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UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZONICA DE MADRE DE DIOS

E.P. MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

PRODUCCION IN-VITRO DE
EMBRIONES
Presentado por: JESUS ANGEL TITI PACOSONCCO.

DOCENTE - UNAMAD
ANTECEDENTES

Hace 100 Aos oviducto realizaron fertilizacin


1930s Gregory Pincus estudio los huevos de erizo de mar.
1950s Austin; Chang : sobre mecanisnos como la capacitacin .

1959 Chang IVF conejos y nacimientos .

1968 Wittnghan, ratones repite


1969 Eduards, ovocitos humanos
Vacunos
Sreenan en Irlanda, capacitacin de espermatozoides
1977 Iritani y Ntwa, Fertilizacin in-vitro
1982 Bracket et al. Nacimento de un ternero .

1983 Lambert, laparoscopia y logra 6 cras, en oviducto de conejo.


1986 Hanada et al. Japn nacimiento de un ternero
1986 Willdsen,transferencia nuclear en ovejas .

1988 Lu et al. Irlanda IMV, IVF, IVC produccin en laboratorio.


1992 Varios, programas de mejoramiento de vacuno.
1997 Wilmut et al. Nacimiento por clonacin Dolly(Citado: Gordon 2000)
.
TECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS ASISTIDAS

Monta natural
Control y sincronizacin del ciclo ovarico y estral.
Coleccin, procesamiento, conservacion de semen e I.A.
Superovulacin, coleccin y transferencia embrionaria.
Coleccin de ovocitos, maduracin y fertilizacin in-vitro, cultivo y
transferencia de embriones.
ICSI (Inyeccin intraplasmatica de espermatozoides)
Conservacin de ovocitos y embriones.
Sexado de embriones.
Sexado de espermatozoides.
Cultivo y reprogramacin de clulas somaticas.
Micromanipulacin: biopsia, biseccin,reconstruccin.
Clonacion
Transgenesis
Formacin de lneas de celulas eternas Stem cells (Citado:Vivanco
2004)
Objetivos de la aplicacin de tcnicas
reproductivas asistidas

Producir crias de composicin gentica pre-determinada de


acuerdo a las necesidades del mercado.

Optimizar la eficiencia productiva de los animales en explotacin.

Viabilizar la creacin de nuevos y ms eficientes sistemas de


produccin animal.

Recuperar y crear lneas de vacunos criollos en extincin.


Mtodos de coleccin de oocitos

1. Recoleccin de vacunos post-morten


1.1. Transporte

Solucin fisiologica + 100 mg de estrepomicina, penicilina G


potasica 50 U.I. ml.

Temperatura de 35 a 37C
Mantenerse 8 h en la solucin sin afectar su calidad(Citado: Ramirez
y Jimenez 2003)
1.2. Recoleccion por mtodo de corte
Recorte de los tejidos, sangre,, lavados con solucin
salina, alcochol

Colocar los ovarios en una placa petry, con PBS + 5%


de suero fetal bovino, se corta los ovarios a lo largo a
travs de cuchillas separadas por 2 mm.

Mayor nmero de ovocitos procedente de folculos


de diferentes tamao(Ramirez y Jimenez 2003,
Gonzalez y Gil 2004; Mozzaquatro et al. 2004)
1.3. Recoleccion por el mtodo de aspiracin

Colocar los ovarios en una placa petri, con medio de


cultivo y se aspiran puncionado los folculos super-
ficiales de 2 a 8 mm, con una aguja 18 G y jeringa de
10 ml a una presin de 11 ml por minuto.

Se recuperan el 71% de ovocitos, 52% a 2 clulas y


26% a blastocisto.
1.4. Recoleccin por el mtodo de diseccin

Resulta una tcnica ms costosa en tiempo

Se obtienen menos ovocitos pero mejor calidad


2. Recoleccin de ovocitos en animales vivos

Vacas en lactacin, preadas, infertiles, animales jovenes

2.1. Laparotomia-Laparoscopia(Tervit, 1996)

2.2. Aspiracin transvaginal guiada por ultrasonido


(Tamasia et al. 2003; Galli et al. 2001)
2 veces por semana durante 3 a 6 meses
Tcnica de Aspiracin Folicular Guiada
por Ultra-sonido
- Equipamientos:
Ultra-sonido
Transdutor
Bomba de Vacio
Material de Consumo (Descartables)
- Procedimientos
3. Clasificacin de los ovocitos

3.1. Morfologa
4. Maduracion in-vitro
Medios, suplementos y tcnica
TCM-199, TALP, B2 de Menezo,
Waymout 752-1
Hepes 5,95 mg; piruvato de sodio
0,025 mg; NaHCO3 2,2 mg; 0,01 U.I.
de FSH; 0,5 mg de LH por ml. 0,6%
de BSA, SVE 10%.
24 h, 39C, 5% CO2 y humedad
saturada(Mozzaquatro et al. 2004).
5. Fecundacin in-vitro

Medios, suplementos y
tcnica
TALP, BO, o el TCM-199.
Celulas oviductales,
Clulas del cumulos,
heparina, Ca(Gonzales y
Gil 2004).
TALP FERT(Parrish et al.,
1986), 6 mg de BSA, 0,022
mg de piruvato de sodio,
30 mg de heparina por
ml(Mozzaquatro et al.
2004). Semen congelado,
TALP-SPERM 6 mg de
BSA, 0,11 mg de piruvato
de sodio por ml, migracin
ascendente(swim-up).
1x106 espermatozoides.
39C, 5% CO2 y humedad
saturada , por 18 h.
6. Cultivo in-vitro de embriones
Medios, suplemento y tcnica
TCM-199, Menezo B2, SOF; FCS 5%, 0.1% BSA
(Gonzales y Gil 2004). En 400 ul SOFaaci(Holm
et al. 1999), ms 0.1% PAV, 0,6% BSA, 5% SVE,
cubierto con aceite mineral en placas
acondicionada en bolsas y gasificada 5% CO2 ,
5% O2 90% N2 , 39C, por 8 das (Mozzaquatro et
al. 2004).
7. Aplicaciones
Transferencia de Embriones
Sexado de embriones

Obtencion de biopsia
PCR para determinar presencia
de cromosoma Y
Reaccin enzimatica
Fluorescencia
95% de muestras son sexadas
exitosamente
No se afecta la viabilidad
Multiplicacin de embriones
sexados por biseccin o clonado
perfecto
Multiplicacin de embriones
sexados por disgregacin de
elastmeros
Multiplicacin de embriones sexados por
clonacin va transferencia nuclear
Conservacion
CONCLUSION
Eficiencia comparativa entre MOET y OPU_TVR
Produccion de embriones
Produccion de dedicando las donantes
embriones entre a produccion
los 30 y 90 dias embrionaria todo el
post parto anio
MOET OPU-IVP MOET OPU-IVP

Numero de embriones producidos por 5 2 5 2


coleccion embrionaria o por TVR
Numero de colecciones embrionarias en 2 16 7 80
el periodo
Numero de embriones producidos en el 10 32 35 160
periodo
Porcentaje de terneros nacidos 55% 40% 55% 40%
Numero de terneros producidos 5.5 13 19 64
Porcentaje de eficiencia en la 100% 236% 100% 337%
produccion de terneros (haciendo
MOET = 100%)
Uso de la Tcnica

Introduccin y multiplicacin de nuevas


razas de vacunos.

Produccin de hibridos

Produccin de mellizos