección inadecuada o demora en la siembra. la cuenta significativa de bacterias en orina es la presencia de más de 105 UFC / ml de un solo germen. b) Los recuentos intermedios (103 – 104 UFC / ml) indican infección si el procedimiento de recolección de orina fue realizado correctamente. así también se pueden encontrar bacteriurias polimicrobianas hasta en casi 15% de enfermos. si es gram positivo. . Pero en ciertas circunstancias recuentos de 102 UCF/ml o más especialmente por Salmonella o Shigella pueden ser considerados significativos. se confirma en 92% de casos si el gérmen aislado es gram negativo y en 70%. cuentas bacterianas menores de 105 UFC / ml pueden tener significado. Tener en cuenta los siguientes criterios para la interpretación de resultados: a) En pacientes sin sonda vesical. d) En pacientes con sonda vesical.

01 mL debido a que en dichos pacientes pueden haber infecciones del tracto urinario asociados a recuentos menores de 10105 UFC/ ml.001 mL para todas las muestras de orina a excepción de aquellas procedentes de aspirados suprapúbicos. el recuento es nulo o se reduce a pocas colonias. utilizar tips estériles y micropipeta de 1ul o 10uL. NOTA1: Se usa asas de siembra 0. . NOTA 2:De no contar con asa calibrada.e) En pacientes sin infecciones del tracto urinario. de infantes. sospechar contaminación y repetir el estudio. . las cuales se inocularán con asas de 0. g) Si en el urocultivo desarrolla flora polimicrobianas. fístula vésico-intestinal o vésico-vaginal h) Cuando el urocultivo es positivo y el paciente está asintomático. vejiga neurógena. el desarrollo de una sola colonia en el medio de cultivo indica infección del tracto urinario. Sin embargo hay situaciones en que la flora puede ser polimicrobiana: portador de sonda vesical. de niños y de pacientes con tratamiento antimicrobiano. es necesario repetir el estudio. f) En muestras obtenidas por punción suprapúbica.

subtilis con solución salina similar al tubo 0. • Sembrar la placa de A. Materiales Pinzas Discos de papel de filtro estériles de Papel filtro. • Tomar con la pinza un disco de papel filtro y colocarlo en la placa sembrada. Cepa de Bacillus subtilis. • Colocar 10 µL de orina con una asa calibrada o una micropipeta • La placa será incubada a 35°C por 18 horas en aerobiosis. Placa de Agar Muelle Hinton 100 x 15 mm. Mueller Hinton con la suspensión de bacterias de manera similar a un antibiograma. Tubo con solución salina estéril x 2 ml. • según una plantilla numerada o colocando el número en la parte posterior de la placa.5 de la escala de Mc Farland. Procedimiento • suspensión de B. • Dejar secar a temperatura ambiente aproximadamente 15 min.DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS ANTIBACTERIANAS RESIDUALES EN ORINA Determinar la presencia de sustancias antibacterianas residuales en orina. .

Reporté de resultados El resultado se informa como "Actividad antimicrobiana: Positiva o Negativa“ Comentario • El medio de cultivo debe estar a temperatura ambiente y la superficie debe estar seca. • Mantener la cepa de Bacillus subtilis en un tubo o placa de agar Mueller Hinton. todas la semanas hacer una resiembra para la prueba. .Interpretación Se buscará la presencia de un halo de inhibición alrededor del disco con la orina. La ausencia de halo se considera como prueba negativa. Cualquier diámetro de halo se considerará como prueba positiva.

PROCEDIMIENTOS PARA LA REALIZACION DEL ANTIBIOGRAMA VALORES CRÍTICOS DEL ANTIBIOGRAMA • Los valores de las concentraciones y de los diámetros críticos que delimitan las categorías (S. I. los valores críticos de las concentraciones bajas (c) y altas (C) y de sus diámetros correspondientes (d. las concentraciones séricas y tisulares de los antibióticos. permiten la categorización según los siguientes criterios (Tabla1): . son la integración de un conjunto de elementos: la distribución de las CIM para diversas poblaciones de cepas sensibles y resistentes. R). D). PROCEDIMIENTO DE CATEGORIZACIÓN • Para los principales antibióticos.

El correcto funcionamiento de los instrumentos y equipos nos asegura la garantía de la calidad.La lectura interpretativa del antibiograma. MATERIALES Y EQUIPOS los equipos utilizados deben estar en condiciones óptimas. sin embargo. Esta lectura interpretativa requiere la identificación correcta de la bacteria y una correcta realización del antibiograma. Recomendaciones Generales Cada instrumento tiene sus propias características y por lo tanto indicaciones especificas de mantenimiento y su respectivo control de calidad. hay recomendaciones generales que son aplicables a todo equipo de laboratorio como: . fundada en el conocimiento de los antibiofenotipos de sensibilidad y resistencia permite recategorizar un resultado inicialmente S en I o R debido al riesgo de fracaso terapéutico. así como el mantenimiento de buenas prácticas de seguridad tiene una importante influencia sobre el trabajo y productividad global del laboratorio.

refrigeradoras. congeladores estándar (± 5°C).8°C). Actividades dependientes de la Temperatura: •. Los equipos de funcionamiento como estufas. Precauciones eléctricas: •. Incubadoras (± 1°C). baños de agua (± 1°C). luz UV y el filtro deben ser verificado cada 6 meses. •. refrigeradoras (4º. Los eléctrico debe estar conectado a tierra y no sobrecargar los circuitos.a. el flujo de aire. b. c. Limpieza de las superficies externas: • Utilizar toallas con suave embebidas como alcohol de 70% • Usa hipoclorito de sodio. congeladores etc deben conectarse a un generador electrógeno de emergencia. Autoclave 121°C/ 15 min (± 1ºC). . cabinas de bioseguridad (velocidad del flujo de aire debe sus límites de tolerancia de 45 – 55 pies/min).

Equipos Materiales MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS Potenciometro pH – metros Vernier o Regla Incubadoras Termómetros Agar Mueller Hinton Refrigeradores Pinza punta plana Caldo Mueller Hinton Autoclave Placas Petri Agar Mueller Hinton con 5% de sangre de carnero Cabinas de bioseguridad Erlenmeyer Haemophilus test medium (HTM) Baño maría Hisopos de Discos de sensibilidad antibiótica Algodón Espectrofotómetro o Tubos con Tapa Cloruro de Bario (BaCl2) Fotocolorímetro Rosca Vortex (digitador para tubos) Pipetas Ácido Sulfúrico (H2SO4) .

luego. • Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton.PREPARACIÓN DEL AGAR MUELLER HINTON • Autoclavar y dejar enfriar en baño de agua hasta que alcance los 45°C . para placas de 150 mm o 100 mm de diámetro interno respectivamente). incubando una o dos placas de cada lote a 30°C – 35°C durante 24 horas o más. • El valor del mismo debe encontrarse entre 7.4 a temperatura ambiente.2 y 7. Estas placas utilizadas deben ser.50°C. descartadas. . medir el pH del agar . • Repartir el medio en placas Petri (60 ml – 70 ml o 25 ml – 30 ml. • Una vez esterilizado y solidificado. de manera que el grosor del agar en la placa sea de 4 mm.

5 MC. Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura ambiente y anotar la fecha de preparación.5 ml de una solución de y 99. Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapón de jebe. en un agitador mecánico Verificar mensualmente la densidad de los estándares de sulfato de bario. y reemplazarlo cuando sea necesario. Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estándar de preferencia.08 a 0. FARLAND) PARA EL INÓCULO Agregar 0.5 mL de una solución de en constante movimiento para mantener la suspensión.10 para el estándar 0. cuya absorbancia a 625 nm es 0. Farland.5 de Mc. .PREPARACIÓN DEL ESTÁNDAR (0. Verificar la densidad correcta del estándar usando un fotocolorímetro ó espectrofotómetro. similares a los que se usarán para preparar el inóculo.

d. Estabilidad de la molécula en los discos para antibiograma. Eficacia clínica documentada. Representatividad de una familia de antibióticos. b. f. Disponibilidad de criterios técnicos fiables para la determinación in vitro de su eficacia clínica. . Importancia para la vigilancia de la resistencia bacteriana. Presencia en el mercado nacional. e. c.SELECCIÓN DE LOS DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA Los antibióticos han sido realizado teniendo en cuenta los siguientes criterios: a.

b. c. Caldo Tripticasa soya). La suspensión preparada contendrá aproximadamente 1 a 2 x 108 UFC/mL para E. Farland (por lo general de 2 a 6 horas). Ajustar la turbidez del inóculo con solución salina o caldo apropiado hasta el tubo 0. hasta que alcance o exceda la turbidez del estándar 0. d. Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas. Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej. Incubar el caldo a una temperatura entre 35°C a 37°C. del mismo tipo morfológico. coli ATCC 25922.PREPARACIÓN DEL INÓCULO Puede realizarse de dos formas: Método de desarrollo previo a. Farland. Para realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra un fondo blanco con líneas negras como contraste.5 de la escala de Mc. e. de un cultivo en placa.5 de la escala de Mc. por comparación visual con el estándar. .

b. Antes de colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido.5 de Mc.24 h. Farland. sumergir un hisopo estéril en la suspensión. seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensión directa en solución salina ó caldo. estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar una distribución uniforme del inóculo. Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton. rotar el hisopo varias veces presionando firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del líquido para remover el exceso de inóculo. De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 . Inoculación de las Placas Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo. •. .• Método directo de inoculación a partir de colonias aisladas a. La suspensión debe ser inmediatamente ajustada a la escala 0.

ni más de 6 en una placa de 100 mm de diámetro interno. Un disco no debe ser removido una vez que tomó contacto con la superficie del agar debido a que algunos antibióticos se difunden rápidamente. para evitar la superposición de las zonas de inhibición. No deben colocarse más de 12 discos en una placa de 150 mm. de modo que estén a una distancia mínima de 25 mm uno del otro (el diámetro de los discos según las normas de la Organización Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm).APLICACIÓN DE LOS DISCOS Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza estéril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar. . Distribuir los discos uniformemente.

INCUBACIÓN Incubar lar placas en posición invertida a 35°C dentro de los 15 minutos posteriores a la aplicación de los discos. respectivamente. deben ser incubadas en atmósfera del 5% de CO2. . En los casos de Staphylococcus spp y Enterococcus spp el tiempo de incubación debe prolongarse por 24 horas para una mejor detección de la resistencia a Oxacilina y Vancomicina. Las placas de Haemophilus spp y Streptococcus spp. Después del tiempo recomendado de incubación examinar cada placa y medir los diámetros de los halos de inhibición alrededor de cada disco.

Tener cuidado de no medir la zona de la hemólisis sino la de inhibición del crecimiento. Cualquier desarrollo dentro de la zona de inhibición es indicativo de resistencia a Meticilina (Oxacilina) o Vancomicina. las zonas son medidas en la parte superior de la superficie del agar y retirando la tapa. usar luz transmitida . • Para Staphylococcus spp o Enterococcus spp. • En los medios suplementados con sangre.manteniendo la placa arriba de la luz para examinar un posible ligero crecimiento de cepas resistentes a Oxacilina/Meticilina o Vancomicina dentro de los halos aparentes de inhibición. . • Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa Petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centímetros sobre un fondo negro.LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS • Medir los diámetros de las zonas de inhibición usando una regla o calibrador.

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA Grupo I Grupo II Ampicilina Cefoxitina Cefalotina Aztreonam Ampicilina Ampicilina / Sulbactam o Ceftazidima Cloramfenicol Amoxicilina / Ácido Clavulánico.5 de la escala de Mc. Cotrimoxazol Cefuroxima Cefixima (Trimetoprim/Sulfametoxazol) Cefotaxima o Ceftriaxona Cefoperazona/Sulbactam Ciprofloxacina Gentamicina Cefepime o Cefpirome Amikacina Imipenem o Meropenem Cefotaxima Ácido Nalidíxico Cloramfenicol Norfloxacina Ofloxacina Ciprofloxacina Cotrimoxazol (Trimetoprim/Sulfametoxazol) Nitrofurantoína • Disco utilizado para infecciones de las vías urinarias . Farland. ANTIBIOGRAMA PARA Enterobacteriaceae MEDIO DE CULTIVO: Agar Mueller Hinton INOCULO: Método de crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente al estándar 0.

Cefalosporinas de primera generación y Cefoxitina. Oxacilina. Proteus mirabilis R Nitrofurantoína. Resistencias Naturales Las enterobacterias son resistentes a Penicilina. Cefuroxima y Nitrofurantoína. Providentia stuartii R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas. Cefalosporinas 1era generación. . Cefalosporinas 1era generación. Cefalosporinas 1era generación. Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoína. Cefuroxima y Nitrofurantoína. Proteus vulgaris R Aminopenicilinas. Morganella morganii R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas. cloacae y Enterobacter aerogenes Cefalosporinas 1era generación y Cefuroxima. Macrólidos. Klebsiella spp R Aminopenicilinas Citrobacter freundii. Enterobacter R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas. Clindamicina y Glicopéptidos. Serratia marcescens R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas.

INCUBACIÓN 35°C LECTURA 15-18 h INTERPRETACIÓN DE LOS DIÁMETROS CRÍTICOS Antibióticos y diámetros críticos .

.

para al menos uno de estos antibióticos. . la tabla 7 señala los diámetros para Ceftazidima. DETECCIÓN DE LAS ENTEROBACTERIAS PRODUCTORAS DE “BETALACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO” Algunas cepas productoras de estas enzimas pueden presentar halos de inhibición lo suficientemente grandes como para ser clasificadas erróneamente como sensibles a las Cefalosporinas de tercera generación y a Aztreonam. iguales o inferiores a los diámetros referidos en tabla 7 deberá realizarse un test confirmatorio de la presencia de “betalactamasas de espectro extendido”. Cefotaxima. Ceftriaxona y Aztreonam que serán utilizados como test de tamizaje y que permiten sospechar la presencia de estas enzimas: Si la cepa estudiada presenta halos de inhibición. Con el objeto de superar esta dificultad.