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Feduchi

BIOQUÍMICA
Conceptos esenciales 2ª ed.

ELENA FEDUCHI: Dra. Bioquímica y Biología Molecular. Acreditada


como Profesor contratado doctor por ACAP. Profesora asociada
en la Universidad Alfonso X el Sabio (1998-2013). Profesora
asociada en Universidad Autónoma de Madrid (1993-1998)
CARLOS ROMERO: Dr. Bioquímica y Biología Molecular.
Universidad Complutense de Madrid Profesor Titular. Universidad
Alfonso X el Sabio
ESTHER YAÑEZ: Dra. Bioquímica y Biología Molecular. Profesora
Titular. Universidad Alfonso X el Sabio.
ISABEL BLASCO: Licenciada en Ciencias Biológicas por la
Universidad Complutense de Madrid (UCM). Profesora de la
Comunidad de Madrid. Profesora asociada en la Universidad
Alfonso X el Sabio (2007-2010).
CARLOTA GARCÍA-HOZ: Doctora en Bioquímica y Biología
Molecular, Universidad Autónoma de Madrid. Acreditada como
Profesor ayudante doctor por ACAP. Profesora en la Universidad
Alfonso X el Sabio (2008-2013).
BIOENERGETICA INTRODUCCION AL METABOLISMO
Catabolismo Vs Anabolismo

Implicancias
termodinamicas
ETAPAS METABOLISMO
Generalidades Enzimas
 Las enzimas son necesarias para que las reacciones bioquímicas:
• Se produzcan a una velocidad adecuada para la célula

• Se dirijan hacia rutas útiles y necesarias según necesidades energéticas


y necesidad de producción de distintas sustancias.

 Características
 Gran poder catalítico
 Alto grado de especificidad
 Actúan en soluciones acuosas en condiciones determinadas de Tª y pH
 Su actividad puede regularse

 Importancia
 Agricultura

 Industria alimentaria

 Medicina
Generalidades Enzimas
 Características catalíticas

E+S ES E+P

 Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad.

 No se alteran en el proceso, no se modifican en su actuación.

 No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no


modifican la constante de equilibrio de la reacción, sino que aceleran su
consecución.
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
Edición LAS ENZIMAS COMO CATALIZADORES BIOLÓGICOS García-Hoz

sustrato interacciona con el centro activo de la


enzima y se forma un complejo enzima-sustrato

K1 K2
E+S E + P
K-1 ES

UNION DEL SUSTRATO ETAPA CATALITICA


ES estabiliza el estado de transición.
© 2015, Editorial Médica
Tabla 8-1. Clasificacion (EC)IUBMB de las enzimas segun la reacci6n catalizada

Clase subclase
1.-Oxidorreductasas Deshidrogenasas, oxidasas, reductasas, peroxidasas, catalasa,
oxigenasas, hidroxilasas
Reaciones Oxido- Reduccion
Transaldolasas y transcetolasas, fosforiltransferasas, quinasas,
2. Transferasas fosfomutasas
Transferencia de grupos intactos de una molecula a otra
Esterasas, glucosidasas, peptidasas, fosfatasas, tiolasas,
3. Hidrolasas fosfolipasas, amidasas, desaminasas, ribonucleasas
Reacciones de hidrolisis

4. Liasas Descarboxilasas, aldolasas, hidratasas, deshidratasas, sintasas, liasas


Adicion de grupos ,dobles enlaces sin participación del agua

5. lsomerasas Racemasas, epimerasas, isomerasas, mutasas


Transferencia intramolecular de grupo (cis/trans. L/D,aldehído,cetona

6. Ligasas Sintetasas, carboxilasas


Union de sustratos a expensas de la hidrolisis del ATP
Nomenclatura de enzimas

 Código numérico encabezado por las letras EC (enzyme commission)


 Cuatro números separados por puntos

• El 1º indica a cual de las seis clases pertenece la enzima

• El 2º se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo((tipo de


sustrato, el donador de electrones o el enlace afectado)

• El 3º aspectos específicos de la reacción (sustrato, grupo funcional


que participa en la reacción, etc.).

• 4º se refieren alos grupos Químicos específicos que intervienen en la


reacción. número concreto que ocupa la enzima dentro de la subclase.
E.C. 1.1.1.1
 Nombre sistématico Alcohol DH Acetaldehído
Etanol piruvato
Lactato Lactato DH
Sustrato preferente + reacción + “asa”
L-lactato: NAD+ oxidorreductasa E.C. 1.1.1.2
Cofactores, coenzimas y el papel de las vitaminas
Vitaminas como cofactores enzimáticos
Enfermedades
VITAMINAS FUNCIONES
carenciales

C (ácido Coenzima de algunas peptidasas. Interviene en la síntesis de


Escorbuto
ascórbico) colágeno

Coenzima de las descarboxilasas y de las enzima que


B1 (tiamina) Beriberi
transfieren grupos aldehídos

B2 Dermatitis y lesiones
Constituyente de los coenzimas FAD y FMN
(riboflavina) en las mucosas

B3 (ácido Fatiga y trastornos del


Constituyente de la CoA
pantotinico) sueño

B5 (niacina) Constituyente de las coenzimas NAD y NADP Pelagra


B6 Interviene en las reacciones de transferencia de grupos
Depresión, anemia
(piridoxina) aminos.
B12
Coenzima en la transferencia de grupos metilo. Anemia perniciosa
(cobalamina)

Coenzima de las enzimas que transfieren grupos carboxilo,en


Biotina Fatiga, dermatitis...
metabolismo de aminoácidos.
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Edición

. Enfermedades asociadas a alteraciones del reconocimiento


enzima-cofactor © 2015, Editorial Médica
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

© 2015, Editorial Médica


Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
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Edición

Enfermedades
asociadas a
alteraciones del
reconocimiento
enzima-cofactor
Mutaciones al sitio de unión de
¿Qué la
naturaleza
proteína tendrán los
con el cofactor,
residuos
como del sitio
ocurre de caso
en el uniónde la
del centro activo si
cistationuria. el
y-cistationasa,
sustrato es la glucosa?
que provoca la disminución de
© 2015, Editorial Médica
MECANISMO
Bioquímica Conceptos DE ACCIÓN. 2ª
esenciales DE LAS ENZIMAS
Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición
Función de las enzimas. Principios energéticos

union

INTERACCIONES
NO
Catalitico COVALENTES

Centro activo complementario al estado de TRANSICION Y


NO AL SUSTRATO (naturaleza de AA que lo forman y su
distribución espacial concreta) © 2015, Editorial Médica
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
Edición Cambios energéticos en una reacción exergónica
García-Hoz

energía de activación DG = DH - TDS


∆H<0 ∆S>0
DG = DG0 + RT ln [B]
∆G = ∆H - T∆S [A]

DG0 = -RT ln Keq

Las enzimas no alteran los equilibrios de reacción pero


consiguen que se alcancen de forma más rápida.
© 2015, Editorial Médica
La expresión que nos da la energía libre de un proceso tiene
otra importante derivación. Para la reacción

A B
Esta expresión es:
[B]
DG = DG0 + RT ln
[A]

En el equilibrio, DG = 0; por tanto,


[Beq]
0= DG0 + RT ln [A ]
eq

[Beq]
Pero = Keq Por tanto, DG0 = -RT ln Keq
[Aeq]
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
Las
Edición
enzimas no alteran los equilibrios de reacción peroGarcía-Hoz
consiguen que se alcancen de forma más rápida.

COMO LO HACEN ?

La velocidad está relacionada con la energía de activación


© 2015, Editorial Médica
La catálisis
Bioquímicaenzimática seesenciales
Conceptos consigue .rebajando
2ª esta barrera
Feduchi · Romero mediante
· Yáñez · Blasco · la
García-Hoz
ventaja energética que supone la creación del complejo ES
Edición

< VR

> VR

1. formación de enlaces covalentes o la transferencia de grupos


funcionales de la enzima y del sustrato.
2. La creación de interacciones no covalentes ES con liberación -
∆G energía de unión , que rebaja la energía de activación.

© 2015, Editorial Médica


Las interacciones
Bioquímica en el esenciales
Conceptos complejo .enzima-sustrato
2ª son
Feduchi óptimas
· Romero en ·
· Yáñez · Blasco
García-Hoz
Edición el estado de transición

Daniel Koshland

© 2015, Editorial Médica


Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición
interacciones no covalente, de forma que una porción polar del
sustrato interacciona con una porción polar del centro activo y
una región apolar interacciona con las cadenas laterales de
residuos apolares que se suele denominar “bolsa hidrofóbica”
union

Catalitico

EL centro activo ES complementario al estado de


TRANSICION Y NO AL SUSTRATO
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Modelo del encaje inducido de Kohsland
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

(a) hexo- quinasa en ausencia de


sustrato (PDB 1HKG).

El centro activo de las


enzimas es
complementario al estado
de transición y no al
sustrato

(b) En presencia del sustrato, la


enzima sufre cambios en su
conformación que aumentan las
interacciones entre ambas moléculas
(PDB 1GLK).
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Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
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Edición
Mecanismos químicos para la estabilización del estado de
transición
La energía de fijación proporciona especificidad y catálisis

Catálisis covalente©
Catálisis ácido-base general(a.b)

Catálisis por iones metálicos


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Los cationes
Bioquímica metálicos
Conceptos como
esenciales . 2ªcofactores en las quinasas
Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

Las enzimas
Catálisis por iones metálicos combinan
• Orientando el sustrato de la forma adecuada para que reaccione. diferentes
• Estabilizando cargas en un estado de transición inestable. mecanismos
• Facilitando reacciones de oxidorreducción gracias al paso reversible químicos para
• Cambiando la polaridad de enlaces ↓ΔG‡ Y > VR
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Parámetros que influyen en la velocidad de reacción enzimática

 Factores que modifican la actividad enzimática

 Efecto del pH y la Tª

 Inhibidores

 Inhibición reversible
• Competitiva
• No competitiva

 Inhibición irreversible
Variables que influyen en la velocidad de una
reacción enzimática

1. Concentración de enzima

2. Concentración de substrato

3. pH

4. Temperatura

5. Efectores (Activadores e Inhibidores)


Factores que modifican la actividad enzimática

La velocidad de una reacción catalizada por una enzima depende de:

 La concentración de moléculas de sustrato


(Ecuación de Michaelis-Menten)

 Cantidad de enzima
La V0 es proporcional a la concentración de enzima, al menos en un
determinado rango de concentraciones.

 El pH

 La temperatura

 La presencia de inhibidores
Efecto de la temperatura

Las enzimas poseen una temperatura óptima a la cual la enzima presenta


máxima eficiencia catalítica.
 Existe un intervalo en el cual son estables.

Actividad enzimática

Temperatura (ºC)
Efecto del pH

 pH óptimo de actuación, a valores superiores o inferiores la velocidad disminuye.

 El pH del medio afecta:


 Catálisis
 Unión al sustrato
 Conformación (estructura espacial) de la enzima

Quimotripsina

Pepsina
Actividad enzimática

pH
Inhibición enzimática

Inhibidores: pequeña moléculas químicas o iones que interfieren con las


reacciones ralentizándolas o deteniéndolas

 Importantes para el estudio de:

 Mecanismo de acción enzimática

 Especificidad de sustrato

 Naturaleza del centro activo

 Identificación residuos fundamentales para la catálisis

 Utilidad

 Determinación rutas metabólicas

 Medicina. Antibióticos
Inhibición enzimática

Hay dos tipos de inhibidores enzimáticos:

 Reversibles: Unión no covalente de un inhibidor a la enzima

 Competitiva
 No competitiva

 Acompetitiva

 Irreversibles: Unión covalente del inhibidor al enzima

Elementos naturales, tóxinas específicas, venenos, iones, fármacos


ORDEN DE UNA REACCION Y UNIDADES DE LA CONSTANTE DE VELOCIDAD

una reacción S➔P, la velocidad Vo se puede expresar como :

Desaparicion de sustrato Vo = d[S]/dt o Desaparicion de Producto Vo = d[S]/dt


M•s- 1
Reacciones de primer orden
A➔B, velocidad depende de un solo sustrato V=k[A]

A ↔ B: VA →B = k 1 [A] y VB->A=k_1[B] M•s- 1

equilibrio k1/k-1=[B]/[A] = : keq de la reaccion

Reacciones de segundo orden


intervienen dos sustratos para dar un producto: 2A➔B o A+ B➔C

V= k [A]2 o V= k [A][B]. M- 1 • s- 1•

Reacciones de orden cero


velocidad es independiente de la concentración de sustrato. Puede depender de
otros factores como, por ejemplo, la concentración de catalizador.
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Diagrama de desaparición
· Romero · Yáñez ·de
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Edición
Feduchi

sustrato y aparición de producto


Blasco ·
García-Hoz

en una reacción catalizada

d[ ]
v = dt , t -> 0

eficiencia

afinidad

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Curso
Bioquímica de una
Conceptos reacción
esencialescatalizada con una
. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición
concentración de enzima constante

K1
K2
E+S K-1 ES E + P

UNION DEL SUSTRATO ETAPA CATALITICA

© 2015, Editorial Médica


Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

Relacionar la fórmula de la
velocidad de la reacción con
esta gráfica. ¿Dónde está
aquí representada la
velocidad?

© 2015, Editorial Médica


Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

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Teoría de la acción enzimática

L. Michaelis M. Menten

 En 1913 propusieron una ecuación de velocidad que explica el


comportamiento cinético de las enzimas

K1 K2
E+S ES E + P
K-1
Teoría de la acción enzimática

K1 K2
E+S ES E + P
K-1

 El complejo ES se encuentra en
estado estacionario
Concentración

Bajo condiciones de saturación,


toda la enzima interviene en la
formación del complejo ES

 Cuando toda la enzima se


encuentra en forma de complejo ES,
la velocidad de la reacción es la
Tiempo máxima posible (Vmáx)
Diagrama de V0Conceptos
Bioquímica de reacción frente a. 2ªconcentración
esenciales de sustrato
Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

1. Km »» [S] 2. [S] »» Km
© 2015, Editorial Médica
3. [S] = Km
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN

1. Km »» [S]
2. [S] »» Km
3. [S] = Km
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
Significado de la constante Km

1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES


(en condiciones de equilibrio rápido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato


(en condiciones de equilibrio rápido)

3. Mide la función de fijación (en cond.de equilibrio rápido)

4. Concentración de substrato para la que la velocidad se hace


igual a la mitad de la máxima (s0.5)

5. Se define para una pareja enzima-substrato

6. Se mide en unidades de concentración


Representación directa

v
100
Vmax
80

60
Vmx s
v
40 Km  s

20

s
0
0 20 40 60 80 100

Km
Representación recíproca doble
(Lineweaver - Burk)

0.04

1/v
0.03

1/Vmax
0.02

1 Km 1 1
-1/Km   
0.01 v Vmx s Vmx

0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6

1/s
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
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Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
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Edición

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Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

¿Sería igual de sencillo


conseguir que la enzima
alcanzara la mayor velocidad
si se aumenta la temperatura
de la reacción desde los 20
ºC a los 45 ºC, que si
disminuimos la temperatura
de
reacción de los 70 ºC a los
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Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
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. Mecanismos
Bioquímica Conceptos esenciales . 2ª de las Feduchi
reacciones bisustrato.
· Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
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Ejemplos de medicamentos y su mecanismo
de acción
Medicamento Enzima inhibida Enfermedad tratada

Amburicin® Topoisomerasa 2 Cáncer (Quimioterapia)

Antabuse® Aldehido deshidrogenasa Alcoholismo

Captopril® Enzima de la síntesis de Hipertetension


angiotensina
Digoxin® ATPasa de la bomba K+ Na+ Problemas cardiacos

Lipitor® 3-hidroxo-3-metil-glutaril CoA Hipercolesterolemia

Viagra® Fosfodiesterasa 5 5 Disfunción eréctil

Hycamtin® Topoisomerasa 1 Cancer(Quimioterapia)


Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
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Inhibición reversible competitiva

Inhibidor
Sustrato competitivo

Enzima Enzima

Metanol Formaldehído

Etanol Alcohol DH Acetaldehído

Etilenglicol Ac. Oxálico

La intoxicación con etilenglicol o metanol se trata con etanol


Inhibición reversible competitiva

Quimioterapéuticos: metrotrexato

Agentes antibacterianos: Sulfamidas

 Compiten con el p-amino-benzoico,


necesario para la síntesis de DNA
de bacterias.
Metotrexato

Estatinas

 Inhiben HMG-CoA reductasa,


Tetrahidrofolato
enzima limitante síntesis de
colesterol.
 Inhibe síntesis de DNA

 Compite por la dihidrofolato reductasa


Inhibición reversible no competitiva

Tipranavir PETT2
(inhibidor de la Proteasa) (Inhibidor de la Trascriptasa Inversa)
Inhibición irreversible

 Reaccionan con un grupo químico de la enzima, modificándola


covalentemente.
 Bloquean unión al sustrato

 Inhiben actividad

 Sus efectos dependen del tiempo de actuación del inhibidor.

 Por lo general son altamente tóxicos. Casi todos los inhibidores


enzimáticos irreversibles son sustancias tóxicas (naturales o sintéticas).

 Penicilina inhibe la síntesis de la pared bacteriana

 Aspirina inhibe la síntesis de PG

 Gases nerviosos: diisopropil fluorofosfato (DIFP), inhiben neurotransmisores

 Hg2+, Pb2+ , CN-, As


Inhibición irreversible

 Fármacos antitumorales que actúan como análogos de la citidina


Inhibidores irreversibles del metabolismo del DNA
Regulación de la actividad enzimática

I. Control de la actividad enzimática

II. Regulación por cambios en la concentración de enzima

III. Regulación alostérica

IV. Modificaciones covalentes reversibles

V. Activación de zimógenos

VI. Isoenzimas

 Complejos multienzimáticos
Regulación enzimática

 Las reacciones enzimáticas están organizadas en rutas bioquímicas o metabólicas

A B C D

Z
 En cada ruta el producto de una reacción es el sustrato de la siguiente

 Las rutas deben estar reguladas para:


 Conservar la energía

 Mantener un estado celular ordenado

 Responder a variaciones ambientales

Las enzimas reguladoras catalizan las reacciones más lentas y fijan la


velocidad de la ruta
I.- Control de la enzima reguladora

1.- A nivel de sustrato

Velocidad
[S]
(hasta saturación)
Producto

Formación producto
[ P]
(Inhibición competitiva)

Tiempo

Hexoquinasa

Glucosa Glucosa 6-fosfato


Control de la enzima reguladora

2.- Retroinhibición o inhibición “feed-back”

A B C D E
X

 Inhibición del enzima regulador por el producto final


 Se impide:
 Utilización innecesaria del primer sustrato
 Acumulación del producto final
 Acumulación de intermediarios

3.- Regulación cruzada


 Un producto de una vía activa o inhibe un enzima de los primeros pasos de otra ruta

A B C D

X
X Y Z
Mecanismos de regulación enzimática

A. Regulación por cambios en la cantidad de enzima


i. Síntesis
ii. Degradación

B. Regulación de la eficacia catalítica

no covalente: Enzimas alostéricas


a. Unión de Fosforilación
ligandos ADP-ribosilación,
covalente:
Metilación y Acetilación

b. Rupturas proteolíticas: zimógenos

c. Múltiples formas de la enzima: Isoenzimas, complejos multienzimáticos


A. Cambios en la cantidad de la enzima

 Muchos enzimas reguladores tienen vida media corta y se hayan en


concentraciones muy bajas
I. Aumento o represión de la síntesis a través de regulación génica

Permite control a largo plazo

Carboxiquinasa
Piruvato Oxalacetato X Fosfoenolpiruvato Glucosa

X
promotor

Carboxiquinasa

II. Degradación controlada por proteasas citosólicas; ubiquitina


B.- Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico

a. Unión no covalente a ligandos: ENZIMAS ALOSTÉRICAS

 Control alostérico Alostérico = otro sitio

 Enzimas alostéricas:
 Proteínas con estructura 4aria

 Más de un centro activo y catalítico

 Actividad regulada por moduladores alostéricos, unión no covalente

 Cinéticas sigmoidea

 Cooperatividad
velocidad

[ sustrato ]
B.- Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico

 Control alostérico: ENZIMAS ALOSTÉRICAS


Regulador alostérico: pequeños metabolitos o cofactores que se unen a
sitios distintos del centro activo y modifican la actividad enzimática

 Modulador propio sustrato: homoalosterismo(+)

 Enzimas homotrópicos el sitio modulador y el sitio activo son el mismo

 Modulador molécula distinta a sustrato: heteroalosterismo(+/-)

 Enzimas heterotrópicos el sitio modulador y el sitio activo distintos

Centro Centro Centro Centro


alostérico activo alostérico activo

S R S
B.- Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico

 Control alostérico: ENZIMAS ALOSTÉRICAS

 Enzimas homotrópicos

 Un pequeño incremento de la [S] provoca un gran aumento de Vo

Vmáx
↓Km y ↑
Afinidad
velocidad E poco E muy
eficiente eficiente
[Sustrato]

[ sustrato ]c

 Permiten mantener valores constantes de sus sustratos


B.- Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico

 Control alostérico

 Enzimas heterotrópicos
Al no ser cinética micheliana no se puede usar el término Km, sino K0,5

Modulador alostérico positivo:


aumenta actividad

La unión y transformación
del sustrato es cooperativa

Modulador alostérico negativo:


disminuye actividad
Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico

 Control alostérico

 Enzimas heterotrópicos

Modulador alostérico positivo:


favorece forma R

Modulador alostérico negativo:


favorece forma T
Modelos de cooperatividad

 Simétrico o concertado

Conformación T (tensa)
Conformación R (relajada)

 Asimétrico o secuencial

Conformación T (tensa) Conformación R (relajada)


Conformación intermedia
Regulación de la eficacia catalítica: modificación covalente

 Unión covalente de ligandos


 Ligando aporta grupo funcional que modifica las propiedades de la enzima

 Modificación reversible

 Metilación

S-Adenosil-metionina
Enzima Enzima-CH3

 ADP-ribosilación

NAD
Enzima Enzima-ADP-ribosa
CTX o PTX

 Acetilación

 Modificaciones lipídicas
Regulación de la eficacia catalítica: modificación covalente

 Unión covalente de ligandos


 Fosforilación/desfosforilación

ATP Quinasa ADP


Serina Treonina

Enzima Enzima- P

Fosfatasa
Pi Tirosina

glucógeno (n residuos) + Pi glucógeno (n-1 residuos) + glucosa-1-fosfato


Glucógeno fosforilasa

Fosforilasa quinasa

Glucógeno fosforilasa b Glucógeno fosforilasa-a P


(poco activa) (más activa)
Fosforilasa fosfatasa
Ejemplo de regulación múltiple: glucógeno fosforilasa

Control covalente

Fosforilasa quinasa

Fosfoproteína fosfatasa I
Fosforilasa b Fosforilasa a
Inactiva Activa
(estado T) (estado T)

Control no covalente
Glucosa
Glucosa-6P Cafeina
Glucosa
Cafeina

Fosforilasa b Fosforilasa a
Activa Activa (estado
(estado R) R)
Activación por ruptura proteolítica

Zimógenos o proenzimas (inactivos) Inactiva

Ruptura enlaces peptídicos (cambio conformacional)


ruptura

Enzima activa Activa

 No requiere ATP

 Irreversible sustrato

 Enzimas proteolíticas (proteasas) del estómago y páncreas

 Sistema de coagulación de la sangre


Activación por ruptura proteolítica

 Sistema de coagulación sanguíneo

Estructura del fibrinógeno

Sitio de corte

Unidad globular

Zimógenos

Enzimas activas
Activación por ruptura proteolítica

 Enzimas proteolíticas (proteasas) del estómago y páncreas


H+
Estómago: Pepsinógeno Pepsina

Páncreas:
 Se sintetizan en páncreas (inactivas)

 Se rompen en intestino (activas)

 Después de actuar se degradan

Zimógenos

Enzimas activas
Activación por ruptura proteolítica

Activación quimiotripsinógeno

Quimotripsinógeno
(inactivo)

Tripsin a

-quimiotripsina
(activa)

Quimiotripsina

-quimiotripsina
(activa)
Isoenzimas o isozimas

Diferentes formas estructurales de una enzima que catalizan la misma reacción

 Difieren en sus secuencias de aa, en sus parámetros cinéticos y/o propiedades reguladoras

 Juegan un papel importante en la regulación de procesos metabólicos

 Codificados por diferentes loci

 Ejemplo: Lactato deshidrogenasa Piruvato Lactato (en ausencia de O2)

Dos cadenas H y M Corazón Riñón Cel. rojas Cerebro Leucocitos Músculo Hígado

H4

H3M
H2M2

HM3

M4
Isoenzimas o isozimas

 Aunque catalizan la misma reacción difieren en sus valores de Km para el piruvato

 El piruvato inhibe alostéricamente H4 pero no M4

Músculo Corazón

Glucosa Glucosa

LDH (M4) LDH (H4)


Piruvato Láctico Piruvato Láctico
Km Km

C02 + H20 C02 + H20

Trabajo anaerobio Trabajo aerobio


Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª
ENZIMOLOGIA CLINICA
Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

Capt. 23 Vasudevan
A.- FUNCIONALES B.- NO FUNCIONALES DIAGNOSTICO y
↑↑[SPA] ↓↓[NO SPA] PRONOSTICO
Enz. Coagulación ↑↑[NECROSIS Y ENFERMEDAD]

BIOMARCADORES
1. Lactato deshidrogenasa i. Cualquier dolor en el pecho
2. Creatina quinasa
3. Fosfatasa alcalina ii. Angina inestable
4. Fosfatasa acida
Usados en : iii. ECG sospechosos
5. Antígeno prostético específico
6. Colinesterasa
7. Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa iv. Historia de infarto miocárdico
8. Amilasa y lipasa
9. Enzimas utilizadas como agentes v. Posterior cirugía
terapéutico revascularización

SPA =Secreción Plasmática Activa vi. Pacientes con hipertensión y


disnea
© 2015, Editorial Médica
Biomarcadores cardíacos
a. Síndrome coronario agudo (isquemia miocárdica) i. Detectar Isquemia Cardiaca temprana
ii. Monitorear la progresión de la
b. Falla cardiaca congestiva disfunción condición
ventricular . iii. Para predecir el riesgo de disfunción
cardíaca.

i.- Detección temprana de IAM iii.- Riesgo EC


1. Troponinas cardíacas, Tnl y TnT( S, E) a. Prediccion inicio de la isquemia
2. Creatina cinasa, CKMB ( S, E) b. Cuantifican daño ventricular
3. Mioglobina (S, No E) hsCRP y liproteinas aterogenicas

Marcadores para enfermedades cardiacas (Primeras 6 horas)

i. Creatina cinasa
Marcadores (CKMB)
del infarto del miocardio
Marcador Aparición Pico Duración
ii. Troponina I cardiaca
CK-MB 3-6 hr (TIC)
18-24y hr
troponina
36-72 cardiaca
hr T(TCT).
Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días
iii. Péptido natriurético
LDH 6-12 hr cerebral
24-48 hr(PNC). confiable función ventricular
6-8 días
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
iv. LDH y AST (IAM)
Mioglobina 1-4 hr, no6-7
se hr
utilizan
24 más
hr en la práctica clínica.
CREATINA QUINASA (CQ/CK) VR : ♂ 15-100 U/L y de ♀ 10-80 U/L
Marcador Aparición Pico Duración
isoenzimas
CreatinaCK (Dimero
CK 40KD) Creatina fosfato CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr
lsoenzima Movilidad Origen % serico
Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días
MM (CK3) Mínimo
ATP Músc.
ADP Esque 80% LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días
MB (CK2) Intermedio Corazón 5% AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
BB (CK1) Máximo Cerebro 1% Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr

CK y el ataque al corazón
CK2 (MB) puede no ser i. ↑↑[CK sérico] en IAM 3-6 horas.
detectado, si SE EVALUA ii. Util temprano y ECG ambiguos.
solamente CK TOTAL.
2° pico (otro episodio isquémico.
iii. No ↑↑[CK s] en hemolisis ni ICC CK
ventaja que LDH. Area ∝ Tamaño Infarto

CK y enfermedades musculares
i. ↑↑[CK ] distrofias musculares
(DF)(500-1500 IU/L),
ii. ♀ portadoras DF ligada a X
(heterocigoto), Moderada ↑↑[CK ]
iii. CK TOTAL en DF y MB en IAM
TROPONINAS CARDIACAS (TC1/TCT) No es enzima VR : ♂ U/L y de ♀ U/L
Actualmente confiable detección temprana y monitoreo
i. CTnC(subunidad fijadora de calcio) (CTnl) (subunidad inhibidora actomiosina ATPasa), y CTnT (subunidad
fijadora de tropomiosina).
La troponina I (Tnl) isoforma cardiaca específica
La isoforma cardiaca de CTnT y CTnl (95%) miofibrillas(↑sostenido) y 5% citoplásmica(↑incial).
Marcador Aparición Pico Duración
CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr
Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días
La troponina I ↑↑ primeras 4 hr;
LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días
pico 14-24 hr y permanece 3-5 días.
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
No ↑ lesión muscular; si ↑↑CK2 Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr
lesiones musculares

(TnT) 6 hrs , pico a las 72 horas y


permanece elevado 7-14 días.

↑ troponina cardiaca < percentil 99


diagnóstico de IM riesgo de evento
cardiacoadverso.
MÚSCULO ESQUELÉTICO

• TROPONINA
La troponina se compone de tres subunidades polipeptídicas:
troponina T = se une a la tropomiosina y de esta forma fija
todo el complejo proteico de troponina a la
tropomiosina
TROPONINA troponina I = posee gran afinidad por la actina, a la que se une
0.03 - 0.08 ng/mL y evita su interacción con la miosina
< 10 ug/L

troponina C = fija iones calcio (Ca++)

troponina C

TROPONINA
troponina T

troponina I
• CONTRACCIÓN MUSCULAR

Una vez que se establece el


potencial de acción en la fibra
muscular la onda de
despolarización viaja a lo largo
del sarcolema y a través de
los túbulos-T se propaga con
gran rapidez desde la superficie de
la fibra hasta su interior.

Las moléculas de calcio que son liberadas


al sarcoplasma desde las cisternas terminales
del retículo sarcoplásmico di- funden a las
miofibrillas adya- centes y se fijan fuertemente
a las subunidades proteicas de troponina
C ocasionando un cambio conformacional en
el complejo troponina-tropomiosina con el
consiguiente desplaza- miento de la
tropomiosina y exposición de los sitios de unión a
miosina del filamento de actina.

Desplazamiento del complejo troponina-


tropomiosina y exposición del sitio de unión a
miosina
Troponinas Cardíacas (cTn)
cTnI VR 0.03 - 0.08 ng/Ml
< 10 ug/L
 Varios ensayos disponibles. Varios fabricantes
absolutamente cardio-específica

• anticuerpos mono ó policlonales contra distintos


determinantes antigénicos: valor discriminativo
> 0.10 ng/mL = dañoymiocárdico menor y temporal

sensibilidad variable. Digestión proteolítica por enzimas lisosómicas, sin


ruptura de la membrana.

 > 1.00 ng/mL = daño miocárdico mayor

Necrosis: ruptura de la membrana celular del


cardiocito.
absolutamente cardio-
específica

cTnT   Empieza a elevarse: 4 - 6h


 ValorInternacional.
Patente máximo: 12 - 20h Ensayos de un solo fabricante.

VR 0- 0.1 ug/L  Se normaliza: 10 – 14d
3º generación: 2 anticuerpos monoclonales específicos
 Resultado cualitativo: (+) / (-)
cardíacos.
• Reaccionan conlaSemolécula de cTnTdializados
eleva en pacientes expresada
(poren tejido
regeneración
cardíaco adulto. muscular) y en ACVs.

• No reaccionan con las isoformas cTnT expresadas en


LACTATO DESHIDROGENASA (LDH) VR : ♀ ♂ 100-200 U/L
Eritc = 100 veces que plasmas = Hemolisis ↑↑ (LDH) y en Ejerc exten .
Marcador Aparición Pico Duración
LDH y IAM CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr
↑↑[LDHTOTAL ] y ↑↑[H4] 5-10 veces. Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días
Area ∝ Tamaño Infarto LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr

Diagnósticos diferenciales
LDH anemias hemolíticas, daño hepatocelular,
distrofia muscular, carcinomas, leucemias y necrosis
∴ , isoenzimas es de mayor significado.
Valor diagnostico limitado( es inespecífica)
.LDH-2 (H3M1) >LDH-1 (H4);

M4
Transaminasas com marcadores de daño hepático
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina
Transa- Gln Sintetasa MAYORIA
minasas -cetoácido ADP+ Pi+ H2O DE
TEJIDOS
NH4+ Gln Sintetasa

Glutamato
Glutaminas a CICLO DE URE
LA UREA
NH4+ Glutamina A
Glutamato
Glutamato DH
NH4+ -Cetoglutarato
Piruvato
(INT.) Transaminasa Asp
HIGADO
Glutamina Alanina
Transa-
minasas OAA
GLUCOSA +
AA Glutamato

Bacterias

GPT / ALT
Ala + α-cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Más específica de daño hepático

GOT / AST
Asp + α-cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
Tema 26
15
ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (AST) VR : 8 a 20 U/L.
 Contenido tisular de AST, de > a <
 Localización: mitocondrial y citoplasmática
 Acción: cataliza la transferencia reversible del grupo  Músculo cardíaco
amino desde el aspartato al alfa-cetoglutarato.  Hígado, Músculo esquelético
Se eleva en:  Riñón, Cerebro, Páncreas
 Enfermedades hepáticas,Necrosis miocárdica  Bazo, Pulmón, Eritrocitos
 Necrosis del músculo esquelético
 Distrofia muscular y dermatomiositis
 Pancreatitis aguda,Embolia pulmonar
 Necrosis renal y cerebral,Hemólisis
 Ejercicio físico intenso
 opiáceos, salicilatos o eritromicina

 Empieza a elevarse: 6 - 8h
 Valor máximo: 18 - 24h
 Se normaliza: 4 – 5d
 No ventajas sobre la CPK y la LDH:

 No es específica del miocardio


 No aparece precosmente
 Se debe abandonar su uso
Transaminasas com marcadores de daño hepático
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina
Transa- Gln Sintetasa MAYORIA
minasas -cetoácido ADP+ Pi+ H2O DE
TEJIDOS
NH4+ Gln Sintetasa

Glutamato
Glutaminas a CICLO DE URE
LA UREA
NH4+ Glutamina A
Glutamato
Glutamato DH
NH4+ -Cetoglutarato
Piruvato
(INT.) Transaminasa Asp
HIGADO
Glutamina Alanina
Transa-
minasas OAA
GLUCOSA +
AA Glutamato

Bacterias

GPT / ALT
Ala + α-cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Más específica de daño hepático

GOT / AST
Asp + α-cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
Tema 26
15
PÉPTIDO NATRIURÉTICO CEREBRAL (PNC)

1.- péptido natriurético atrial (ANP) atrio cardiaco.

2.- péptido natriurético cerebral(BNP), cerebro y ventrículos cardiacos < 100 pg/ml
BNP-C activo (32 aa)y péptido inactivo (proBNP 1-76) Mejor marcador

3.- péptido natriurético tipo C (CNP). no es claro.

BNP activo es secretado por estiramiento excesivo cardiomiocitos retención


excesiva de sal y agua.
insuficiencia cardiaca congestiva ↑↑[ANP y BNP].
↑↑[ BNP]. Baja supervivencia
.
Perfiles enzimáticos en las enfermedades hepáticas

i. ALT ♂ 13-35 U/L y d ♀ en 10-30 U/L. HEPATIS TOXICA O VIRAL(300 a 1000 U/L).
ii. ↑[ALT y AST] enfermedad hepática, pero ALT>AST.(antes que la Ictericia)
iii. ↑[ALT ]moderado (50-100 U/L) en crónicas cirrosis, hepatitis C y esteatohepatitis
no alcohólica.

FOSFATASA ALCALINA (ALP) VR de 40-125 U/L(niños es elevado)

i. ALP no específica que hidroliza compuestos alifáticos, aromáticos o heterocíclicos.


El pH 9 a 10. Se activa Mg y Mn ,Zn.
ii. Osteoblastos(Ectoenzima) calcificación y transporte en hígado, riñon y mucosa intestinal.
iii. El (2-3 veces más) hepatitis infecciosas, hepatites alcohólica o carcinoma hepatocelular
iv. (10-12 veces por (ictérica obstructiva) La colestasis intrahepática infecciosa ) o por
drogas (clorpromazina).
v .(10-25 veces por arriba de los límites altos) enfermedad de Paget (osteítis deformante),
raquitismo, osteomalacia, osteoblastoma, carcinoma metastásico oseo e hiperparatiroidismo.

Nucleótido fosfatasa (NTP) VR 2-10 Ul/L

1. nucleotidasa 5'. Hidroliza nucleótidos 5' pH 7.5 Ni inhiben NTP pero no a ALP,

2. ectoenzima (enzima presente en la membrana celular).

3. Aumentada en hepatitis y muy eenn obstrucción biliar . No se altera en enfermedades oseas


Gama glutamil transferasa (GGT) VR 2-10 Ul/L

1. síntesis de glutatión (capítulo 15). GGT tiene11 isoenzimas. hígado, riñon,


páncreas, células intestinales y en la próstata.
2. Moderadamente elevada en hepatitis infecciosas y cánceres prostéticos.
3. La GGT clínicamente importante debido a su sensibilidad en
alcoholismo
Antígeno prostático especifico (PSA) VN 1-5 microgramos/L
1. epitelio secretorio glándula prostética. (licuefacción del coágulo seminal.
2. Es una serin proteasa, glucoproteína de 32 kD.
En sangre se fija a la macroglobulina alfa-2 y a
la alfa-1-antitripsina: también se encuentra una
pequeña fracción de la forma libre.
3. Arriba 10 microgramos/L cáncer prostático.

Colinesterasa (ChE)
i. Acetil colinesterasa actya en la acetilcolina (Term. nerviosas y GR
ii. ChE en GR ∝ [reticulocitos.]
AMILASA VR 50-120 Ul/L
1. almidón a maltosa. ( Ca + Cl) páncreas y en glándulas salivales.
2. 1,000 veces pancreatitis aguda. Pico 5-12 horas , normalidad 2-4 días
3. Orina < a 375 U/L aumenta en pancreatitis aguda.y permanece 7-10 días.

LIPASA (Secrecion pancreática)


Hidroliza los triacilglicéridos a monoacilglicéridos beta y ácidos grasos.
Alto pancreatitis aguda y persiste 7-14 días. (mas que amilasa.)
La lipasa no aumenta en las paperas.
moderadamente en carcinomade páncreas, enfermedades biliares y úlceras
pépticas perforantes.
Aldolasa (ALD) 1.5-7 U/L
tetramérica con subunidades A y B; 5 isoenzimas.
Aumentada distrofia muscular progresiva, poliomielitis, miastenia grave y esclerosis múltiple.
Indice temprano enfermedades musculares debilitantes.

Ceruloplasmina VR 25-50 mg/d


ferroxidasa
proteína de fase aguda, se eleva en enfermedades inflamatorias, enfermedades
del colágeno, tumores cancerosos y en embarazo.
< 20 mg/dl, es patognomónico de degeneración hepatolenticular de Wilson,
(toxicidad Cu
Uso terapéutico de las enzimas
Enzima Aplicación terapéutica

1.Asparaginasa Leucemia linfoblástica aguda


2.Estreptoquinasa lisis de coágulos intravasculares
3.Uroquinasa =
4.Estreptodornasa DNAsa; aplicada localmente
5.Pancreatina (tripsina y lipasa) Insuficiencia pancreática;
6. Papaína Antiinflamatorio
6.Alfa-1-antitripsina Deficiencia de AAT; enfisema

Tabla 23.5. Enzimas en otros líquidos corporales


Enzima Sign ificado clínico

Adenosin Elevado en la efusión de la


deaminasa en tuberculosis pleural, pero no en
fluido pleural la efusión de tumores malignos.

Los niveles elevados indican


LDH enasa en la presencia de tumor maligno.
CSF, fluido Pero no es diagnóstico ya que la
pleural, fluido enzima no es específica de un
ascítico tejido.