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Efecto pH sobre Velocidad de

reacción enzimática
Los sitios activos están formados por enlaces ionizables

Deben encontrarse en la adecuada forma iónica para


mantener la conformación del centro activo

Los sustratos contienen formas ionizables y sólo una forma


iónica del sustrato puede enlazar a la enzima

El efecto del pH puede verse en curvas de pH vs


Velocidad pero son incompletos o dan información
inexacta

Habría que determinar porqué la velocidad disminuye a


los lados de la velocidad máxima alcanzada
¿?

Vm Vm
Disminución de pH

Formación de especies iónicas inadcuadas

Desnaturalización enzimática
Considerar pre incubación para cada valor
de pH a ser testeado

Tiempo de preincubación equivalente al ensayo total

Formación de
especies iónicas
inadecuadas

Proceso de
desnaturalización En este caso una variación
De pH entre 5 a 8 no tiene
5 8 efecto irreversible sobre la
actividad de la enzima
Efecto pH sobre Velocidad de
reacción enzimática
La curva ideal que refleja una campana dispone de
dos componentes que representan las curvas de
disociación de al menos dos grupos
significativos en la catálisis

V V

pH pH
V
pH óptimo

Residuo
B A Glu
+ -

Residuo -
+
His

pH

La composición de los dos efectos refleja la curva de pH


EFECTO DE PREINCUBACION ANTES DE UNIR E Y S
Efecto [E] sobre Velocidad de
reacción enzimática
La [E] es un factor significativo porque a muy bajas []
puede disociarse en oligómeros o monómeros menos
estables

Las [E] a nivel intracelular oscilan entre 1 x 10-12 a 1x


10 -7 M

La velocidad de reacción es proporcional a la [E], esta


relación puede utilizarse para cuantificar la
concentración de E presente

El efecto es linear siempre que se midan velocidades


inciiales verdaderas en un período corto de tiempo
Efecto de [E] sobre velocidad de reacción
A una [S] fija
> [E3]
[E3]
[E3] > [E2] > [E1]
[E2]

[E1]

to t1 t2

Una [E] > E3 no tendrá respuesta linear no para t1


Efecto de [E] sobre velocidad de reacción
A una [S] fija

V = Vm . [ S ]
Km + [ S ]

V = Kp.[Et] . [ S ]
Km + [ S ]

Dividiendo numerador y denominador entre [S]

V = Kp . [Et] Relación de
Km + 1 Proporcionalidad
S Directa V y [E]