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LÓPEZ GÓMEZ MARÍA DE LOS ÁNGELES

VÁZQUEZ ESCAMILLA MELISSA

Definition

 Blotting is the technique in which nucleic
acids or proteins are immobilized onto a
solid support, generally nylon or
nitrocellulose membranes.

Clasificación Southern Blot Northern Blot Western Blot Dot Blot .

. Southern Blot Es una técnica de hibridación que permite identificar fragmentos de DNA separados por electroforesis en gel y transferidos a una membrana de nitrocelulosa o nylon.

en este caso son de ARN. . salvo que las moléculas de ácido nucleico de la muestra. Northern Blot Es esencialmente idéntica al método de southern blot.

.

Procedimiento Blots .

Digestión enzimática del ADN 3. Extracción de ADN 2. Electroforesis en gel de agarosa en ADN. y en gel de acrilamina para ARN en condiciones desnaturalizantes en presencia de formaldehído . Procedimiento 1.

Procedimiento  El siguiente paso es la transferencia del ADN a una membrana de nylon o nitrocelulosa para obtener una réplica exacta del patrón de bandas de ADN que hay en el gel. .

entre ellos la sonda o sondas marcadas específicamente y diluidas en una solución de hibridación adecuada. Procedimiento  La hibridación se realiza incubando la membrana con diferentes reactivos en un tubo de hibridación. .

. de manera que aparecerá una mancha oscura en los puntos de la membrana en que se localicen los híbridos sonda/secuencia diana. el revelado que se realiza mediante autorradiografía con una película de rayos X. Procedimiento  Finalmente.

.

.

.

Western Blot Es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas en una muestra determinada .

Procedimiento .

Electroforesis con geles de poliacrilamida 2. Análisis . Revelado 5. Procedimiento 1. Incubación con anticuerpos 4. Transferencia a la membrana de nitrocelulosa 3.

SEGÚN SU PESO MOLECULAR. Dot Blot LOS ÁCIDOS NUCLEICOS SE APLICAN DIRECTAMENTE A LA MEMBRANA SIN SEPARARLOS. LA FIJACIÓN SE HACE POR LO GENERAL CON VACÍO Y EN UN MOLDE CUYO POCILLO PUEDE TENER FORMA DE PUNTO (DOT BLOT) O SER LINEAL (SLOT BLOT). NO SE REALIZA ELECTROFORESIS. . ES DECIR.

.

. Aplicación  Southern Blot  Detección de reordenamiento de los genes que codifican para las cadenas ligeras y pesadas de las inmunoglobulinas. así como también la familia de receptores de células T.

 Northern Blot  Amplificación de expresión genética  La variación en el tamaño de un gen puede además indicarnos deleciones o errores en el proceso de transcripción. .  Alternando la sonda podemos conocer la secuencia e incluso determinar que región ha sido delecionada.

fluorescencia. . o bajo cuáles condiciones fisiológicas se expresa un gen para producir una proteína. Western Blots  Puede usarse para determinar en qué tejidos.  Detecta a unión antígeno-anticuerpo por actividad enzimática.

es. Fundamentos de técnicas blotting: Southern. Available from: https://www.net/CarolinaHerrera151/fundamen tos-de-tcnicas-blotting-southern-northern-westernK . BIO TED.seap. Western. SlideShare.slideshare.es/protocolos/SOUTHERN-BLOT- ANALISIS. [Internet].es/c/document_library/get_file?uuid =dd48aeb8-9e38-4541-bcfb-d75fd6b2ee9f  2.pdf  3. Referencias  1. Available from: http://bioted. 2017 [cited 29 April 2017]. 2017 [cited 29 April 2017]. [Internet]. Available from: https://es. Seap. 2017 [cited 29 April 2017]. Northern. Citar un sitio web .Cite This For Me [Internet].

(2015).sciencedirect.conganat.afrivip. (2015). 29/04/2017. Sánchez. Molecular Biology: Blotting / Hybridization techniques. de Revista Médica Clínica Las Condes Sitio web: http://www. Patología Molecuar.org/seap/revista/v30-n3/13. 01/05/2017. Farfán. Ramón y Cajal. E.pdf . P. BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA AL DIAGNÓSTICO CLÍNICO. 29/04/2017.pdf  BQ. R. de Common Attribution License Sitio web: http://www. Mádrid Sitio web: http://www. Referencias  M. (1997).org/sites/default/files/molecular_hybridi zation_complete. Lleonart.com/science/article/pii/S07168640 15001546#bib0010  Dr Henriëtte van Heerden. MAURICIO J. Martín-Duque y S. de Cínica Puerta de Hierro.

slideshare.net. 2017 [cited 12 May 2017]. 2017 [cited 12 May 2017].pdf.net/tratamiento1/fundamento-y- procedimiento-de-las-pruebas-de-western-blot  2. 2017 [cited 12 May 2017]. FUNDAMENTO Y PROCEDIMIENTO DE LAS PRUEBAS DE WESTERN BLOT [Internet]. Flores. .pdf  3.com/sites/dl/free/6071513669/1086 947/16_CHAPTER_16_ARMENDARIZ_147_154. Referencias  1.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica. Es.ibt.mheducation.mheducation. Técnicas de hibridación [Internet]. [Internet]. Available from: http://highered. Available from: https://es.unam.com.slideshare. Available from: http://www. Highered.