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Cap.

18
propagacin
vegetativa de
las orqudeas

Lic. En Biologa
BIOTECNOLOGIA
Aguilar Bello Mariam E.
Briones Caloca Coral
Coronado Rivera Diana A.
Ramrez Mndez Juan L.
INTRODUCCION
Las orqudeas se pueden multiplicar tanto
de forma vegetativa como sexual. Si se
utiliza la propagacin vegetativa la
descendencia es idntica a la madre. Si se
hace una propagacin generativa, solo raras
veces se obtiene una descendencia
semejante los padres, y esto solo en el caso
de especies silvestres.
Las orqudeas se pueden propagar solo de
forma vegetativa.
Elclonada de orqudeas in vivo es un
proceso muy lento y se puede requerir
de hasta 10 aos para obtener un clon
de tamao aceptable.
Morel intento obtener Cymbidium libres
de virus, por cultivo de meristemos, y
para esto aisl pices del vstago in
vitro.
A partir de estos pices del vstago se
obtuvieron unos cuerpos protocormicos
que eran extremadamente parecidos a los
que se forman despus de la germinacin de
la semilla.
Esto se consigue cortando el protocormo en
porciones.
En el caso de Cymbidium se pueden producir
de 6-8 protocormos a partir de uno inicial
alrededor de 6 semanas.
Fig. 18.2
De esta forma Morel produjo miliares de
plantas en un ao a partir de un nico pice
de vstago.
Este mtodo se modifico mas tarde para
Cattleya y otros muchos gneros de
orqudeas.
El meri-clonado de orqudeas (propagacin
vegetativa por cultivo de meristemos) se
realiza ahora en gran escala en el mundo
entero.
Los protocormos que se desarrollan
despus de la germinacin de una
semilla de orqudea, tienen un estado
morfolgico que se encuentra a mitad
de camino entre un embrin
indiferenciado y un vstago.
Cultivo de meristemos

Produccin de plantas libres de virus


Una de las condiciones necesarias para la
propagacin, es que las plntulas obtenidas
deben estar libre de virus. Se sugiere que por
medio de cultivo de meristemos, se obtiene de
manera automtica plantas libres de virus,
pero en realidad no ocurre as. Las
investigaciones llevadas por Morel (1960) con
Cymbidium, demostraron que solo se obtenan
plantas libres de virus en caso de usar
meristemos con dos primordios foliares.
El virus con mas frecuencia en las orqudeas
es una cepa especializada del virus del
mosaico del tabaco (TMV-O), que se conoca
antes como virus de la mancha anillada del
Odontoglossum.

Este virus se transporta en la savia y la


contaminacin se puede producir a partir de
las manos o cualquier objeto cortante.
Produce manchas en forma de anillo en las
hojas de Cattleya y afecta a la forma y al
color de las flores de muchas otras
orqudeas. Un virus menos frecuente el
mosaico en Cymbidium, tambin
transportado en la savia responsable de
manchas o rayas clorticas en las hojas de
Cymbidium, Phalaenopsis y Vanda, y de
necrosis en las flores de Cattleya.
Cattleya

Cymbidium,

Phalaenopsis

Vanda
Propagacin por cultivo de
meristemos
Vstagos jvenes (10-15 cm de longitud).
Lavar con agua corriente, y se retirar las hojas
de manera que se vean sus yemas auxiliares.
Se baa en vstago sin hojas, en alcohol de
70%.
Esterilizar 10 minutos en una leja 3-10%.
Preparar las yemas auxiliares despus de
haberlas aclarado en agua estril.
Esterilizar una vez ms incluyendo adems
Tween 20 u 80, volvindolas a aclarar en agua
estril.
Las bases de las yemas ms pequeas se
cortan y eliminan en una cmara de flujo
laminar, y se realiza la siembra. En caso de
las yemas ms grandes se retiran algunas
hojas.
Aislamiento (6-10 semanas), hasta que se
forman los primero cuerpos protocrmicos,
se separan y son repicados.
Actualmente se siembran yemas con al
menos 3-4 primordios foliares, con lo que se
consigue un mejor nivel en el procedimiento de
los esquejes.
Cymbidium:
Solamente las zonas de
alrededor de los
primordios foliares
muestran crecimiento
para transformarse en
protocormos, sin
necesidad del meristemo
apical.
Medio de cultivo Knudson
C.
Fonnesbech (1972) indic
que el GA3 induca el
crecimiento por
elongacin.
Cattleya :
Cortar el meristemo en lquido, y cultivarlo despus en un medio
lquido, en el cual la colaboracin marrn difunde con ms
facilidad,
Aislar una yema completa (3-5mm).
Se utiliza un medio ms complicado, aadindosele a veces
auxina, citokinina, leche de coco y peptona.
Protocormos necesitan bastante tiempo y generalmente empiezan
con las bases de las hojas ms viejas.
Los primordios foliares aislados forman protocormos.
Medio de cultivo especial
Aislamiento de meristemos en medios lquidos, y el crecimiento
de protocormos hasta plntulas en medio slido.
Miltonia, Odontonia
y Odontoglossum:

Ofrecen regeneracin
en la base de las
hojas .
Se cultivan tambin
en un medio
relativamente rico,
Respuesta rpida.
pH entres 4,8 - 5,8
Sacarosa 1-3% (p/v) o glucosa 1,5% +
fructosa 1,5%
Las orqudeas monopdicas en presencia
de azucar se produce amarilleamiento y la
muerte del meristemo
Leche de coco (10-15%) en cultivo de
plntulas para estimular la formacin de
protocormos en las clulas epidrmicas.
La adicin de reguladores genera
posibilidades de mutacin gracias a su
presencia.
Temperatura 22 y 28C.
Luz fluorescente de 12-16 horas diarias.
Se puede usar una baja irradiacin para el
aislamiento, pero sta se debe
incrementar cuando las plntulas se
forman a partir de protocormos.
Multiplicacin por cultivo de meristemos:
1. Sobre un medio slido;
2. En un medio lquido en movimiento, que
se mantiene as por accin de rueda
giratoria.

Su velocidad es extremadamente variable,


pero la mayora prefieren una velocidad
lenta (2-5 revoluciones por minuto.
La propagacin y el crecimiento son mejores en
un medio en movimiento que en un slido.
En los medios lquidos existe un mejor
suministro de oxgeno y el transporte de
nutrientes es ms eficaz.
Las plntulas con 3 o 4 hojas alcanzan los 5-7
cm de altura se transfieren a cajas, despus de
varios repicados.
Suelo esterilizado con vapor.
Abono depende de la clase de orqudea.
Generalmente se utiliza una turba suave,

a la que se sube el pH y se le aaden


nutrientes.
Otros mtodos de
propagacin.
Con el paso de los aos se han
desarrollado algunos otros mtodos,
adems del cultivo de meristemos, para
clonar orqudeas en pequeas escalas:
1.- Utilizacin de hojas jvenes: Las hojas
jvenes y los pices de hojas forman callos
en sus bases, a partir de los cuales se
pueden formar protocormos, que se pueden
utilizar para la regeneracin de plntulas.
(Champagnat y Morel 1969).
2.- Yemas durmientes: se pueden
obtener vstagos a partir de primordios
jvenes de yemas florales, o de yemas
basales, vegetativos durmientes de
inflorescencia Dandrobium, Vanda,
Oncidium, Thunia,etc. ( Teo (1976-1978,
rotor en 1949 fue el primer investigador
que clono Phalaenopsis de esta forma.

3.- Inflorescencia jvenes: Intuwong


y Sagawa (1973), desarrollaron un
mtodo para propagar Vascostylis,
Neostylis y Ascofinetia, in vitro, a partir
de explantos de inflorescencia jvenes.
Estos explantos generaban tejido que se
transformaban en protocormos cuando
se cultivaban en un medio especial.
4.- Callo: Champagnat y Morel (1972),
regeneraron tejido calloso a partir de tejido
procedente de rizoma de Oplurys.
5.- Plntulas jvenes: estas pueden ser inducidas a
regenerar, como fue demostrado por Pierik y
Steegmans (1972), con calleya aurantiaca, siendo
la citokinina el factor inductor.
6.- Etiolacin: si son etioladas plntulas de
Paphiopedihum cultivadas in vitro, hacindolas
crecer en la oscuridad o con poca irradiacin,
pueden utilizarse en el mtodo de segmentos
nodales ( Pierik y Sprenkels).
VARIACIONES QUE APARECEN
DURANTE EL CULTIVO
Vajrabhaya (1979), indico que las desviaciones
que se encuentran durante la multiplicacin de
las Orqudeas se pueden deber a tres causas:

1.- Quimeras: las plantas que constituyen una


quimera natural, frecuentemente tienen una
descendencia heterogenia, cuando se
propagan in vitro; sin embargo, cuando se
regenera un protocormos, es a partir de una
nica capa de clulas, por lo que se pierden las
caractersticas propias de la quimera.
2.- virus: los virus pueden dar origen a
apariencias, que aparecen mutaciones.

3.- Mutaciones: la causa mas importante de


las desviaciones son las mutaciones, que son
especialmente frecuentes cuando se utilizan
reguladores y/o cuando tienen lugar una
multiplicacin repetida.
Tambin se pueden producir mutaciones de
forma artificial con colchicina o por medio de
radiaciones ionizantes.