TOXICOLOGIA

En el momento actual se reconoce que la Toxicologa es una

ciencia multidisciplinaria.

Esta caracterstica es una de las razones del rpido desarrollo

de la Toxicologa en los ltimos aos, gracias a las
contribuciones de profesores, investigadores y profesionales
de muy diferente formacin inicial ( Repetto, 1.995).

Existen muchas definiciones de la misma; una de las ms completa

es la siguiente:

Toxicologa - es la ciencia que estudia las sustancias qumicas en

cuanto que son capaces de producir alteraciones patolgicas en los
seres vivos, con sobrevida- con o sin secuelas - o muerte , estudia
los mecanismos de produccin de dichas alteraciones y los medios
para contrarrestarlas antdotos o antagonistas - , as como los
procedimientos para detectar, identificar y cuantificar tales agentes
y evaluar su grado de toxicidad , como tambin su dispersin en el
medio ambiente ( Repetto, 1.981 y 1.997).

 Productos
Qumicos

Exposicin

Efectos
Toxicidad : Capacidad para producir dao a un organismo vivo en
relacin a la cantidad de sustancia administrada o absorbida, la va
de administracin, y su distribucin en el tiempo

Dosis: Cantidad de sustancia por kilogramo de peso que es capaz

de
producir un efecto en 24 horas
 Intoxicaciones y sus clases

A-Intoxicacin Aguda B- Intoxicacin Crnica

salud a c a c
d e d
f

tiempo

b
enfermedad a- estado de salud
b b- posibilidad de muerte
c- recuperacin total
d- recuperacin con secuelas
e/f - progresivos dficit salud
 Intoxicacin aguda : nica dosis con
aparicin de sintomatologa antes de
las 24 horas

Toxicidad Aguda

Toxicidad Crnica

Intoxicacin crnica : Absorcin

repetida de un toxico en largos
periodos de tiempo
 Distintos Tiempos en un proceso txico

Absorcin Mximo
-Muerte- Desaparicin
Aparicin

Latencia Duracin del efecto

 Agente Xenobitico
Etimologa: Ajeno a la vida, todo cambio significativo en la
composicin o condiciones naturales de un medio constituye
una forma de contaminacin que afectan al recurso en s o a
su uso para un fin determinado

Los agentes que lo provocan pueden ser: qumicos, fsicos,

biolgicos

El medio afectado puede ser aire, agua, suelo o cualquier

sustrato orgnico

Los agentes pueden producirse en forma espontnea o

provocada por la actividad del hombre

En cuanto a la composicin puede ser una variacin anmala

en su proporcin o la incorporacin de sustancias que no se
encuentran en el ambiente en forma normal e introducidas
por la actividad del hombre
 Caractersticas txicas del agente
Dosis Letal 50 (DL50) :xenobitico
Es la dosis que produce la muerte del 50
los animales de un lote de experimentacin.
[DL50] = miligramos de compuesto por kilogramo de peso del a

A menor valor de la DL50 , ms peligrosa es la

sustancia respecto de otra de mayor magnitud.

Sustancia Qumica DL50 mg/kg

Etanol 10.000

Cloruro de sodio 4.000

Estricnina 2

Nicotina 1

Toxina Botulnica 0,00001

Denominacin DL50 oral rata Dosis oral letal hombre
adulto

Extremadamen Menor a 1 mg/Kg 1 gota

te txico

Altamente 1 50 mg/Kg 1 cucharada ( 4 ml)

txico

Moderadament 50 500 mg/Kg 30 g

e txico

Ligeramente 0,5 5 g/Kg 250 g

txico

Prcticamente 5 15 g/Kg 1 litro

no txico

Relativamente Mayor a 15 g/Kg Mayor a 1 litro

inocuo
Pueden emplearse como indicadores , otros efectos diferentes
a los de la muerte

Por ejemplo, Indicadores Biolgicos de Exposicin , los cuales p

ser :

A- Qumicos : Concentracin del toxico o sus metabolitos en

fluidos biolgicos

B- Bioqumicos : modificacin de parmetros bioqumicos

fisiolgicos ( Me Hb; actividad enzimtica ,etc)

C- Funcionales : Capacidad respiratoria, vol.min circulatorio

D- Histolgicos: Lesiones tisulares

Los marcadores biolgicos, tambin denominados
determinantes o indicadores biolgicos de exposicin a un
compuesto qumico pueden ser, segn su naturaleza, el
propio compuesto, sus metabolitos caractersticos,
productos procedentes de reacciones de conjugacin del
compuesto o de sus metabolitos que se puedan producir en
los ciclos bioqumicos endgenos, formados por
reaccin del compuesto o por sus metabolitos con
macromolculas, interferencias bioqumicas o enzimticas
medibles, etc .
Los medios biolgicos en los que se
puede determinar la
presencia de los marcadores biolgicos
de exposicin laboral
estn muy relacionados con las vas de
entrada, distribucin
y eliminacin de cada compuesto, as
como con su
naturaleza qumica

La mayora de las determinaciones

biolgicas
se realizan en sangre, orina o aire
exhalado
La sangre constituye el principal vehculo de transporte y
distribucin de los compuestos qumicos en el cuerpo,
por tanto la mayora de las sustancias biolgicamente
activas o sus metabolitos se pueden encontrar en este
medio.

La orina es fcil de recoger, se pueden utilizar grandes

volmenes de muestra y es tambin una tcnica no
invasiva.

Las determinaciones en aire exhalado estn limitadas a la

exposicin a compuestos orgnicos voltiles; es un
mtodo no invasivo y el mejor aceptado por la poblacin
por la sencillez de la toma de muestra .
 Vas o rutas de absorcin

Barrera Biolgica

Cutnea
Xenobitico Distribucin
Gastrointestinal

Alveolar

rgano blanco
Placentaria

Otras Efectos
Incorporacin de los Txicos al organismo

Contaminante

Va Respiratoria Va Drmica Va Digestiva

 ECOTOXICOLOGIA # TOXICOLOGIA

Toxicologa: estudia las interacciones nocivas entre sustancias

qumicas y organismo vivos

Objeto de estudio: individuos

Ecotoxicologa: estudia los efectos de los contaminantes sobre los

ecosistemas

Objeto de estudio: poblaciones, comunidades, ecosistemas

 ECOTOXICOLOGA
Ecotoxicologa: estudia el destino y los efectos de los contaminantes
en los ecosistemas intentando explicar las causas y prever los riesgos
probables
Destino de los contaminantes: emisin, distribucin, transporte,
transformacin (qumica/biolgica), bioacumulacin
Efectos biolgicos de los contaminantes: sobre las poblaciones,
comunidades y ecosistemas
Modificaciones en la estructura y funcionamiento del ecosistema:
declinacin de aves, diversidad de especies de algas,
disminucin/aumento de la productividad primaria
Contaminante: toda forma de materia capaz de alterar, modificar o
interferir en forma negativa con los elementos del ambiente siendo
factor de riesgo para el hombre y otros seres vivos
Efectos directos contaminantes: actan sobre los individuos (y a
travs de ellos sobre las poblaciones, comunidades, ecosistemas)
ejemplos: metales pesados, pesticidas
Efectos indirectos contaminantes: actan sobre el medio fsico,
ejemplos: slidos suspendidos, materia orgnica
 ECOTOXICOLOGA
Efecto txico: es el producido por uno o varios agentes txicos sobre
un organismo, poblacin o comunidad que se manifiesta por cambios
biolgicos y su grado se evala por una escala de intensidad
relacionada con la dosis (cantidad administrada/unidad de peso
corporal) o la cc (sustancia aplicada al medio) del agente txico
El efecto puede ser:
Cuantal: presencia o ausencia de una caracterstica
Letal: muerte por accin directa consecuencia de la exposicin
Subletal: por debajo del nivel que causa la muerte
Agudo: efecto que se manifiesta rpida y severamente despus de un
corto perodo de exposicin: 0-96hs
Crnico: efecto luego de un largo perodo de exposicin (das o aos)
segn la especie
Combinado: dos o ms sustancias aplicadas al mismo tiempo
producen distintos efectos o modos de accin
Potenciacin o sinergismo: cuando la toxicidad de una mezcla es
mayor a la esperada debido a la suma de toxicidades de los agentes
individuales
Inhibicin o antagonismo: cuando la toxicidad es menor a la esperada
debido a la suma de toxicidades de los agentes individuales
 ECOTOXICOLOGA
Ensayos de toxicidad: tienen como propsito determinar si los
compuestos qumicos txicos se encuentran en cantidades txicas

No estn pensados para predecir efectos sobre los ecosistemas en

forma cuantitativa, aunque muchos estudios han demostrado la
existencia de una asociacin significativa entre los resultados de los
ensayos y el impacto en los ecosistemas

El bioensayo es un mtodo utilizado para detectar y evaluar la

capacidad inherente de un agente txico de producir efectos adversos
sobre los organismos vivos

Realizado en condiciones definidas y sobre organismos individuales o un

grupo de organismos determinado se estudian las relaciones dosis o cc
vs efecto o respuesta
Ninguna especie aislada podra representar un ecosistema entero se
recomiendan ensayos secuenciales incluyendo: algas, dfnidos y peces
 MEDICIONES EN BIOENSAYOS

Los efectos txicos a evaluar pueden ser: mortalidad, inmovilidad,

inhibicin del crecimiento, alteracin del comportamiento, etc

IC 50: concentracin de la muestra que provoca una disminucin o

inhibicin del 50% de la luminiscencia (Vibrio fisheri u otra bacteria) en
un tiempo determinado

CE 50: concentracin efectiva de la muestra que provoca un efecto en

el 50% de la poblacin (Daphnia magna u otro invertebrado) en un
tiempo determinado
 COMO EMPLEAR LOS RESULTADOS DE LOS
ENSAYOS DE TOXICIDAD
Clasificar efluentes en UTA (unidades txicas agudas)

UTA = 1 / CE 50 x 100
CE 50 - 24hs UTA Caraterizacin del
(% v/v de efluente) efluente

< 25 % >4 Muy txico

26 50 % 24 Txico

51 75 % 1.33 1.99 Moderadamente

txico
> 75 % < 1.33 Levemente txico
 CONTROL DE DESCARGAS A CUERPOS
RECEPTORES
Objetivo: asegurar que las descargas no contengan contaminantes
txicos en cantidades txicas

Monitoreo qumico: control de sustancias especficas

Biomonitoreo:
Ensayos de toxicidad (WET o toxicidad total del efluente): no da
informacin sobre txicos especficos, ni sobre el tratamiento o la
persistencia ni los efectos sobre la salud humana pero, permite evaluar la
toxicidad conjunta de todos los constituyentes de un efluente complejo o
la reduccin de los efectos txicos limitndose a medir un nico
parmetro su toxicidad
Bioensayo: evaluacin de la condicin de un cuerpo de agua mediante
el estudio de organismos residentes
Factores de incertidumbre: condiciones de mezcla del efluente en el
cuerpo receptor , variabilidad en la sensibilidad entre especies,
variabilidad de toxicidad del efluente
 COMO SE REALIZA UN ENSAYO DE
TOXICIDAD CON EFLUENTES

Toma de muestra

Conservacin de la muestra

Pretratamiento de la muestra

Realizacin del ensayo

 BIOENSAYOS
Microtox (Vibrio fischeri)

Mtodo rpido de toxicidad empleando Daphnia

magna y KIT-TOX.

Ensayo de toxicidad aguda con Daphnia magna

Ensayo de toxicidad aguda con semillas de

lechuga (Lactuca sativa L)
 BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

Organismo de ensayo: Vibrio fischeri

Una especie de bacteria marina Gram
negativa
Anaerobia facultativa
Del gnero VIBRIN, familia Vibrionaceae
Exhibe BIOLUMINESCENCIA
 Vibrio fischeri
Se encuentra en una
relacin simbitica con el
calamar sepilide
Euprymna scolopes
El Euprymna scolopes
posee una serie de
apndices recubiertos de
mucosidad alrededor de
su rgano luminoso con
los que recoge bacterias
Vibrio fischeri del entorno
marino
 Vibrio fischeri

Principales caractersticas:

La Bioluminiscencia (emisin de luz por

parte de organismos vivos como resultado
de sus actividades bioqumicas)

Su gran sensibilidad que presenta a una

amplia variedad de sustancias txicas
 BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

Principio de la tcnica:

Se determina la inhibicin de la luminiscencia de

una suspensin de clulas de Vibrio fischeri
como resultado de la exposicin de dicha
suspensin a diluciones de la muestra.
Se somete a distintas diluciones (1,10, 45 y 90
%) durante distintos tiempos (5, 15, 30 min).
Tambin se hacen los controles, donde no se le
suministra la muestra o toxina y se analiza la
baja de la luminiscencia
 BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

Expresin de los resultados: IC 50 (concentracin de la

muestra que provoca una disminucin de la luminiscencia en
un tiempo determinado )
Alcance: aguas residuales, lixiviados, aguas dulces
superficiales o subterrneas o aguas saladas
Txicos de referencia: permiten evaluar bajo condiciones
estandarizadas la sensibilidad relativa de la bacteria luego
de la reconstitucin y la confiabilidad de los ensayos
Fenol: IC50 5 min 13-26mg/l
Cinc: IC50 15min 0.6-2.2 mg/l Zn/l
IC50 15min 3-10mg/l (Zn SO4.7H2O)
 BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

Analizador de toxicidad aguda

BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX
 BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

El software del equipo calcula la relacin concentracin/efecto para

cada tiempo de exposicin usando anlisis por regresin lineal

El resultado puede expresarse como IC50 (concentracin inhibitoria

50) que es la concentracin de la muestra a la cual se observa una
disminucin de la luminiscencia del 50%; este valor se calcula a partir
de la curva concentracin-respuesta (variable mtrica) y representa la
concentracin a la cual la variable (en este caso la luminiscencia) es un
50% menor que el control

El resultado tambin puede expresarse como porcentaje de

inhibicin: como resultado de la exposicin de la suspensin de
bacterias a una concentracin de la muestra con respecto al control y se
expresa en porcentaje, por ejemplo la muestra a una concentracin del
20% causa un 65% de inhibicin de la luminiscencia a los 15 minutos de
exposicin
 BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

Interferencias: las prdidas de luminiscencias por absorcin de la luz o

dispersin pueden suceder en caso de muestras turbias o fuertemente
coloreadas y se compensa usando una cubeta de correccin de color
(cubeta con cmara doble)
Se requiere una concentracin de oxgeno mayor a 0.5mg/l para que se
produzca la luminiscencia las muestras con altas DBO pueden causar
deficiencias o ser inhibitorias
Limitaciones: sustancias insolubles, poco solubles, voltiles o cuyo
estado se altere durante el perodo de ensayo puede afectar el
resultado o su reproducibilidad
Las concentraciones salinas en la muestra inicial que excedan los
30mg/l de ClNa pueden conducir a efector hiperosmticos
Conservacin de las muestras: refrigeradas hasta 24hs y congeladas
a -20C durante 2 meses sin conservantes de carcter biocida
 Mtodos de deteccin de toxicidad
empleando Daphnia magna
Organismo de ensayo: Daphnia magna

Del orden de los Cladceros de la clase

Crustcea (pariente de los cangrejos)
las especies del gnero Daphnia

Se trata de una pequea pulga de

agua que mide de 1 a 3 mm

Vive en lagos y lagunas, alimentndose

de algas microscpicas y sirviendo, a
su vez, de alimento a los peces

Tiene un ciclo de vida corto (3 o 4

semanas)

Reproduccin partenogentica
( asegura una uniformidad de respuesta
de los individuos )
 Mtodos de deteccin de toxicidad
empleando Daphnia magna

Alta sensibilidad a los txicos;

es capaz de acusar 0.005mg de
mercurio en agua y menores
concentraciones de pesticidas
y residuos industriales

Son las ms usadas como

organismos de prueba o de
referencia en ensayos de
toxicidad
 Mtodos de deteccin de toxicidad
empleando Daphnia magna
Con Daphnia magna se hacen tres tipos de
ensayos:
Mtodo rpido de toxicidad empleando Daphnia
magna y KIT-TOX.( fluorescencia de sustrato bajo luz
UV)

Ensayo de toxicidad aguda (CL50 o CE50): la

concentracin del txico capaz de matar o inmovilizar
el 50% de la poblacin en 48hs

Ensayo de toxicidad crnica: la evaluacin se basa

en la capacidad reproductiva o el crecimiento de los
individuos.
 Mtodo rpido de toxicidad empleando
Daphnia magna y KIT-TOX
Objetivo:

Deteccin temprana de agentes

contaminantes que hayan ingresado al agua

Permite detectar la presencia de un alto rango

de sustancias en un tiempo mximo de dos
horas desde el inicio del ensayo
 Mtodo rpido de toxicidad empleando
Daphnia magna y KIT-TOX.
Principio de la tcnica:

Los organismos que hayan estado expuestos a
sustancias txicas, tendrn reducida su capacidad de
ingerir y consecuentemente de clivar enzimticamente
un sustrato azucarado con marcado fluorescente

La respuesta enzimtica permite al usuario

caracterizar la toxicidad de una muestra liquida,
cuantificando la supresin de la actividad enzimtica.

La visualizacin ocular de los organismos incubados
en la muestra a evaluar, bajo luz ultravioleta de onda
larga, y contabilizacin de los fluorescentes y no
fluorescentes en cada cmara de exposicin.
 Mtodo rpido de toxicidad empleando
Daphnia magna y KIT-TOX.
El azcar es el sustrato marcado

Las Daphnias a usar son neonatos (menores de

24 horas) sin alimentar por aproximadamente 4
horas previas al ensayo

Se emplean 36 organismos: 6 celdas con 6

organismos cada celda
 Mtodo rpido de toxicidad empleando
Daphnia magna y KIT-TOX.
Llenar cada cmara con la dilucin
de la muestra a analizar
Someter las Daphnias por un periodo
de 60 min al efecto de la muestra y
tambin a controles negativo y
positivo (dicromato 0,8 mg/L)
Luego de la hora, agregar 6 gotas
del sustrato IQ e incubar 15min.
Bajo luz UV, se cuentan los
organismos que florecen en cada
cmara
Si 4 o ms de los 18 organismos
expuestos a la muestra no
florecen, el agua es txica para el
consumo humano
 Ensayo de toxicidad aguda con
Daphnia magna
Principio:
En la prueba de toxicidad aguda tambin se
emplean neonatos de D.magna expuestos a
diferentes concentraciones de una muestra o
de un txico durante un periodo de 48 hs

Como resultado de dicha exposicin se

puede determinar la concentracin en que la
muestra produce la muerte del 50% de la
poblacin de neonatos expuestos (CL50) con
un nivel de confiabilidad del 95%.
 Ensayo de toxicidad aguda con
Daphnia magna
En vasos de precipitado de vidrio. 25 ml.
10 neonatos por vaso, por triplicado ( 30 por
tratamiento)
Control (agua dura reconstituida).
Control positivo con una solucin txico de
referencia. dicromato de potasio (K 2Cr 2O 7)
0,8mg/L. CL50
Diluciones de la muestra: 100; 50; 25; 12,5; 6,25%
Incubar 48 hs
 Ensayo de toxicidad aguda con Daphnia
magna.
Clculo de la CL50:
Para el clculo de la CL50 y
sus respectivos lmites de
confianza al 95% se utiliza el
mtodo Probit, que permite
estimar la CL50 ajustando los
datos de mortalidad mediante
una tcnica de probabilidad
para estimar los valores que
siguen una distribucin
logartmica de tolerancias
 Ensayo de toxicidad aguda con
Daphnia magna
Aceptabilidad de los resultados:
La mortalidad en el control negativo no debe exceder el
10%.

La concentracin final de oxgeno disuelto debe ser
mayor de 2 mg/l.
La CL50 para el txico de referencia deber estar
dentro de los lmites de confianza preestablecidos en la
carta control
En caso de emplear un control positivo de CL50, los
valores de mortalidad obtenidos debern encontrarse
cercanos al 50%.( entre 33% y 57%)
Ensayo de toxicidad aguda con
Daphnia magna
 Ensayo de toxicidad crnica con
Daphnia magna
Si un test de toxicidad aguda no detecta
efecto alguno de mortandad o
inmovilizacin, esto no siempre significa
que el agua analizada no contenga
sustancia alguna capaz de producir otro
tipo de dao
Para estos casos se utilizan los tests de
toxicidad crnica en los que la evaluacin
se basa en la capacidad reproductiva o el
crecimiento de los individuos
 Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga (Lactuca sativa L)
Principio:
El bioensayo de toxicidad con
semillas de lechuga (Lactuca
sativa L) es una prueba esttica
de toxicidad aguda (120 hs de
exposicin) en la que se pueden
evaluar los efectos fitotxicos
de compuestos puros o de
mezclas complejas en el
proceso de germinacin de las
semillas y en el desarrollo de las
plntulas durante los primeros
das de crecimiento
Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga (Lactuca sativa L)
Laevaluacin del desarrollo de la radcula
y del hipocotilo constituyen indicadores
representativos para determinar la
capacidad de establecimiento y desarrollo
de la planta.
 Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga (Lactuca sativa L)
A diferencia de la prueba tradicional
de germinacin de semillas, la
evaluacin del efecto en la
elongacin de la radcula y del
hipocotilo de las plntulas permite
ponderar el efecto txico de
compuestos solubles presentes en
niveles de concentracin tan bajos
que no son suficientes para inhibir la
germinacin, pero que sin embargo,
pueden retardar o inhibir
completamente los procesos de
elongacin de la radcula o del
hipocotilo, dependiendo ello del modo
y sitio de accin del compuesto.
Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga (Lactuca sativa L)
En cada cpsula de Petri un disco de papel de filtro.
Saturar el papel de filtro con 4 mL de la dilucin
evitando que se formen bolsas de aire.
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente
veinte semillas, dejando espacio suficiente entre ellas
para permitir la elongacin de las races.
Tapar las cpsulas y colocarlas en bolsas plsticas
para evitar la prdida de humedad. Dado que algunas
variedades de semillas de lechuga requieren oscuridad
para que se produzca la germinacin, las cajas de Petri
deben cubrirse de la luz durante el periodo de ensayo
Incubar durante 120 hs (cinco das) a una temperatura
de 22 2 C. Realizar repeticiones para cada dilucin
ensayada
 Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga (Lactuca sativa L)
Terminado el periodo de exposicin (120 h), se procede a
cuantificar el efecto en la germinacin y en la elongacin
de la radcula y del hipocotilo
Registrar el nmero de semillas que germinaron
normalmente, considerando como criterio de germinacin
la aparicin visible de la radcula
Utilizando una regla o papel milimetrado, medir
cuidadosamente la longitud de la radcula y del hipocotilo
de cada una de las plntulas correspondientes a cada
concentracin de txico o dilucin de muestra y a los
controles
La medida de elongacin de la radcula se considera
desde el nudo (regin ms engrosada de transicin entre
la radcula y el hipocotilo) hasta el pice radicular
La medida de elongacin del hipocotilo se considera
desde el nudo hasta el sitio de insercin de los dos
cotiledones
Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga (Lactuca sativa L)
Expresin de los resultados:
Promedio y desviacin estndar de la
elongacin de la radcula y del hipocotilo de las
plntulas de cada repeticin.

Porcentaje de inhibicin del crecimiento de la

radcula y del hipocotilo, con el promedio de
elongacin para cada dilucin respecto del
promedio de elongacin del control negativo.

Porcentaje de inhibicin en la germinacin.