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Separacin y Procesos

Biotecnolgicos

BT56A-IQ742
Introduccin
INTRODUCCION

La biotecnologa ha avanzado en los ltimos aos.


La oferta de empresas en el rea de ingeniera gentica son
generalmente reportados en las pginas financieras,

=> Esto implica un futuro promisorio para el rea.


Produccin Mundial y Valores de Mercado de Productos Protenicos Tpicos

Categora Fuente de Protena Produccin Precio Aproximado


protena (/t)
Anual (t)
Nutricional Soya Harina de soya > 2107 130

Funcional Soya Aislado soya > 105 1500

Suero de Leche Protena de 500 3000 - 6000


suero de leche

Reactivo Almidn Amilasas 600 15000-30000

Tejido Animal Renina 60 108

Salud Azcar Hormona de 20 kg 1010


crecimiento
humano

Suero Bovino Anticuerpos 10 kg 3109


monoclonales
Datos 1984
La biotecnologa se refiere a cultivos:

Microbianos
Clulas animales
Plantas
Virus

Para producir productos tiles para los humanos y que


generen ganancias a los inversionistas
ANTECEDENTES

Los primeros productos biotecnolgicos se conocen desde


4000 a.C. cuando se producan pan, queso y yogurt.

La definicin de biotecnologa proviene de aproximadamente


100 aos atrs. Se orienta principalmente a productos orgnicos
generados por fermentaciones.
Acetona (Industria de municiones I Guerra Mundial).
Acido ctrico y glutmico.
Antibiticos acapar toda la atencin, resultando el producto ms importante
de la biotecnologa, este metabolito secundario produjo grandes beneficios.
Esquema general de la produccin de productos biotecnolgicos

Fermentacin Cosecha Disrupcin Separacin Desechos

Protenas Concentracin
60 - 70 g/l Agua

Downstream processing (DSP)

Purificacin de
Preacondicionamiento Pulimento
alta resolucin
Caractersticas de la bioseparacin

La separacin de los productos biotecnolgicos resulta


relativamente ms difcil que las separaciones en la
ingeniera qumica convencional, ya que las molculas que
se separar resultan ser extremadamente frgiles y de
propiedades fisicoqumicas y bioqumicas muy similares
entre ellas.
Cualquier empresa que trabaje en la produccin de
bioproductos, trabaja con alrededor de 200 compuestos
diferentes, mientras que la empresa petroqumica slo
trabaja con alrededor de 10 compuestos.
Parmetros tpicos relacionados con DSP

Productos Antibitico Enzima Protenas


Qumicos Terapeticas
Concentracin en el 100 - 120 10 - 40 1-5 0.1 - 5
medio (g/l)

Contaminacin Baja Baja Baja Alta

Tiempo de 12 - 24 10 - 24 6 - 12 1+
procesamiento (h)

Purificacin Alta Alta Baja Muy alta

Produccin/lote (kg) Hasta 24000 Hasta 8000 Hasta 400 Hasta 3+

DSP por lote Continua Continua Continua Usualmente

Nmero de etapas 5 - 10 5-7 3-6 8 - 14


DSP
Composicin de una Corriente de Entrada a DSP

Componente Concentracin Comentario


Agua 900 + g/l Mayor costo de separacin para
productos de bajo valor
Materia celular 20 - 100 g/l Desecho, reciclado o producto

Producto Hasta 120 g/l


Sales inorgnicas Trazas hasta 10 g/l Usualmente removidas con el medio

Protenas (no producto) Trazas hasta 3 g/l Problema de remocin mayor con
productos enzimticos intracelulares

Acidos nucleicos Trazas hasta 6 g/l (ICP) Problema de remocin mayor para
protenas intracelulares o productos
enzimticos
Polisacridos 1% + (ICP) Usualmente removidos con el
medio, medios residuales
Productos orgnicos Trazas en bajo De materias primas (por ejemplo,
(color) contenido melaza) y los microorganismos
mismos
Slidos orgnicos Bajo contenido
Del medio
Productos Biotecnolgicos de Inters
Biomasa
Levadura Hongos
Bacterias
Virus
Adenovirus Herpes virus
Retrovirus Baculo virus
Adenoasociados
Metabolitos
Alcoholes Antibiticos
cidos
Protenas
Procesos de Produccin de Bioproductos
Qu se desea?
Desde una suspensin diluda se desea un productos biotecnolgico
con:

- Mximo rendimiento
R = Pf/Pi Pf: Concentracin Producto Final
Pi : Concentracin producto inicial

- Mxima Pureza Pureza = Pf / P

P: Sumatoria de la concentracin de todos los compuestos presentes

-
- Producto con propiedades funcionales

Cumpliendo las condiciones de:

- Costo Razonable, dado que los costos de proceso son muy caros,
siendo un porcentaje bastante significativo los equipos.


Diseo del Proceso de recuperacin y purificacin
(Downstream processing DSP)

Para el diseo del DSP se debe conocer las respuestas a las siguientes
preguntas:

Cul es el precio del producto?


Cul es el nivel de produccin?
Dnde est el producto en cada etapa?
Cules son las propiedades fisicoqumicas y/o
bioqumicas que diferencian al producto de sus
contaminantes?
Cul es el costo de las diferentes alternativas del
DSP?
cul es la eficiencia de cada etapa?
Proceso de produccin de Biomasa

Crecimiento de la Biomasa (Fermentacin)


Separacin de la biomasa del medio de
cultivo.
Secado y post-tratamientos
Almacenamiento de la biomasa
 Flowsheet Produccin Bio

\

KNA,AFLN-102

H  %Air Fi

HSRL-101
_
Heat Steri
B
C w UN

9-
h
BLND-101
5

FRMN-101
jSTRG-101
.^Ferm
T McA
+

L=CMPS-101 M `VAFLN-101

f"CF Co #Air Fi

zc
S<
-
b

JKCFGN-101 
?
+iDisk-Stack Centri
?
l{YFBDNG-101 / #pNFILL-101 |
fDRVFL-101 /
I Re0Fluid Be uG%
=Rotary Vacuum Fi
9- |: 4 BOX-101
+
Proceso de produccin de Virus
Crecimiento de Clulas empaquetadoras
Infeccin de Clulas empaquetadoras
Crecimiento de Clulas empaquetadoras
infectadas
Recuperacin de Clulas empaquetadoras
Rompimiento de las clulas (segn virus)
Separacin de los debris celulares
Purificacin de los virus
Almacenamiento de los virus
Produccin y Purificacin de Adenovirus
Mtodo Tradicional de Purificacin :
CsCl Gradiente + Dilisis

Centrifu- Dialisis
gacion
+
Recuperacin
Adenovirus
Adenovirus
Gradiente de Puro
CsCl
Mtodo Propuesto de Purificacin
Dos Fase acuosas + Cromatografa

PEG PEG
+
Sal Sal Adenovirus
Recuperacin
Puro
Adenovirus
ATPS Cromatografa de
Intercambio Inico
Proceso de produccin de
Metabolitos
Crecimiento de la Biomasa (Fermentacin)
Separacin del metabolito de la biomasa.
Tratamiento y purificacin del metabolito
Almacenamiento del metabolito
Produccin de cido Ctrico

7
$

 "AFLN-102
VAir Fi
#
 vBLND-101 
hHSR L-101
o|M q
a?Heat Steri
I
5I

_pMNSTRG-101 { pNRVFL-101 /
C!FRMN-101 |G0% Stora G% Rotary Vacuum Fi
6
Ferm

)N r7 5AFLN-101
@ Air Fi
CMPS-101
}CF Co

\
' :
q
L 2 Sulfu
U g }
9

d*
h 
0
$/RVFL-103 / RVFL-102 /
i CCRN-101 M nLRXN-101
zXCont. C rystal
AkRotary Vacuum Fi hRXN-102 a dRotary Vacuum Fi \{_YProduct Preci
a?Gypsum F
Proceso de produccin de
protenas
Caldo de Fermentacin
Con Clulas Sin Clulas
Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas
Clulas Separacin de Clulas

Rompimiento Clulas

Separacin Material
Intracelular (Desechos)
Sobrenadante
Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas

Tratamiento de cuerpos
incluidos
Concentracin

Purificacin Alta
Resolucin

Permite
Refinamiento Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto
Efecto de la eficiencia de cada etapa
100.0

80.0
% Recuperacin

60.0

40.0

20.0

0.0
0 1 2 3 4 5 6
Nmero Etapas

95% 80% 70% Eficiencia


REGLAS HEURISTICAS PARA EL
DISEO DE SISTEMAS DE
SEPARACION
Reduccin de la Carga de Separacin
Regla 1
"Mientras sea posible, reducir la carga o flujo msico de
separacin por medio de divisin y mezclas de corrientes".
Mezcla
Divisin

Carga Divisin = 0 ton/da Carga Mezcla= 0 ton/da


Secuenciamiento de Operaciones
Heurstica:
Siendo todos los compuestos similares, intente
separar los ms abundantes primero.

Ejemplo 2:
Se tiene un caldo de protenas que contiene un 50% de
lisozima, 20% ovalbmina, 15% conalbmina, etc.
Cul separara primero?
"Siendo el resto igual, desechar aquellas
separaciones que involucren especies que no estn
normalmente presentes en el proceso. Sin embargo,
si se adiciona una especie extraa, se debe remover
inmediatamente despus de ser utilizada".

Remover primero las especies corrosivas