Introdução - Leishmaniose

• Aspectos Gerais
–A Leishmaniose é uma doença infecciosa
Transmitida pelo protozoário do gênero Leishmania

Forma Promastigota extracelulares em cultura (A) e forma Amastigota intracelulares em

macrófagos (B) do protozoário Leishmania spp.

1
UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO GRANDE DO NORTE
SOCIEDADE BRASILEIRA DE BIOQUÍMICA E
BIOLOGIA MOLECULAR – SBBQ
PROGRAMA MULTICÊNTRICO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM
BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR – PMBQBM
DOCENTE: Dr MICÁSSIO FERNANDES DE ANDRADE

Discente:Atarissis Morais Dias

 Introdução - Leishmaniose
• Aspectos Gerais
– A Leishmaniose apresenta duas formas clínicas:
• Leishmaniose visceral (LV);
– Leishmania donovani;
– Leishmania infantum;

• Leishmaniose tegumentar (LT).

– Leishmania braziliensis;
– Leishmania amazonensis.

3
 Introdução - Leishmaniose
Indivíduo com
Lesão cutânea localizada e
Hepatoesplenomegalia
lesão da mucosa

4
 Introdução - Leishmaniose
• Ciclo da doença

5
 Introdução - Leishmaniose
• Aspectos Gerais
– A Leishmania são parasitas intracelulares obrigatórios
do sistema de fagócitos mononucleares (macrófagos).

– Mas esses parasitas também já foram detectados:

• Neutrófilos;
• Fibroblastos;
• Células endoteliais;
• Células dendríticas.

6
 Introdução - Leucócitos
• Granulócitos
Figura 4 Tipos de Leucócitos
(Polimorfonucleares)
NEUTRÓFILOS
EOSINÓFILOS
BASÓFILOS

• Agranulócitos
LINFÓCITOS Fonte: Campiolo, 2015
MONÓCITOS

7
 Introdução - Neutrófilos
• Os neutrófilos são as Neutrófilos

primeiras células
recrutadas no local da
infecção na leishmaniose.

• Importantes nos
processos inflamatórios,
defesa e fagocitose.

Fonte: Campiolo, 2015

8
Introdução - Neutrófilos

Figura 6: Esquema do
recrutamento e migração de
neutrófilos

9
Fonte : Rochael, 2016
 Introdução - NETs
• NETs – (“Neutrophil extracellular traps” –
redes(Armadilhas) extracelulares de neutrófilos)

– É uma rede de fibras extracelulares composta por

DNA, histonas e várias proteínas/enzimas.

– Podem contribuir para a contenção de promastigotas

no local de infecção, facilitando assim sua absorção
por fagócitos mononucleares(macrofagos).

10
 Introdução - NETs
Figura 7. Redes extracelulares de neutrófilos (NETs)

11
Fonte : Rochael, 2016
 Objetivo

• Verificar a presença de NETs na leishmaniose

tegumentar americana (LTA) e sua relação com a
presença de amastigotas.

12
Imunohistoquímica
Esquema da imunohistoquímica

Fonte: Ferro, 2013

13
 Imunohistoquímica
Detecção de NETs em lesões ativas.

A % de
Presença de NETs
neutrófilos
em 27 (77,1%) de 35
variou de
lesões analisadas
1,8 – 53,6

Correlação entre NETs e neutrófilos foi

r = 0,586; p = 0,0001
14
 Imunohistoquímica
Detecção de NETs em lesões ativas.

A % de
NETs com
Presença de presença
Amastigotas em 29 de
(82,9%) de 35 lesões amastigotas
analisadas variou de
1,8 – 53,6

Correlação entre presença de Amastigotas

e o número de NETs
r = 0,710; p = 0,0001
15
 Imunofluorescência
Etapas da analíse por imunofluorescência

Fonte: Meira, 2010

16
 Imunofluorescência
Colocalização de elastase de Colocalização de macrófagos e amastigotas
neutrófilos e DNA em lesão por LTA CD 68 (+) por imunofluorescência

17
 Microscopia Confocal
Etapas da analíse por
microscopia confocal
Colocalização de NETs e amastigotas

18
 Conclusão

• A presença de NETs está diretamente relacionada à

presença de amastigotas intactos

19
UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO GRANDE DO NORTE
SOCIEDADE BRASILEIRA DE BIOQUÍMICA E
BIOLOGIA MOLECULAR – SBBQ
PROGRAMA MULTICÊNTRICO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM
BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR – PMBQBM
DOCENTE: Dr MICÁSSIO FERNANDES DE ANDRADE

Discente:Atarissis Morais Dias