You are on page 1of 111

Universidad Nacional del Santa

Facultad de Ciencias
Departamento de Biologa, Microbiologa y Biotecnologa

Gentica
Historia del ADN
Blga. Pesq. Eliana Zelada Mzmela
Blgo. Acuic. Carmen Izsiga Barrera
La Gentica como ciencia
Bateson (1905) engendrar transmisin de caracteres
hereditarios
Ciencia de potencialidades informacin se transfiere de
padres a hijos
Ciencia que responde a cuatro interrogantes:
- dnde se encuentra y cmo se organiza?
- cmo se transmite y recombina?
- cmo se expresa?
- cmo cambia y cmo afecta ese cambio en la evolucin
Transferencia y reacciones del genotipo
Objetivo: Definido por Bateson: la investigacin de los fenmenos de la
herencia y variacin
semejanzas Entre los tipos de desarrollo de
Estudiar las causas
diferencias diferentes organismos
Aspectos Histricos: Origen de la Vida
a) Teora creacionista.
b) Teora de la generacin espontnea (abiognesis).
c) Teora de Oparn-Haldane.
d) Teora de la panspermia
Teora creacionista: Los primeros seres vivos se explican
como producto del impulso creativo de una fuerza
sobrenatural (Dios) cuyo estudio por definicin, no puede
abordarse en trminos cientficos.
Teora de la generacin espontnea (abiognesis). Idea vitalista, que
dur 2000 aos, domin el pensamiento hasta el siglo XVII. Propone
que la aparicin de seres vivos es a partir de algo no vivo. apoyada por
Aristteles. Decan que para producir materia viva a partir de materia
inorgnica, se almacenaban camisas sudadas y trigo en un lugar oscuro
para producir ratones.
En 1668, Francesco Redi: experiencia con carne descompuesta.
En 1862, Pasteur descubri que las bacterias, levaduras y protozoarios
eran la causa de la descomposicin de la materia orgnica.
Experiencia de Redi
c)Teora de Oparn-Haldane. Oparn, propuso en 1924 que la
atmsfera primitiva debi contener cantidades importantes de
metano, amonaco, hidrgeno, vapor de agua y carecer de oxgeno
libre
De acuerdo con Haldane, la tierra tena una atmsfera formada por
bixido de carbono, amonaco y agua pero carente de oxgeno libre; al
interaccionar la radiacin ultravioleta de origen solar, se form una
gran cantidad de compuestos orgnicos, como azcares y AA, que al
acumularse en los mares primitivos, formaron la llamada sopa
primigenia, donde surgieron los primeros organismos.
c) Teora de la panspermia. Propone que la vida es eterna y se halla
presente en cualquier rincn del universo. Segn Svante August
Arrhenius en 1906 dice que la vida se desarroll a partir de una
espora o una bacteria que lleg del espacio exterior y que se
desprendi de un planeta en el que hubiese vida.
1868: Darwin todo lo referente a la herencia es maravilloso
La vida slo engendra vida no a la generacin espontnea
Los animales generan animales

1) Teora de la Preformacin
- En 1694: Hartsoecker homnculo
- Swammerdan deca: En la naturaleza no hay generacin,
sino solamente el desarrollo de partes. As se explica el
pecado original, todos los hombres estaban contenidos en
los rganos de Adn y Eva. Cuando su depsito de vulos se
agote, la raza humana dejar de existir.
A comienzos del siglo XVIII, esta doctrina gozaba de gran aceptacin: la
controversia era si los embriones en miniatura preformados estaban en
los vulos o en los espermatozoos. Lo absurdo era el inmenso nmero de
huevos o semillas con que haban de estar dotados los animales primitivos.
En 1772 se hizo el clculo de que, incluso tomando como base la edad
atribuida al mundo en la Biblia, de alrededor de seis mil aos, el nmero
de conejos contenidos por el primer conejo deba estar alrededor de los
cien mil. Ni siquiera esta consideracin bast para disuadir a muchos
bilogos prominentes de aquel tiempo.
2) Epignesis
El avance de los microscopios homnculo fruto de la
imaginacin.
Wolff y K.E. Von Baer gametos eran gotas de lquidos. El
desarrollo es algo ms que un simple crecimiento el cuerpo en
desarrollo pasa por una serie de transformaciones radicales donde se
forman rganos inexistentes anteriormente.

Wolff vitalista: rganos se forman por una


fuerza vital misteriosa
Von Baer corrigi esta exageracin

1 en ver un embrin de perro


l en dar la informacin detallada del desarrollo
embrionario del pollo. Deca que desde el momento de la fecundacin,
el cuerpo ya tena una estructura compleja, con el desarrollo
experimentaba cambios
Hoy se sabe que la familia de genes HOX codifican para un grupo de
factores de transcripcin, responsables de regular la morfognesis y
de conferir la identidad axial para el desarrollo del embrin.
3) Hiptesis Provisional de la Pangnesis
Darwin (XIX) trat de visualizar la
herencia a travs de una
especulacin: Cada clula produce
una copia gemmula, la sangre las
lleva a los espermatozoides donde
se juntan gameto: compuesto
por partculas representativas del
cuerpo

Invalidada por Galton: transfusiones

sangre sangre
Por blanco Por negro
4) Herencia de los caracteres adquiridos
Existen dos series de hechos:
a) Primero: Que los organismos son modificados por el ambiente
b) Segundo: Que la descendencia se parece a los progenitores

las
Si se relacionan estas dos series de hechos
modificaciones inducidas en los padres por el ambiente,
se transmitirn a la descendencia que la hereda
Lamarck: HCA es el mecanismo ms importante en la evolucin
5) Teora del Plasma Germinal
Propuesta por A. Weismann en 1842
Hizo experiencias en ratones
Consider a tejidos reproductores: germoplasma
Supuso separado y diferente

Otros tejidos del cuerpo: somatoplasma


Demostr que sucede lo contrario con la pangnesis: el
plasma germinal se perpeta a s mismo e incidentalmente
engendra el soma.
Epitomizado por Butler: la gallina es el medio del cual se
vale el huevo para producir otro huevo

Los genes del cuerpo se reproducen a s mismos, el


resto es un subproducto de su autorreproduccin
X

En la Biologa Moderna: Plasma germinal: genotipo


Somatoplasma: fenotipo
Herencia Biolgica y Legal
- Biolgica
En el lenguaje preformstico: Herencia - Legal
pero

- Casa pasa de un propietario a otro sin que ella cambie en el proceso


- La herencia del color de los caracteres es diferente: los nicos
objetos materiales que se heredan son los genes contenidos en los
gametos.
La HB se realiza mediante un proceso dinmico de desarrollo orgnico
Cigoto embrin feto nio adulto

El color de los ojos no pasa de P a H, sino que se origina


epigenticamente durante el desarrollo
Logros de la Gentica
- Gregor Mendel: Padre de la Gentica
- Hugo de Vries, Carl Correns, Erick von Tschermarck
- Bateson: Gentica, promovi el concepto mendeliano de genes apareados
- Lucien Cuenot: genes controlan el pelaje
- Garrod. Un gene, una enzima
- Johansen. Palabra gene , introdujo genotipo y fenotipo
- Roux: cromosomas son portadores de factores hereditarios
- Boveri y Sutton: experimentos que probaron lo anterior: teora del
gene desarrollada por Morgan
- Griffith: principio transformante
- Avery y colab.: ADN material gentico
- Watson y Crick: Modelo estructural del ADN
- Ochoa: Cdigo Gentico
Naturaleza Qumica del
Material Hereditario
En la caracterizacin del material hereditario hay dos
interrogantes:
Cmo se reproduce fielmente generacin tras generacin?
Cmo se transfiere la informacin a partir del material
gentico, para especificar la sntesis de CHON?
Si bien preguntas basadas en trminos de
la estructura molecular
Las respuestas no estn solamente en las propiedades fsicas
de la molcula, sino que es importante su UBICACIN

Informacin Posicional

Material gentico
La Lgica Qumica de la Vida
Todas las propiedades de los organismos vivos resultan de las
propiedades de las protenas que contienen.
Las propiedades que posee una protena dada, resulta de la
secuencia de sus aminocidos.
La secuencia de aminocidos de una protena, est determinada
por la secuencia de nucletidos de los cidos nucleicos.
Los cidos nucleicos constituyen el material hereditario que cada
organismo pasa a la siguiente generacin y es el mismo en todos
los organismos.
Historia del ADN

Puede dividirse en 3 perodos:


1) 1869 1943 :
Cuando Weismann emiti teora plasma germinal
No slo

Promulg que se sino Deba tener una composicin


transmita intacto a la qumica y estructura
siguiente generacin molecular definida

Miescher: 1875 nuclena en ncleo clulas de pus y de


esperma de salmn
Se demostr que esta sustancia constaba de ADN y
CHON
Cuatro nucletidos
F. Miescher
Morgan: identific genes en cromosomas: Teora cromosmica

el ncleo y ms concretamente los cromosomas son la sede


fsico qumica de la herencia
Wilson asoci a Weismann y Miescher: la nuclena es el material
gentico de la cromatina: No creble por inestabilidad del ADN
Analtico trabajo de Phoebus Levene (1920) hizo pensar que el
ADN era un polmero repetitivo de 4 nucletidos en secuencia
fijada: ATCGATCGATCGATCGATCGATCG...
44 = 256
TACGTACGTACGTACGTACGTACG...

Cmo podra ser entonces expresada la complejidad de los


genes usando una capacidad de informacin tan limitada?

Cifra ms grande
CHON = 50 500AA X = 300 AA 20300 que el N total de
partculas
fundamentales 1080
Hasta 1930: cido timonucleico: animales.
ARN : cido zimonucleico: vegetales
Griffith (1914): Existencia de una sustancia transformante

2) 1944 1960:
Avery: ADN es la sustancia gentica y se acept que el ADN
era algo ms que la simple repeticin de un tetranucletido
Feulgen: descubri una tcnica para teir ADN
Bouvin & Vendrely, Mirsky & Ros: en 1948 demostraron que
la concentracin de ADN era igual en todas las clulas de un
individuo y en todos los individuos de la misma sp.
Hershey & Chase: Se inyecta ADN y no CHON
ADN dirige su propia replicacin y la sntesis de las CHON.
Watson & Crick: estructura secundaria del ADN. R, T, T.
Cantidad de ADN (ugx10-6)
Eritrocito Hepatocito Espermatozoide
Sbalo 1,97 2,01 0,91
Carpa 3,49 3,33 1,64
Trucha 5,79 -.- 2,67
Rana 15,00 15,70 -.-
Sapo 7,33 -.- 3,70

La Teora cromosmica descendi a nivel molecular: ADN


componente ms caracterstico de los cromosomas,
constituye el soporte molecular de los factores
hereditarios
ADN cumple con dos funciones:
a) Transportar: ADN ARN CHON
b) Dirigir su propia replicacin
Dogma Central de la Biologa Molecular
Fue sorpresivo encontrar ADN en el pneumococco, aunque
ya haba sido reconocido como material gentico de los
eucariotes

Proporcionaron una idea unificadora de la base


de la herencia entre eucariotas y procariotas

Si estamos en lo cierto, significa que los


AN son importantes no slo a nivel
Avery dijo estructural, sino que son sustancias
fundamentalmente activas en la
determinacin de las actividades
bioqumicas y de las caractersticas
especficas de la clula. Por medio de ella
es posible inducir de manera predecible
cambios heredables en las clulas.
3) 1960 a adelante :
Conceptos afirmados
ADN se modifica, analiza y sintetiza
Se vislumbra su dinamismo metablico
Se transporta de un organismo a otro
Es transcrito en reverso
Ejerce funcin en mitocondrias y cloroplastos
Evidencias
Directas Indirectas
. Fenmeno de la transformacin . Asociacin entre TC y Feulgen
. Exp. Bacterifago marcado . Relacin entre cantidad de ADN
y dosis gnica
. Exp. Virus mosaico tabaco . ADN metablicamente estable
. Relacin entre espectro de
absorcin de ADN y actividad
mutagnica de los UV
Experiencia de Griffith

Hay un principio
transformante
Experiencia de Avery

. Cubierta
polisacrida
. Cpsula
proteica
. ADN
. ARN
Experiencia del bacterifago marcado: Hershey & Chase
(1952)
Alfred Hershey y Martha Chase
Experiencia de Fraenkel-Conrat y Singer (1957)
Requisitos que debe de cumplir una molcula hereditaria

Las molculas hereditarias deben poseer una estructura tal que


permita los siguientes hechos:
Contener informacin biolgica til y que se transmita en
forma estable.
Que su replicacin permita el paso sin variacin de la
informacin de clula a clula y de generacin en generacin.
Que sea capaz de expresarse en la forma biolgicamente ms
ahorrativa en la sntesis de CHON. Es decir, que la traduccin
de su mensaje debe de hacerse por mecanismos sencillos.
Deben de ser capaces de variacin ocasional, lo que obedece a
la necesidad biolgica de la evolucin, con la produccin de
nuevos genotipos, sobre los cuales pueda actuar la seleccin
natural. Es decir debe permitir la mutacin y la recombinacin.
Los Acidos Nucleicos

Son molculas formadas


por la unin de un azcar,
una pentosa, una base
Glucosdic nitrogenada y un grupo
fosfato.
Los cidos Nuclicos
(DNA y RNA) son formados
por varias cadenas de
nucletidos
(polinucletidos).
Bases Nitrogenadas

6
1 5 7
8
2 4
9
3

4
3 5

2 6
1
O NH2 O

CH3

O O O
pirimidina imidazol
NH2 O

NH2
Azcar

4 1

2
3
Radical Fosfato
Base nitrogenada Azcar

Nuclesido

Nuclesido Radical fosfato

Nucletido

Nucletido Nucletido Nucletido Nucletido ... = AN


Desoxirribosa
ADN
Adenina, guanina, citosina, timina
Radical fosfato

Ribosa
ARN
Adenina, guanina, citosina, uracilo
Radical fosfato

En el ARNt ya se confirma la existencia de ribotimilato

En el DNA fagos hay uracilo


Base Nitrogenada Nuclesido Nucletido
Adenina Adenosina cido Adenlico
Guanina Guanidina cido Guanlico
Citosina Citidina cido Citidlico
Timina Timidina cido Timidlico
Uracilo Uridina cido Uridlico

Terminologa empleada para referirse a los


nuclesidos y nucletidos.
Propiedades de las bases
nitrogenadas
a) Tautomera: Reacciones
intramoleculares que
determinan un equilibrio entre
ismeros con diferencias en sus
enlaces. Los tautmeros
preferentes determinan el
apareamiento de bases que se
observa en el DNA.
Son dos las formas: lactama y
lactima. Bajo las condiciones de
pH y temperatura el equilibrio
est casi totalmente desplazado
a lactama, amino, amida
interna o forma ceto, en lugar
de lactima, imino, imida
interna o forma enol.
b) Rotacin en torno al
enlace glucosdico
En nucletidos las dos
conformaciones se
interconvierten. La rotacin
en torno al enlace
glucosdico (entre la
pentosa y la base)
determina dos
corformaciones:
-Sin: la base sobre la
pentosa. Lo puede tener G
-Anti: La base hacia fuera.
Ambos se interconvierten
en nucletidos de purina. La
forma anti predomina en
nucletidos de pirimidina y
en los cidos nucleicos.
c) Absorcin de luz: Sirve para cuantificar cidos nucleicos
espectrofotomtricamente
Estructura del ADN: Primaria

En un monucletido, el grupo fosfato


es un ster fosfrico primario, lo que
quiere decir que posee un solo enlace
ster. En el dinucletido se forma el
enlace fosfodister, es decir el
fosfato est unido a dos grupos.
El dinucletido
formado es 3 5
secuencia fosfodister. Se
pueden seguir
aadiendo ms
nucletidos,
establecindose
un esqueleto:
azcar fosfato
azcar, con una
base unida a cada
azcar en su
esqueleto posicin 1.
La informacin
codificada radica
en la secuencia de
las BN
pApA

ApAp 3 5
OH P

El grupo ortofosfato puede esterificarse en 5 3 o en 3 5


El grupo fosfato es vulnerable a la ruptura qumica o enzimtica

Por qu desoxirribosa y no ribosa?

La presencia de un grupo
OH en posicin 2 de la
ribosa, hace que el
polinuceltido sea menos
estable: el OH se encuentra
adecuadamente situado para
atacar el P en presencia de
iones OH - , causando la
rotura de la unin
fosfodister y formar un
enlace cclico 2, 3
Fosfonucletido 5

Fosfonucletido 3
Estructura Secundaria

Modelo propuesto por Watson y


Crick en 1953.
Son dos hebras antiparalelas, en
forma de hlice, que se mantienen
unidas por el apareamiento
complementario de las bases:
A T y C- G

2 3
Presencia de grupos cetnicos y
amnicos: lo que ofrece la oportunidad
para formar enlaces H
Espectro de difraccin de
Cetnico: T, U Forman un puente rayos X: Wilkins y Atsbury

Amnico: A
Amnico Cetnico: C, G Forman dos puentes
L.Pauling
(Caltech)
M.Wilkins y R.E.Franklin
(Londres)
J.D.Watson y F.H.C.Crick
(Cambridge)
Periodicidad a 0,34 nm Estructura helicoidal
(forma en X)
Periodicidad
a 3,4 nm
James Watson y Francis Crick
Para determinar la estructura tridimensional o disposicin
espacial de las molculas de ADN, se hace incidir un haz de rayos
X sobre fibras de ADN y se recoge la difraccin de los rayos
sobre una pelcula fotogrfica. La pelcula se impresiona en
aquellos puntos donde inciden los rayos X, produciendo al
revelarse, manchas. El ngulo de difraccin presentado por cada
una de las manchas en la pelcula suministra informacin sobre la
posicin en la molcula de ADN de cada tomo o grupo de tomos.
Mediante esta tcnica de difraccin de rayos X se obtuvieron los
siguientes resultados:
Las bases pricas y pirimidnicas se encuentran unas sobre
otras, apiladas a lo largo del eje del polinucletido a una distancia
de 3,4 Las bases son estructuras planas orientadas de forma
perpendicular al eje (Astbury, 1947).
El dimetro del polinucletido es de 20 A y est enrollado
helicoidalmente alrededor de su eje. Cada 34 A se produce una
vuelta completa de la hlice.
Existe ms de una cadena polinucleotdica enrollada
helicoidalmente (Wilkins et al. 1953, Frankling y Gosling, 1953).
Regla de la Equivalencia
El modelo secundario descrito requiere cantidades
equivalentes de A y T y de C y G.
Demostrado por Chargaff por cromatografa antes que
Watson y Crick propusieran el modelo:

A/T y C/G = 1 A/G y C/T = 1

En contraste con la universalidad de la complementariedad, la


proporcin A + T/ G+C vara enormemente de una especie a
otra:
AT TA
AT 4/4 = 1 2/2 = 1 GC 1/1 = 1 5/5 = 1

CG GC
4/2 = 2 2/4 = 0,5 1/5 = 0,2 5/1 = 5
TA C- G
AT CG
33,3 % 83,3 %
G-C G-C

Con el mismo significado se usa la proporcin G+C/total de


bases o %G-C, caracterstico de cada especie.
Procedencia del ADN A G C T 5-Me-C
Timo de Bovino 28,2 21,5 21,2 27,8 1,3
Esperma de bovino 28,7 22,2 20,7 27,3 1,3
Germen de trigo 27,3 22,7 16,8 27,1 6,0
Saccharomyces 31,3 18,7 17,1 32,9 -
Escherichia coli 26,0 24,9 25,2 23,9 -
Mycobacterium tuberculosis 15,1 34,9 35,4 14,6 -
X174 24,3 24,5 18,2 32,3 -
T3 23,7 26,2 27,7 23,5 -
T5 30,3 19,5 19,5 30,8 -
17,0
T7 32,4 18,3 32,4 HMC
Virus ARN A G C U
Mosaico del tabaco (TMV) 29,8 25,4 18,5 26,3
Mosaico amarillo nabo 22,6 17,2 38,0 22,2
Poliomielitis 28,6 24,0 22,0 25,4
A+T/G+C
Organismo Tejido

Escherichia coli - 1,00


Diplococcus pneumoniae - 1,59
Mycobacterium tuberculosis - 0,42
Levadura - 1,79
Paracentrolus lividus (erizo
Esperma 1,85
mar)
Arenque Esperma 1,23

Rata Mdula sea 1,33

Hombre Timo 1,52


Hombre Hgado 1,53
Hombre Esperma 1,52
Orientacin de 5 3

las hebras
Una hebra se
orienta en
sentido 5 3
y la otra en
sentido 3 5,
es decir son Diapositiva 69
antiparalelas

http://www.arrakis.es/~ibrabida/vigadn2.html
3 5
Resumen de las caractersticas del modelo

Las dos hebras son helicoidales


La doble hlice tiene un dimetro de 20 A
La doble hlice da un giro completo cada 34 A hacia la derecha:
dextrgira
La distancia entre dos nucletidos sucesivos es de 3,4 A, es
decir en una vuelta hay 10 nucletidos.
Las dos hebras son antiparalelas
Las dos hebras giran en hlice, una alrededor de la otra,
enlazndose mediante puentes H en la parte central
Hay un apilamiento de bases que estabilizan la estructura
helicoidal, que puede ser mucho ms fuerte que la que establece
los puentes H entre las dos cadenas.
Consecuencias de la doble hlice

Estructura de doble hlice: estabilidad


Inexistencia de restricciones respecto a la secuencia de bases
de su estructura primaria: til como molcula informativa
Un gen = 1000 pb promedio 41000 nmero inimaginable
de combinaciones
Estructura doble: replicacin exacta
Complementariedad: replicacin, transcripcin y traduccin.
Los cambios ocasionales de unas bases por otras: mutaciones
Intercambio de segmentos entre cromtidas hermanas:
recombinacin
Tipos de ADN
n de nucleotidos
TIPO DE ADN GIRO DE HELICE nm por Vuelta Plano entre bases por vuelta
A Dextrgiro 2.8 inclinado 11
B Dextrgiro 3.4 perpendicular 10
Z Levgiro 4.5 zig-zag 12
ADN-A: ADN con 75% de humedad, requiere Na, K o Cs como
contraiones, presenta 11 pares de bases por giro completo y 23 A de
dimetro. Es interesante por presentar una estructura parecida a la de
los hbridos ADN-ARN y a las regiones de autoapareamiento ARN-ARN.
ADN-B: ADN en disolucin, 92% de humedad relativa, se encuentra en
soluciones con baja fuerza inica, se corresponde con el modelo de la
Doble Hlice.
ADN-C: ADN con 66% de humedad, se obtiene en presencia de iones
Li, muestra 9+1/3 pares de bases por giro completo y 19 A de dimetro.
ADN-Z: doble hlice sinistrorsa (enrollamiento a izquierdas), 12 pares
de bases por giro completo, 18 A de dimetro, se observa en segmentos
de ADN con secuencia alternante de bases pricas y pirimidnicas
(GCGCGC), sigue un curso en zig-zag por el cambio syn a anti. Requiere
una concentracin de cationes superior a la del ADN-B, y teniendo en
cuenta que las CHON que interaccionan con el ADN tienen gran
cantidad de residuos bsicos sera posible que algunas convirtieran
segmentos de ADN-B en ADN-Z. La clula lo puede hacer metilando la
C.
Modelo A
Las purinas
estn en
posicin sin

Modelo Z
El 'ADN zurdo' sirve para 'editar' el mensaje de los genes.
Fuente: The New York Times.
Cuando en 1979 los cientficos vieron de verdad por primera vez la
molcula de la vida, el ADN, no se trataba de la espiral curvilnea
que Francis Crick y James D. Watson haban descubierto ms de
25 aos antes. Sus observaciones correspondan a una molcula que
se curvaba hacia la derecha. Sin embargo, lo que revel la
cristalizacin de la molcula en 1979 fue una extraa y
zigzagueante molcula espiral que giraba hacia la izquierda. Se
denomin ADN zurdo, o ADN-Z, y los bilogos lo tacharon de
casualidad, probablemente nada ms que basura molecular. Pero
Alexander Rich, bilogo molecular del Instituto Tecnolgico de
Massachusetts (EE UU) que fue el primero en ver el ADN zurdo,
nunca lo abandon. Ahora Rich y sus colegas han demostrado que el
ADN-Z es ms que una rareza. En la investigacin descrita
recientemente en la revista Science, descubrieron que la
naturaleza elabora y utiliza un ADN zurdo, y puede que su papel a
la hora de regular la qumica de la vida sea bastante importante.
Inicialmente se crea que el ADN era simplemente pasivo, un
cdigo que leer. Pero ahora, con ste y otros ejemplos que se
estn estudiando, parece que el ADN es activo, y puede cambiar
su propio mensaje escrito segn se va leyendo. La forma del
ADN, tanto si es diestro como zurdo, ayuda a determinar la
forma en que se lee este mensaje. Cuando aparece la versin
zurda, salta la molcula editora , se adhiere al ADN-Z, y altera
el mensaje que se est leyendo. Como consecuencia, resulta que
existe ms de una forma de leer el mensaje del ADN, la forma
normal y la forma editada . Las protenas producidas por clulas
con ADN editado resultan importantes en la vida. Segn Rich,
una de ellas se utiliza como una de las principales molculas
receptoras del cerebro. Sin ella, los animales tienden a
desarrollar epilepsia y muchas veces mueren. Otra molcula
editada es un receptor de serotonina. La versin editada de la
molcula proporciona una respuesta ms tamizada a la serotonina
y, por tanto, permite unas reacciones mezcladas, ms afinadas,
en vez de slo las reacciones que se producen con la versin sin
editar.
ADN triple hlice o ADN-H: In vitro es posible obtener
tramos de triple hlice intercalando oligonucletidos cortos
constituidos solamente por pirimidinas (timinas y citosinas) en
el surco mayor de una doble hlice. Este oligonucletido se une
a pares de bases A-T y G-C mediante enlaces de hidrgeno
tipo Hoogsteen que se establecen entre la T o la C del
oligonucletido y los pares A-T y G-C de la doble hlice. No se
sabe la funcin biolgica del ADN-H aunque se ha detectado en
cromosomas eucariticos.
ADN cuadruplexo: "In vitro" se han obtenido cuartetos de
Guanina (ADN cuadruplexo) unidas mediante enlaces tipo
Hoogsteen, empleando polinucletidos que solamente contienen
Guanina (G). Los extremos de los cromosomas eucariticos
(telmeros) tienen una estructura especial con un extremo 3' OH
de cadena sencilla (monocatenario) en el que se repite muchas
veces en tandem una secuencia rica en Guaninas. Se piensa que el
ADN cuadruplexo telomrico servira para proteger los extremos
cromosmicos de la degradacin enzimtica. Ejemplo de secuencia
telomrica rica en guaninas (G):

5P TTGGGTTGGGGTTGGGG...............TTGGGG 3'OH
Palndromos: Es una figura gramatical que se lee igual en los dos
sentidos, por ejemplo: DABALE ARROZ A LA ZORRA EL ABAD. En el
palndromo de doble cadena la secuencia de bases se lee igual en
direccin 5 P 3OH en ambas cadenas.
Regin palindrmica en un DNA de doble hebra

Lectura 5 3TTAGCACGTGCTAA
Lectura 5 3TTAGCACGTGCTAA

5 T T A G C A C G T G C T A A 3
3 A A T C G T G C A C G A T T 5
eje binario de simetra
(rotacional)

5 T T A G C A C G T G C T A A 3
3 A A T C G T G C A C G A T T 5
Estructura Terciaria
Se refiere a como se almacena el
ADN en un volumen reducido.
Vara segn se trate de
organismos procariotes o
eucariotes:
a) En procariontes se pliega como una
super-hlice en forma,
generalmente, circular y asociada
a una pequea cantidad de
protenas, no histonas. Lo mismo
ocurre en las mitocondrias y en los
plastos.
b) En los eucariotas est unido a
protenas del tipo histonas,
constituyendo la cromatina
Propiedades del ADN

1. Tamao y peso molecular: Se utilizan unidades moleculares:


nanmetros y amstrong
Para el PM se utiliza el dalton:
1 d = masa de 1 tomo de H = 1,66 x 10 24 g

1 vuelta 34 A 10 pb
10000 X

X = 2491 pb = 3000 = 2 x 106d

As, si se determina el PM se puede calcular indirectamente la


longitud y su contenido gentico
Genoma ms pequeo: 1,7 u SV40 ( 5 a 10 genes)
Hombre: 1,6 a 8,2 cm: 48 a 240 megabases
2. Propiedades Fsicas y Qumicas
a) Absorbancia: Mide la concentracin del ADN en funcin de la
cantidad de luz de una determinada longitud de onda que es
absorbida por las molculas en la solucin. La molcula duplexa
presenta menor absorbancia. Se puede calcular la pureza de la
solucin con la proporcin 260/280. La absorbancia de un mol de
ADN es de un 35 a 40% al valor calculado de la absorbancia de las
bases que la componen: efecto hipocrmico
Bases nitrogenadas Absorcin mxima 260 nm
Protenas Absorcin mxima 280 nm

A260 A260
DNA = 1,8 RNA = 2,0
A280 A280
b) Interacciones Inicas: Debido a la presencia del gran
nmero de fosfatos hacia su superficie, el ADN se comporta
como un fuerte polianin: polianin, que le permite reaccionar
con molculas positivas
c) Viscosidad: Es directamente proporcional a la resistencia de
sus componentes a flotar:
- ADN duplexo: fuertemente viscoso
d) Sedimentacin en centrifugacin: Se usa para separar cidos
nucleicos. Hay dos tcnicas:
En gradiente de densidad preformada: La posicin del ADN en
el tubo depende del tiempo de exposicin y del tamao de la
molcula
En cloruro de cesio: Cuando la concentracin de ClCs es la
misma en todo el tubo, las molculas de ADN se separan en la
base de su propia densidad relativa, que no depende slo de su
tamao sino de su conformacin. Cuando la concentracin es
diferente lo hace en base a su tamao

Importante para obtener


riqueza en pares GC. El ADN
duplexo con mayor GC se va
ms al fondo que el que tiene
ms AT en igualdad de tamao
e) Desnaturalizacin desnaturalizacin: Marmur y Dotty
demostraron que incrementando lentamente la T, el ADN pierde
su naturaleza duplexa.
Tambin demostraron que existe un Tm. La dinmica de la
desnaturacin se midi a travs de la absorbancia: efecto
hipercrmico
Tm de desnaturalizacin
Relacin entre el Tm y la cantidad de
pares GC
Cuando el ADN se enfra vuelve a recuperar su estructura duplexa, si
se lee a 260 nm baja la absorbancia: efecto hipocrmico
La velocidad de renaturalizacin del ADN de un organismo est
relacionada con su complejidad. La complejidad se define como la suma
del nmero de nucletidos que tiene cada tipo de secuencia sin
tener en cuenta el nmero de veces que est repetida.
El ADN de los virus y las bacterias en
su mayora slo tiene secuencias que
estn una sola vez en el genoma
(secuencias nicas). Sin embargo, los
organismo ms complejos, como los
eucariontes, presentan distintos
tipos de secuencias en su genoma. Los
eucariontes tienen secuencias nicas
(SU), secuencias de bajo nmero de
copias (SBNC, 2-10 copias),
secuencias repetidas (SR, alrededor
de 102 copias) y altamente repetidas
(SAR, 103 a 106 copias).
Curvas Cot de renaturacin
Las curvas Cot de organismos eucariontes con diferentes tipos de
secuencias, poseen varios puntos de inflexin. Cada uno de ellos
correspondiente a un tipo de secuencias (nicas, moderadamente
repetidas, y altamente repetidas).
Se usa el cot
f) Energa libre: ( G) Su relacin seala el grado de
estabilidad de la doble hebra. Es una constante termodinmica
que indica la cantidad de energa consumida (+) o liberada (-) en
una reaccin. Se mide Kcal/mol
Globalmente cuando se va a formar una estructura de bases
emparejadas, se libera energa y su estabilidad est en esa
capacidad para liberarla.
Se libera energa en cada par de bases que se forman

g) Hibridacin: Las tcnicas de desnaturalizacin y posterior


renaturalizacin se utilizan para conseguir la hibridacin de
cidos nucleicos, es decir, una vez separadas las dos hebras del
ADN doble hlice, es posible volver a formar una doble hlice
con una hebra de ADN que sea complementaria (hibridacin de
ADN con ADN) o volver a formar una doble hlice con un
segmento de ARN que contenga la secuencia complementaria
(hibridacin de ADN con ARN).
Se puede identificar el gen que ha dado lugar a un determinado
ARNm. Si se asla un mensajero determinado en una clula, es
posible hibridar este ARN con el ADN de la clula previamente
fragmentado mediante el uso de endonucleasas de restriccin.
Las endonucleasas de restriccin de tipo II son enzimas que
reconocen secuencias cortas de ADN (de 4 a 6 pares de bases) de
tipo palindrmico y cortan por el interior de la secuencia diana a la
misma altura en las dos hlices de ADN (corte simtrico) o a
distinto nivel en cada hlice (corte asimtrico).
METODOS DE ESTUDIO
ELECTROFORESIS
Separacin de molculas de DNA y RNA de distinto tamao por
migracin en un campo elctrico.
Objetivos:
Elaborar cariotipos moleculares.
Conocer la ubicacin de genes en cromosomas.
Elaborar mapas fsicos y genticos.
Elaborar mapas de restriccin.
Caracterizar, amplificar y secuenciar molculas de DNA.
Elaborar perfiles de DNA que permitan identificar a
individuos,diferenciar poblaciones, razas o especies.
Perfiles de DNA de utilidad en el diagnstico de
enfermedades genticas e infecciosas.
Terapia con drogas y/o terapia gentica.
Muestra DNA Preparacin gel agarosa Instalacin equipo electroforesis

Colocacin muestra DNA Migracin DNA

Longitud de fragmentos de DNA

Coloracin de bandas DNA


Fotografa

EtBr
Bienvenidos al mundo
del ADN