I.

EL GEN COMO FARMACO

II. ESTUDIOS DE TRANSFERENCIA

GENICA. ENSAYOS PRECLINICOS Y
CLINICOS

III. ESTADO ACTUAL DE LA TERAPIA

GENICA
Transferencia de material genético para
prevenir o curar enfermedades.
Introducir en la célula un gen que
reemplace al que está defectuoso o
ausente
Un tto en el que en lugar de fármacos se
administran genes y estos se consigue a
través de un vector.

Tipos de terapia
Génica
 De las Células
Germinales.
 Somático
 1. Se extraen
2. En el lab. Se
cél. del
modifica un virus
paciente de forma que no
pueda
reproducirse.

3. Se
7.Las cél. modificadas inserta
genéticamente un gen en
producen la proteína o el virus.
la hormona deseada.

6.Las cél. modificadas

se inyectan al paciente.

4.El virus modificado

se mezcla con células
del paciente.

5.Las cél. del paciente se

modifican genéticamente.
1. SECUENCIAS CODIFICADORAS DE PROTEINAS:
Más usadas son copias de ADN complementario
obtenido a partir del ARNm que se insertan dentro del
plásmido que facilitan la transferencia y la expresión a
cél. Diana.
Tb hay minigenes e incluso largas secuencia de ADN.

2. SONDAS ANTISENTIDOS:
Tipo de tecnología que utiliza ODN de pequeño
tamaño e inhibe la expresión génica, suelen
sintetizarse químicamente y se administra como
un fco convencional o través de vectores.
3. ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO TRIPLEX:
Asociación colineal de 3 cadenas de ác. Nucleico;
junto con las sondas antisentido tiene un gran
potencial como modular génico, esta unión a un
gen puede bloquear la transcripción del ARN, lo
cual anularía su expresión.

4. RIBOZIMAS:
Son mol. de ARN que catalizan la escisión de
otras mol. de ARN. Dicha separación produce un
ARNm incompleto e inestable , lo cual inhibe la
expresión proteica.
5. siARN:
Significa ARN pequeño de silenciamiento.
Degradan al ARNm homólogo mediado de forma
natural por el complejo RISC o la inhibición de la
traducción proteica.
Pueden sintetizarse químicamente. El
silenciamiento génico será transitorio (< 1 sem.)
Su eficacia ha sido demostrada en modelos
animales en enfermedades como VIH,
degeneración macular, alzheimer, etc.
 Cuando se ha aislado y caracterizado un gen
asociado a una enf. concreta, se puede iniciar el
estudio y desarrollo de métodos terapéuticos
que permitan la adm. segura y eficaz de su
secuencia nucleotídica las cél. afectadas.
c/vector tiene ventajas
e inconvenientes
1. VECTORES VÍRICOS dependerá del tej.
enferm. Y si la terapia
es in vivo ó ex vivo y si
será permanente o
transitoria.

Si la expresión del
2. MÉT. FISICOS Y
gen terapéutico es
QUÍMICOS
durante un periodo
transitorio.
VIRUS DE LA HEPATITIS B VIRUS DEL VIH

VIRUS DE LA POLIO, etc

Sin embargo los sistemas de

empaquetamiento/compleme
ntación no están aun lo
suficientemente desarrollados.
 Estos sist. de
transf. génica no
vírica se
denomina “virus
artificiales” ya
que imitan
funciones
biológicas de los
sistemas víricos.
 Pocos tej. En especial
músculo, tiroides y tej.
sinovial, expresan los genes
recombinantes inyectados. S
e desconoce el mx por el que
dichas cél. expresan el ADN
purificado.
Para ↑ in vivo la incorporación celular de ADN
purificado se ha descrito el método que utiliza
“bombardeo” con microparticulas de ADN que
se proyectan en los tejidos diana mediante
una “pistola génica”.
Se ha transferido genes a varios órganos: piel,
hígado, musculo aunque la expresión se
observa solamente en las capas mas
superficiales del tej tratado.
 El plásmido puede ser recubierto con
liposomas o polímeros catiónicos
formando estructuras llamados
lipoplejos y poliplejos, en ambos casos
estas estructuras protegen y estabilizan
el ác. nucleico e ↑ su captación por
parte de la cél. una vez en el nucleo
celular los plásmidos se mantienen de
forma extracromosómica.
 Transferencia Génica Dirigida

Transferencia Génica
Modulada
La amplia gama de
enferm. Hace que
resulte imposible Cromosomas Mamíferos
diseñar un único Artificiales
sistema de
transferencia Vectores Híbridos
génica.

Reparación Génica Dirigida

1.Transferencia Génica Dirigida

Para diseñar vectores retrovíricos dirigidos, se ha

de restringir la promiscuidad de tropismo para
conferir una afinidad restringida para ciertas cél.
humanas.

Dotación de una
Estrategias que
determinada afinidad a
emplean conjugados
la glucoproteina de la
moleculares, en las que
envuelta mediante
se acoplan ligandos a la
ingeniería genética
superficie de la
(adición de dominios
partícula retrovírica.
proteicos)
1.Transferencia Génica Dirigida

Se puede incorporar
también a liposomas
otros ligandos como:
factores de
crecimiento,hormonas,
glucoproteínas, etc.
Se esta estudiando diferentes
sistemas para dirigir los liposomas
hacia tipos celulares específicos. El
acoplamiento de Ac a los liposomas
(inmunoliposomas) puede
determinar especificidades
diferentes dependiendo del Ac
incorporado.
2.Transferencia Génica Modulada

Otra forma de conseguir que

los vectores adquieran
especificidad es limitar, a
nivel TRANSCRIPCIONAL, la
expresión del gen
terapéutico a determinados
tej diana.
Se usa solo para terapia
génica ex vivo por su gran
tamaño.
3. Cromosomas Mamíferos
Artificiales (MAC):

Hasta el momento
solamente se ha
caracterizado con detalle los
telómeros por lo que no se
avanza en este campo hasta
que los centrómeros y los
orígenes de replicación se
caractericen y puedan
manipularse.
4.Vectores Híbridos:

Se están desarrollando con el

propósito de aunar en la eficiencia de
transducción in vivo.
La actuación de este vector esta en la
conversión de las propias cél. diana
en cél. productoras de retrovirus de
manera transitoria.
 5. Reparación La cirugía genética se basa en la
corrección especifica de mutaciones
génica dirigida: a nivel genómico.
Trata de reparar in situ a nivel
cromosómico, la secuencia alterada
causante de enfermedad.

Ello conlleva a una reversión

permanente y definitiva del fenotipo
de la enfermedad tratada y el Gen
reparado recuperaría los patrones de
expresión de tejido o individuo sano.
Ayuda a conocer con >
profundidad la biología
de los HSC y mejorar la
eficiencia de la
transferencia y
expresión génica
1.1 “Marcaje de Ls Infiltradores de
Tumores (TIL):

Se marcaron ex vivo TIL de pac con

Resultados obtenidos demostraron
cáncer mediante transducción con
que las cél manipuladas podían ser
un vector retrovírico que contenía el
devueltas al paciente sin ningún
gen de la resistencia a la neomicina
riesgo y posteriormente se podían
como marcador selectivo y se
detectar in vivo.
reinfundierón al paciente.
1.2 “Marcaje de Células
Hematopoyéticas:

Estas cél pueden mejorar la esperanza Esto conduce a una evaluación

de vida de los pacientes sometidos a
radioterapia o quimioterapia. Pero la
reaparición de la enfermedad es la causa
principal por la que dicho tto suele ser
ineficaz.
exhaustiva de las técnicas utilizadas
para “limpiar” la medula ósea con el
fin de eliminar células malignas.
 a. Inmunodeficiencias:
Deficiencia de Adenosina
2.1 Enfermedades Genéticas Desaminasa (ADA) poco
Clásicas frecuente en la que niños carecen
de esta enz necesaria para la
función normal de su S.I.
En 1990 una niña recibió una
infusión de sus propios Ls T que
De la multitud de enfermadedes habían sido manipulados ex vivo
genéticas pocas han sido para introducirles una copia
seleccionadas para ensayos de normal del gen de la ADA.
terapia génica. Solo era necesario corregir los Ls
T para curar la enfermedad.
 c) Hipercolesterolemia Familiar:
Hay un defecto en la proteína principal
implicada en el metabolismo de
2.1 Enfermedades Genéticas Clásicas colesterol, el receptor de LDL.

b) Enfermedad de Gaucher:
Causada por deficiencia de la enz y su
acumulación causa esplenomegalia,
lesiones en huesos y neurológicas.
2.2 Enfermedades de Coagulación y otras que implican
2.3 Enfermedades Multifactoriales.
la circulación sanguínea.

Queratinocitos, mioblastos y fibroblasto. Diabetes y enferm. cardiovasculares.

Algunos han indicado que es posible la Se ha demostrado que las cél. Pancreáticas β
expresión génica al largo plazo in vivo después pueden ser modificadas mediante vectores
de trasplantar las cél transducidas ex vivo. adenoviricos y AA para el tto de las ≠
manifestaciones de las diabetes.

Es muy probable que pronto se establezcan TG

para varias enfermedades y lesiones del SNC.
2.4 Neuropatías: Enfermedades como alzheimer, parkinson, etc
son candidatas a este tipo de terapia génica.
 2.6 Cáncer
2.5 Enfermedades infecciosas: el SIDA
como modelo.
Existe la posibilidad de emplear la
terapia génica para destruir
selectivamente las cél. tumorales.
Inmunización Intracelular: conferir resistencia Existen 5 categorías:
a ala replicación vírica. (SIDA)
Inmunológica: ↑ la inmunidad antivírica a. Modificación de la respuesta
utilizando cél. modificadas genéticamente inmunitaria antitumoral del
para expresar proteínas víricas con el fin paciente.
provocar una respuesta celular inmunitaria b. Modificación de la medula ósea para
antivírica. quimio protección.
c. Manipulación de oncogenes y otras
mol implicadas en la proliferacion.
d. Protocolos ens/profco.
e. Administración de virus oncoliticos.
 La transferencia génica a seres humanos es factible.

Estudios han demostrado que los genes pueden ser transferidos tanto ex vivo
como in vivo y que todos los vectores han funcionado como se esperaba.

Estudios han demostrado que genes terapéuticos transferidos tanto con vectores
víricos y no víricos pueden producir rptas biológicas a partir del pto génico que
generan.

Estudios apoyan que la corrección del genotipo puede tener consecuencias en el

fenotipo.

Se produjo tb un fracaso con la muerte de un paciente, que falleció como

consecuencia de la adm de un vector adenovirico dirigido al hígado que contenía
la copia correcta del gen que codifica para la OTC. Se dice que la sobredosis pudo
provocar un colapso agudo del sist. Respiratorio que le produjo la muerte.
Variaciones inexplicables entre individuos: no todos los
pacientes responden igual.

Las predicciones basadas en estudios de transferencia

génica utilizando modelos animales no se ha traducido
en estudios seguros y eficaces en seres humanos.

El riesgo de mutagenesis.

Incrmento de especificidad y eficiencia de los vectores.

Con el genoma humano recientemente secuenciado, existen entre
25000 y 30000 genes que serán dianas o podrán incluirse en
vectores de expresión.

La terapia génica se ensaya ex vivo, utiliza tecnologías muy

avanzadas y son caras para aplicarse rutinariamente en cualquier
centro medico.

Asimismo, con tecnologías como reparación de genes in situ puede

rptar el avance para el tto de enfermedades.

Se necesita mas tecnología para identificar y aislar cél. Madre para

conseguir una elevada eficiencia de transferencia génica.

Junto con mét. De dx, la terapia génica tb se aplicara para prevenir

estados patológicos al suministrar genes protectores o corregir
genes mutados antes quedichas enfermedades se manifiesten.
Gracias