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FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS

DEPARTAMENTO DE QUMICA
MAESTRA EN BIOTECNOLOGA

MICROBIOLOGA

AISLAMIENTO DE LEVADURA
TOLERANTE AL ALCOHOL Y HONGO
CELULOLTICO

Carolina Arango Rivas


Escilda Rodrguez Calonge
Dario Gonzalez
Txico microorganismos fermentadores

Concentraciones limitadas Etanol


Acumuladas en el proceso de
fermentacin
Proporcin de etanol producido por el
organismo etanolognico
Mathews y Van Holde, 1998;Stryer, 1993)
Intima dependencia con el grado de
tolerancia de la cepa al alcohol
Inhibicin de la
multiplicacin celular LA TOLERANCIA AETANOL

PRINCIPALES ASPECTOS A EXPLORAR EN LAS


Efecto letal generalizado CEPAS ETANOLOGNICAS Y LA INVESTIGACIN DE
NUEVOS MECANISMOS PARA EL MEJORAMIENTO
para las clulas DEL PROCESO DE PRODUCCIN
Levaduras

Grupo ms importante de microorganismos


explotados para propsitos
industriales
Son capaces de utilizar una gran
cantidad de sustratos (glucosa,
fructosa, sacarosa)
Son mas resistentes al etanol y
presentan mayores rendimientos
Ricas en esteroles, por lo que
mantienen por mas tiempo su
actividad fermentativa
Menos probable la contaminacin por
bacterias cido lcticas

Kyyper, 2006
AISLAMIETO
Medio Sabouraud Fermento Siembra agotamiento
de guayaba

Eleccin de colonia
Observacin y resultados

Dif. concentraciones Siembra en YPD + alcohol


EL BAJO PH DEL MEDIO RESULTAFAVORABLE
PARA EL CRECIMIENTO DE LOS MEDIO
HONGOS
SABOURAUD

+ antibitico

Se suspendieron 65 g de medio
deshidratado en un litro de agua destilada
Se calent agitando frecuentemente y se
dej dejar hervir durante 1 minuto,
evitando el sobrecalentamiento

Se esteriliz a 121C durante 15 minutos


1. Se distribuy en las cajas y se dej enfriar a
temperatura
utilizacin
ambiente antes de la
FERMENTO DE
GUAYABA
Fermentaciones alcohlicas
espontneas no se deben a una nica
cepa de levadura, sino que es el
resultado de la accin combinada de
diversas especies de estas.

Se sabe que es mas efectivo el uso de


cultivos autctonos de levaduras ya que
se encuentran adaptadas a las
condiciones climticas de la zona y a la

2. materia prima a fermentar.


SIEMBRA POR
AGOAMIENTO
INCUBACIN A
35 C POR 48
HORAS

Seleccin de
colonias de
mayor
crecimiento

3.
Glucosa 2%
Extracto de levadura 1%
Peptona 2%
CRECIMIENTO
MEDIO YPD +
Agar 2%
ALCOHOL
Determinacin del nivel de
tolerancia a etanol

Medio lquido YPD con sacarosa a diferentes concentraciones


de etanol (4 %, 6 %, 8 %) , 3 replicas por concentracin

Se inocularon 100l del inoculo (colonias previamente


seleccionadas) en 9ml de medio YPD.

Los cultivos se incubaron a 30C y su monitoreo se realiz a

4.
las 72 horas.
YDP + Alcohol diferentes concentraciones

4% 6% 8%

9ml 9ml 9ml

100 ul

Inocuo de colonia seleccionada


en medio YDP
RESULTADOS
100 % LEVADURAS
TOLERANTES AL
ALCOHOL

Burbujeo
(CO2) 4 % 6% 8%
CELULOSA
Constituyente carbonado de las plantas superiores y
probablemente el compuesto orgnico ms abundante
en la naturaleza.

RECICLAJE DEL MATERIAL VEGETAL


Descomposicin de este
carbohidrato
Cambios en el nmero
Ciclo biolgico del carbono
Modificaciones en el contenido de materia
Los microorganismos del orgnica del suelo.
suelo que transforman
Informacin acerca del estado del suelo y su
material vegetal (40-60% de
productividad
residuos de plantas) por
catabolismo llegan a la Gran atencin a los organismos que
formacin de CO2 y su participan en la descomposicin de esta sustancia
liberacin a la atmsfera. (Hendricks, et al, 1995) (Alexander, 1980)
HONGOS
Trichoderma reesei CELULOLTICOS
Phanerochaete chrysosporium,
Fusarium solani,
Penicillum funiculosum,
Trichoderma koningii,
Sporotrix sp.,
Alternaria sp.,
Geotrichum sp.,
Rhizoctonia sp.,
Trametes sp.,
Paecilomyces sp. ,
Mucor sp.,
Cladosporium sp.,
Bulgaria sp.,
Chaetomium sp.,
Helotium sp.,
Aspergillus sp..
(Aubert, 1988)
MEDIO CMC

Composicin
Medio de cultivo
g/dm3
Carboximetilcelulosa 10
Extracto de levadura 2,5
Peptona universal 2,5
Agar CMC al Sulfato de amonio 0,5
1% Cloruro de calcio 0,5
Fosfato mono bsico de potasio 0,1
Fosfato di bsico de potasio 0,1
Agar pithagel 2,5
AISLAMIENTO
AISLAMIENTO PRIMARIO
Muestra de suelo 10 gr Solucin salina al 0.89

Inoculacin en Medio
CMC
INCUBACIN
Seleccin de hongos A 35 C POR
3 DAS
AISLAMIENTO
AISLAMIENTO SECUNDARIO

INCUBACIN
Inoculacin en Medio A 35 C POR Revelacin de H.
CMC celuloltcos
3 DAS

ROJO CONGO AL
1% (p/v) 15 min
retir esceso
OBSERVACIN + Na Cl 0,5 N

DE HALOS (Teather y Wood, 1982).


RESULTADOS

MICROORGANISMOS DEGRADADORES

Se pudo evidenciar la hidrlisis de polisacridos por parte de los hogos


celulolticos debido a que el colorante forma complejos con las molculas
an no hidrolizadas, facilitando as la diferenciacin entre microorganismos
celulolticos y no celulolticos por la formacin de zonas de aclaramiento
alrededor de las colonias
(Hendricks, et al., 1995)