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DETERMINCIN DE

ANTGENOS
BACTERIANOS
MEDIANTE
INMUNODIFUSIN

CORDERO PALOMINO, Jhordi


QUICA FERNNDEZ, Fidel AYACUCHO-PER
SOLIER SOSA, Mary Cruz 2017
OBJETIVOS
Conocer el fundamento de tcnica de
precipitacin en fase slida (inmunodifusin).
Determinar la formacin de anticuerpos para
antgenos de bacterias.
Explicar el fundamento de la formacin de
anticuerpos frente al antgeno bacteriano en el
cuerpo del conejo.
INTRODUCCIN
La reaccin
inmunolgica que
origina el encuentro
de los anticuerpos y
los antgenos generan
una reaccin
especfica para estos;
esta reaccin es la
base de identificacin
en la actualidad sobre
la clnica de las
enfermedades.
MARCO TERICO
ANTGENO
Es toda sustancia que,
introducida en un organismo
que no la posea, provoca en l
la formacin de un anticuerpo
especfico con el cual puede
combinarse de forma electiva.

ANTICUERPO
Los anticuerpos
(tambin conocidos
como inmunoglobulinas,
abreviado Ig) son
glicoprotenas del tipo
gamma globulina.
PRECIPITACIN
Un antgeno soluble, al ser puesto en contacto con
su anticuerpo especfico, forma complejos
inmunes que al encontrarse en proporciones
ptimas se insolubilizan dando una reaccin de
precipitacin.

Precipitacin en fase Precipitacin en fase slida:


lquida: se lleva a cabo en se lleva a cabo en un soporte
el medio lquido. de agar.
INMUNODIFUSIN
Es una tcnica que se utiliza en el laboratorio para la
identificacin y cuantificacin de cualquiera de las
inmunoglobulinas. Su base se encuentra en la presencia de
un precipitado visible, resultado de la combinacin
antgeno-anticuerpo en determinadas circunstancias.
MATERIALES Otros
o Mechero
o Gradilla
Instrumentos y equipos o Aguja
o Matraz de 250-500ml Materiales biolgicas o Jeringa
o Placas Petri o Conejo o Algodn
o Tubos de ensayo o Cepa de Salmonella tiphy o Frascos de vidrio
o Pipetas o Sacabocado
o Incubadora o Tijera
o Centrifuga
o Refrigeradora
o Asa de Kolle

Reactivos
o Agar noble al 1%
o Solucin buffer Fosfato
o Merthiolate al 1 %
o Solucin salina fisiolgica
o Alcohol
o Agua destilada
o Agar Nutritivo
o Agar Mac Conkey
METODOLOGA
1. Elaboracin de la suspensin madre.

Cepa de Salmonella tiphy Sembrar agotamiento en


superficie. Incubar a 37 C x 24 h

2. Atenuacin e inactivacin de la suspensin madre.

Bao Mara en ebullicin / 2 h


Suspender con SSF
3. Prueba de esterilidad.

Sembrar
agotamiento en
superficie. Incubar a
37 C x 24 h

4. Preparacin de las inoculaciones.

INOCULACIN CANTIDAD

1 0.25 ml

2 0.5 ml

3 1 ml

4 1.5 ml

Cada tres das

Depilar zona de la ingle Inocular va intraperitoneal


5. Preparacin del Buffer Fosfato.

Pesar 0.3864 gr Fosfato Monosdico


disolver en 14 ml de AD

Mezclar y agregar 50 ml
de AD.
Merthiolate 1% (1 ml)

Pesar 1.9314 gr Fosfato Disdico


disolver en 36 ml de AD
6. Preparacin del Agar Noble 1%.

Pesar 1 gr de Agar Noble Disolver en 100 ml de Plaquear al lado del


Buffer Fosfato y llevar a mechero
autoclave
7. Extraccin de sangre del conejo.
Hacer un corte de Centrifugar y usar
1 cm con un el suero
Sobar la vena
marginal de la bistur
oreja del Recolectar la
conejo con sangre con tubos
xilol capilares
8. Realizacin de la prueba de Inmunodifusin.

Realizar pocillos Pocillo central el suero


Dems pocillos el antgeno

Cmara
Hmeda

Incubar a 37 C
por 24 horas
RESULTADOS
Una vez transcurrido las 24 hrs de incubacin se obtuvieron el siguiente
resultado
CONCLUSIONES
Se conoci el fundamento de la tcnica de
precipitacin en fase slida (inmunodifusin).
Se determin la formacin de anticuerpos para
antgenos de bacterias.
Se explicar el fundamento de la formacin de
anticuerpos frente al antgeno bacteriano en el
cuerpo del conejo.