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Human Respiratory Syncytial


Virus

Presentado por: Edyan E. De la cruz C.


Programa de Biología
Semillero de Inmunología y Biología Celular
Universidad del Atlántico
Periodo II-2017
Contenido

Historia ……………………………………… 4
5
Agente infeccioso…………………………… 6
- Clasificación……………………………… 6
- Virión…………………………………….. 9
- RNA………………………………………. 11
- Proteínas………………………………… 22
- Ciclo replicativo………............................. 25
- Genética y Genética inversa…………….. 26
- Propagación in vitro 27
- Infección de animales experimentales … 28
- Subgrupos Antigénicos y 29
diversidad……. 32
Patogénesis y Patología…………………….. 2
- Antígenos...……………………………… 33
- Inmunidad Innata e inflamación….…….. 35
- Anticuerpos…...…………………………. 36
- Linfocitos T.……………………………… 38
- Evasión viral e inhibición de la inmunidad
del huésped……………………………… 39
Epidemiología……………………………….. 40
- Infección en infantes y niños jóvenes…... 40
- Infección en Adultos ……………………. 42
- Otras población de alto Riesgo…………. 43
- Epidemia 45
Características clínicas………………...……. 47

3
Diagnostico …………………………………. 48
- Diagnostico diferencial………………….. 48
- Diagnostico de laboratorio……………… 49
Tratamiento y Prevención………………….. 50
- Tratamiento……………………………… 50
- Intervenciones sintomáticas y cuidado
de apoyo…………………………………. 51
- Intervención viral………………………... 52
- Prevención………………………......…… 53
1. Infección control………………………… 53
2. Inmunoprofilaxis pasiva contra HRSV….. 54
3. Vacunas………………………………...... 55
Perspectiva…………………………………... 57
Referencias Bibliográficas………………….. 55
4
5 Historia
6 Agente infeccioso

Clasificación taxonómica

Tomado de: https://talk.ictvonline.org/


7 Virión

• La forma irregular esférica


• La forma larga filamentosa
• Nucleocápside en forma de espiga
• La proteína M de la matriz
• Proteínas transmembranales
homoolimericas
• 4 proteínas asociadas a la
nucleocápside

Tomado de: http://ruleof6ix.fieldofscience.com/2012/04/respiratory-syncytial-virus-


infection.html
8 Estructura del Virión

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology


9 RNA

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology

• Posee entre 15191-15226 pb


• El ARN Carece de cola poli-A
• “Forma apretada” ofrece protección
• Diez genes (3´NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-L 5´)
• Transcripción en mRNA independientes ( once proteínas)
• Inicio altamente conservado, y una finalización moderadamente conservada
• Solapamiento sobre la sección 5´
10 Semejanza entre los genes del HRSV y otros virus

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology


11
Proteínas: proteínas de las envoltura
Glicoproteína de Fusión F

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology

• Alta similaridad con proteínas de la misma familia del virus


• Proteína transmembranal tipo I
• Capacidad para formar sincitios
• Interacción con la nucleolina
• Dos sitios de clivaje
• Poca termoestabilidad
12 Estructura tridimensional

Tomado de: Structure of RSV fusion glycoprotein trimer bound to a prefusion-specific neutralizing antibody
13 Glicoproteína de reconocimiento G

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology

• Diferencia significativa con glicoproteínas de acople de otros virus de la misma familia


• Proteína transmembranal tipo II
• Posee una versión secretada
• Tiene receptores tipo mucina
• 24-25 sitios de O- glicosilación
• Interactúa con GAGs
14 Proteína SH (Small Hydrifobic)

• Tiene un sitio de Tiene una forma


Tomado de: Respiratory syncytial virus and
metapneumovirus. Fields virology truncada
• Se organiza de forma pentamérica
• Tiene propiedades de viroporina
• Juega un rol importante en la
formación de viriones
• Forman canales iónicos selectivos
• Reduce la apoptosis de manera no
significativa

Tomado de: Inhibition of the human respiratory syncytial virus small


hydrophobic protein and structural variations in a bicelle environment
15 Estructura tridimensional de la proteína SH

Tomado de: Structural and Functional Aspects of Viroporins in Human Respiratory Viruses: Respiratory Syncytial Virus and Coronaviruses
16 Proteína de la Matriz (M)

• Proteína no glicosilada
• Ayuda a organizar los componentes
virales en la membrana plasmática
• Silencia el proceso de replicación
viral ( no check)
• Área cargada positivamente entre
dos dominios y sitios de unión

Tomado de: Dimerization of matrix protein is required for budding


of respiratory syncytial virus
17 Proteína de la nucleocápside:
Proteína N

• Se une a lo largo del genoma y el antigenoma del


virus
• Confiere capacidad de resistencia a RNAsas y
“detectores virales” ( RIG-I, MDA5, PKR)
• Su bien funcionamiento depende de la presencia
de la proteína P
18 Proteína P

• Su forma estable es un homotetrámero


• Interactúa con la proteína N
• Evita la formación de agregados de proteína N y acople a RNA no virales
• Varios sitios de fosforilación
• Cofactor para la ARN polimerasa
• Juega un rol en la disociación de M
• Participa en las interacciones de L y M2 con la nucleocápside
19 Proteínas M2-1 y L

Proteína M2-1 Proteína L


• Esencial para la progresión de la • Posee motivos para la polimerasa
transcripción • Mutaciones puntuales (1049 y 1169)
• Puede estar presenta en forma puede afectar el reconocimiento de
fosforilada y no fosforilada señales de terminación
• Contiene un motivo de anillo de zinc
• Puede formar homotetrámeros
20 Proteína M2-2

• Participa de manera desconocida en


la transcripción de las proteínas
• Afecta la concentración de ARNm,
genomas y antigenomas
• el aumento de la concentración
puede ser parcialmente inhibitoria
21 Proteínas no estructurales:
NS1 y NS2

• Ayudan a inhibir regulan la respuesta celular


• El monómero de NS2 tiene una vida media corta
• Intervienen con las señalización de los interferones (IFN) e interleuquinas (IL)
• En altas concentraciones disminuyen la activación de NF-kB y AKT
• Regula negativamente la síntesis de ARN viral
22 Ciclo replicativo

• La infección es favorecida por GAGs


• Desconocimiento de proteínas que participan en el reconocimiento
• Depende posiblemente de dos eventos
• La entrada del genoma se da por Fusión de membranas
• El crecimiento puede ser en células enucleadas
• En células polarizadas la gemación ocurre en la región apical
• La expresión de las proteínas F,M,N y P Induce la formación de filamentos virales
23
Esquema general del proceso de acople y
fusión de membrana

Tomado de: EGFR interacts with the fusion protein of respiratory syncytial virus strain 2-20 and mediates infection and mucin expression
24 Ciclo de vida del virus Sincitial respiratorio

Tomado de: Pathogen recognition receptor crosstalk in respiratory syncytial virus sensing: a host and
cell type perspective
25 Propagación in vitro

• Preferencia por líneas celulares


inmortalizadas (HeLa, Hep-2)
• Su titulación se determina
normalmente por PFU
• Presenta dificultad el momento de
tomar muestras debido a fallas en el
proceso de gemación
• Alta predisposición a ser
contaminada
• Es recomendables emplear filtros de
3,0 µm en vez de 0,45mm
Tomado de: https://es.slideshare.net/cbejarl/autoinmunidad-
anti-nucleares-por-inmunofluorescencia
26 Genética y genética inversa

• Altamente mutagénico
• Se pueden dar eventos de recombinación no
homologa
• Se pueden obtener genomas completo con
cDNA mediante transcripción inversa
• Se puede obtener muestras de este virus
mediante transfección de cDNA, para ello son
fundamentales las proteínas N, P, L y M2-1
27 Infección de animales experimentales

• Se emplea infección intranasal


• El mejor modelo animal para aplicar estudios son los chimpancés
• En roedores se observa perdida de peso, cambios en la función pulmonar y
cambio histológicos asociados a eventos patológicos
• El mejor roedor para experimentación es “cotton rat”, seguido de la cepa
BALB/c
28 Subgrupos antigénicos y diversidad

• Único grupo serotipo y dos subgrupos (A y B)


• Poca diferencia reciproca en neutralización por suero convaleciente
• La proteína F presenta mejor respuesta ante las vacunas virales
• Similaridad genética entre los dos subgrupos es cercana a 80%
• Divergencia evolutiva hace aproximadamente 350 años
• Variación entre las mismas proteínas el mismo subgrupo
• La glicoproteína G es mas tolerante a las mutaciones que la glicoproteína F
29 Patogénesis y patología

• Presencia de antígenos en filamentos superficiales (RhoA)


• Cuerpos de inclusión
• Los infantes como focos contagioso
• Potencial infeccioso
• No latencia (controversia) pero alta persistencia ( hasta 100 días)
• Preferencia por células ciliadas
• Tropismo por vías aéreas y tejido pulmonar
• Retardo de apoptosis en células infectadas
• Replicación y virulencia homogénea (¿excepción Subgrupo A?)
• Sintomatología en varios niveles de expresión
• Secuelas en infantes y neonatos
• Correlación entre carga viral y severidad (Aun por definir)
• Sistema inmune juega un rol importante
Corte histológico

Tomado de: https://library.med.utah.edu/WebPath/LUNGHTML/LUNG158.html

30
31 Esquema de la aparición de la sintomatología

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology


32 Interacciones entre el VSR y el sistema inmune

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology


33
Respuesta Inmune:
Antígenos

• Solo se neutralizan las glicoproteínas F y G


• Neutralización de F as inmunogénico y protector
• Epítopes de F dependiente de la conformación
• MAbs para G no son dependientes de la conformación y específicos por cepa
• Reconocimiento de G por parte de Ig-2
• Estimula la memoria de CD8 y CTL
34 Interacción entre el VSRH y el huésped

Tomado de: Infantile respiratory syncytial virus and human rhinovirus infections:
respective role in inception and persistence of wheezing
35 Inmunidad Innata e inflamación

• Las barreras físicas son las primera línea de defensa


• Proteínas surfactantes (SP) juegan un papel importante
• TLR (4 , 2/6) de leucocitos responden ante la presencia del virus
• Es reconocido por TLR 3 de células epiteliales
• La sobre-estimulación de TLR 3 y 4 Puede contribuir a la patogénesis
• Altera significativamente el perfil de transcripción de la célula
• Exposición al virus activa una gran cantidad de citocinas inflamatorias
• Alta actividad de neutrófilos
• La respuesta inmune aumenta la patogenicidad
• IFN I y III están relacionado con la restricción de la replicación viral
• HRSV puede ser particularmente eficaz en la inhibición del huésped IFN
36 Anticuerpos

• Se observa una disminución Ig A durante la infección


• Anticuerpos son de corta duración
• Necesita una fuerte inmunización pasiva para obtener una respuesta eficiente
• Los neonatos que han recibido una carga mayor de Ig G por parte de la madre,
tiene una mayor probabilidad a responder de una manera eficiente ante a
infección del HRSV
• HRSV puede inducir a la producción de Ig E la cual en esta producción es
promovida por Th1, Il13 e Il4
• Entre mayor sea la edad la respuesta de los anticuerpos suele ser más robusta
• La eficacia de los anticuerpos y los efectos de neutralización al parecer estas
relacionado con la edad
Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology
37
38 Linfocitos T

• Los inmunosuprimidos e inmunocomprometidos pueden padecer reincidencia severa de


la enfermedad
• Los linfocitos T CD 4+ y los T CD 8 + son esenciales para responder adecuadamente a una
infección primaria
• Concentraciones de T CD 8+ no están asociadas a la severidad de la enfermedad
• Las células T CD8 + pueden reducir la inflamación inducida por virus a través de la
secreción de IL-10
39 Inhibición viral y evasión del sistema inmune

• Puede hacer eventos reinfecciosos sin haber cambios significativos en los


antígenos
• Inhibe inmunidad protectora
• Además de los procesos inhibitorios antes mencionados también inhiben a IFN
II
• el dominio central conservado de G reduce la activación de TLR2, TLR4 y TLR9
en monocitos humanos
• la expresión de NS1 se asoció con un cambio hacia Polarización Th2,
polarización Th17 reducida y activación reducida de CD103
• HRSV también puede suprimir las respuestas proliferativas de células T in vitro
mediante contacto directo mediado por la proteína F
• Versión secretada de G sirve de señuelo
40
Epidemiología:
Infección en infantes y niños jóvenes

• Es la primera causa más importante a nivel


mundial de LRI en infantes
• En estados unidos es el mayor causante de
casos de neumonía y bronquiolitis
• Existen una gran cantidad de factores que
favorecen la adquisición y desarrollo de la
enfermedad
• La mortalidad es considerablemente elevada
en infantes infectados que tengan
cardiopatías
• Las minorías étnicas (indígenas y nativos de Tomado de: Respiratory syncytial virus infection and
bronchiolitis
Alaska) padecen un mayor índice de
afectación
• Los polimorfismos presentes en ciertos genes
(favorecen la incidencia o la severidad de la
41
Variación de los casos de HRSV en el hospital Johns Hopkins entre los años 1993-1996

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology


42 Infección en adultos

• Los trabajadores en las áreas de salud son propensos a infecciones


• Existe reincidencia de la enfermedad en personas expuestas a las condiciones
propicias para la propagación del virus
• A nivel mundial es el segundo agente infeccioso más importante después de la
influenza en la población adulta
• Posee bajos índices de mortalidad en jóvenes adultos sanos
• La población adulta es la que presenta un mayor índice de mortalidad en países
prósperos
43 Otras poblaciones de alto riesgo

• Los pacientes inmunodeprimidos,


inmunocomprometidos y con cardiopatías
tienen un índice mayor de mortalidad
• La severidad de la enfermedad está
asociada al tipo de cardiopatía y/o
inmunosupresión
• Pueden causar LRI graves en pacientes con
trasplantes de pulmón
• La relación entre el VIH y el HRSV se ve
limitada por las condiciones Tomado de: https://www.saludactual.cl/geriatria
socioeconómicas y ambientales del país en
cuestión
44
Variación de los casos de HRSV en el hospital Jhons Hopkins entre los años 1998-2001

Tomado de: Respiratory syncytial virus and metapneumovirus. Fields virology


45 Epidemias

• Los climas templados favorecen la prevalencia de la enfermedad (temporadas


den 4 y cinco meses)
• Pese a la prevalencia en ciertos climas y condiciones ambientales los eventos
infecciosos se pueden presentar de manera continua (disminuye la incidencia)
• Altamente infeccioso y se contagia por contacto
• Áreas comunes favorecen la diseminación del virus
• Una alta incidencia de infección nosocomial
• Pueden circundar varias cepas y/o genotipos durante la misma temporada
• Unas cepas parecen predominar sobre las otras
• La cepa BA (subgrupo B) empezó como un brote y se disemino rápidamente a
lo largo de los continentes
46

Ubicación de los 36 estudios de la carga global de enfermedades, lesiones y factores de riesgo de las regiones

Tomado de: Global burden of acute lower respiratory infections due to


respiratory syncytial virus in young children: a systematic review and meta-
analysis
47 Características clínicas

• Es frecuente encontrar el virus en niños entre las seis semanas y nueve meses de edad
• Entre el 25 y 40 % de los casos las áreas próximas a la laringe se afectadas
• Las enfermedades respiratorias y la neumonía son las principales manifestaciones de la
enfermedad
• En aquellos bebés en quienes se desarrolla LRI, hay una fase prodrómica de la rinorrea a
menudo acompañada de una disminución en apetito
• En casos severos las manifestaciones clínicas van desde la bronquiolitis o una
exacerbación de asma a una neumonía grave (inclusive fallos respiratorios)
• En casos más severos, la tos y sibilancias progresan y el niño se vuelve disneico
• puede generar anomalías en la función pulmonarNo está claro si la infección con HRSV)
causa la función pulmonar anormal posterior, o si las anomalías observadas existían
antes de la infección y de hecho puede haber contribuido a la enfermedad
48 Diagnosis:
Diagnosis diferencial

Tomado de: www.pharmacytimes.com/publications/health-system-


edition/2012/november2012/respiratory-syncytial-virus
49 Diagnosis de laboratorio

• La falta de equipos de detentación en


hospitales dificulta el diagnóstico de la
enfermedad
• El uso de cultivos celulares es el método
más convencional pero el más
ineficiente
• El diagnóstico más rápido se puede
hacer mediante la detección de
antígeno viral en hisopos o lavados
nasales.
• Uso de DFA, EIA, RT-PCR y ELISA son los
métodos más eficientes al momento de Tomado de: www.thermofisher.com
detectar eficientemente la presencia del
virus
50 Tratamiento y Prevención:
Tratamiento

• Tratamiento ambulatorio en infecciones leves


• Dificultad respiratoria grave, hipoxia y deshidratación se encuentran entre las
indicaciones de hospitalización
• La Academia Estadounidense de Pediatría (AAP) ha emitido basado en evidencia
recomendaciones para el diagnóstico y la gestión de la bronquiolitis
51 Intervenciones sintomáticas y cuidados de apoyo

• Se recomienda asistencia en la eliminación mecánica de secreciones, adecuado


posicionamiento del infante, administración de oxígeno humidificado, líquidos
intravenosos y, en los casos más severos, respiratorios asistencia con ventilación
mecánica
• Las pautas actuales de AAP recomiendan el uso de oxígeno suplementario si la
saturación de oxihemoglobina (SpO2) cae por debajo del 90%
• El medicamento montelukast puede arrojar resultados aceptables, estos se emplean
para prevenir episodios de sibilancia, este fármaco es usado cuando hay elevaciones de
cysteinyl leukotrienes
• Fármacos utilizados para tratar la constricción del músculo liso de las vías respiratorias
reversibles en el asma también se han usado para tratar la infección por HRSV
• Se recomienda el uso de bronquidilatadores siempre y cuando se evalué la efectividad
de este en el paciente
52 Intervención antiviral

• La Ribavirina muestra una fuerte actividad ante la infección del HRSV


• La enfermedad de HRSV en bebés pequeños se puede reducir mediante
profilaxis con anticuerpos neutralizantes de HRSV (palivizumab MAb HRSV F y el
más potente motavizumab, suministrados vía intravenosa)
• Los medicamentos antivirales van dirigidos a las proteínas F, G, N o L (aún en
fase I, y pocos en fase II)
• Actualmente se están aplicando medicamentos de manera combinada para
evaluar su efectividad
53
Prevención:
Infección control

• Lavado de manos
• evitar auto inoculación de la mucosa nasal y conjuntival
Para personales en el área de la salud y encargados de los cuidados ambulatorios:
• Uso de bata
• Lavado de manos
• Vigilancia activa de la infección
• Limitar las visitas durante las temporadas de infección del virus
• Uso de guantes
54 Inmunoprofilaxis pasiva contra HRSV

• los anticuerpos séricos neutralizantes de HRSV son otra alternativa para responder
antes las infecciones
• RSV Inmune Globulina intravenosa (RSV-IGIV; RespiGamTM, MedImmune) fue durante
un tiempo una solución alternativa
• RSV-IGIV (RespiGamTM) ha sido reemplazado por el desarrollo de MAb palivizumab
• alizumab (SynagisTM; MedImmune) es un HRSV neutralizante MAb dirigido contra la
glicoproteína F que fue licenciado en 1998
• Otro enfoques han tratado de desarrollar MAb neutralizantes para HRSV utilizando
bibliotecas de presentación de fagos recombinatoriales, o de bibliotecas de células B
transformadas
55 Vacunas

• Existe una necesidad de una vacuna HRSV con énfasis en la población infantil
• década de los sesenta se desarrolló FI-RSV
• el FI-RSV sobre estimulo la Th2 de CD4 + Células T
• Se ha observado mejoras en experimentos con animales inmunizados con
glicoproteínas F y G
• El uso de vectores virales y o ADN que expresan antígenos al parecer no presentan
inmunidad en neonatos e infantes
• Estudios en animales experimentales, incluidos los chimpancés mostró que la vía de
administración intranasal es sorprendentemente inmunogénico y altamente protector
• Una muestra llamada cpts248 / 404 fue bien tolerado y inmunogénico en un grupo de
mayor edad, sin embargo, no mostraba eficacia en infante y neonatos
• la única vacuna de subunidad de HRSV actualmente siendo evaluado en ensayos
clínicos es una vacuna de partículas de proteína F desarrollado por Novavax
Tomado de: https://seekingalpha.com/article/1642252-novavax-big-pharma-wants-rsv-bad
56
57 Perspectiva

• Solo se conocen aspectos generales del virus sincital respiratorio


• Es necesario aclarar mecanismos moleculares, respuesta inmune del huésped e
importancia biológica viral
• Prioridad en neonatos e infantes
• No se ha esclarecido las secuelas de infecciones a edades tempranas
• Alta capacidad mutagénico del virus hace necesaria constante revisión del virus
58 Referencias Bibliográficas

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