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Biogenic synthesis of silver nanopar ticles from white rot

fungi: Their characterization and antibacterial studies
INTEGRANTES: JULIANA OSORIO ECHAVARRIA
CURSO BIOTECNOLOGÍA GENERAL. 2018-1

antibacterial activity . characterization.Keywords: White rot fungi. silver nanoparticles.

esta situación está impulsando resistencia) insta a nuevos fármacos la búsqueda de nuevos agentes ⟶Entrampadas y/o materiales para combatir antibacterianos ⟶Encapsuladas microorganismos patógenos Las AgNPs pueden internalizarse Baja probabilidad del desarrollo de resistencia generando daños por estrés oxidativo. Aproximadamente el 50% de los pacientes hospitalizados padecen Nanopartículas de plata (AgNPs) anualmente infección por bacterias resistentes a los medicamentos Las nanopartículas de plata (AgNPs) se definen como partículas coloidales de plata sólidas con un rango de tamaño de 1 a 100 nm. produciendo acumulación de plata (Ag) en el interior de la célula. catálisis. así como a la pared celular bacteriana. que se pueden usar en las áreas de La producción y el uso indebido de antibióticos ha medicina. sensores ópticos y bactericidas contribuido a la aparición de múltiples organismos infecciosos resistentes a los medicamentos Aplicaciones biomédicas El desarrollo de microorganismos Esto ha resultado en infecciones resistentes a los antibióticos comunes graves debilitantes e incluso (debido a sus mecanismos de potencialmente mortales. por lo ⟶Disueltas tanto. proteínas. Los iones de plata causan daño al ADN bacteriano. a enzimas. Las nanopartículas de plata tienen la capacidad de inhibir directamente el crecimiento bacteriano mediante el intraciclado con la pared celular y dañando gradualmente las respuestas metabólicas . por parte de los microorganismos.

hongos y plantas Los microorganismos metabolizan los metales como parte de su alimento y poseen un gran poder enzimático para reducir iones Proteínas extracelulares Ácidos orgánicos Metabolitos .Nuevo método síntesis: organismos Procesos económicos y sostenibles eucariotas y procariotas con el medio ambiente Bacterias.

Objetivo de la investigación. utilizando un método de biosíntesis extracelular ecológico (producción a partir de hongos de pudrición blanca de la madera) . caracterización y estudios antibacterianos de nanopartículas de plata (AgNP). En este trabajo. la investigación se centró en la producción.

1 Cycle sequencing kit on ABI método de difusión de pozos de agar. Sintesis AgNPs Colecta de cuerpos fructíferos de hongos (Telangana. METODOLOGIA. Control negativo que 3730xl GeneticAnalyzer) solo contiene solución →BLAST (base de datos de AgNO3 NCBI)) . India) → Purificación (Recolección de 55 muestras) Medio de cultivo: glucosa (10 g/L) y Sobrenadante extracto de malta (5 g/L). agitación a 200 rpm y 32°C por 5 días Solución de AgNO3 (1M) Screening de los hongos para la síntesis de nanopartículas Incubación a 200 rpm en oscuridad a 32°C • Identificación morfológica Los cultivos que han mostrado cambios de color macroscópica • Identificación molecular se analizaron para determinar la actividad (18S rARN → PCR (ITS1 antimicrobiana utilizando diversas bacterias and ITS4 primers using Gram-positivas y Gram-negativas mediante el BDT v3. pH: 6.

Estos se subcultivan y se someten a pruebas de pureza y se subcultivan cada 3 semanas.RESULTADOS Un total de 55 cultivos puros fueron obtenidos. Los cultivos puros se mantuvieron en placas e inclinaciones de agar de extracto de malta. Ganoderma enigmaticum Trametes ljubarskyi . Estos cultivos puros se cribaron para la síntesis de nanopartículas de plata.

5.5 mM). pero se observo que para una concentración de 1. 1. Se especula que la reducción de los iones de plata se da mediante combinaciones de biomoléculas encontradas en estos extractos.Se observa una reacción positiva para la biosíntesis de AgNPs.0.5. 1. tales como enzimas. polisacáridos y vitaminas. el mecanismo es ampliamente aceptado para la síntesis de nanopartículas de plata es presencia de la enzima "Nitrato reductasa" Mecanismo Atrapamiento de iones Ag + en la superficie de las células IMPORTANCIA? fúngicas y la posterior reducción de los iones de plata por las enzimas presentes en el sistema fúngico .0 y 2. aminoácidos. debido a que el cambio de color de la solución donde fue incubado el hongo elucida presencia de AgNPs debido a la excitación de los plasmones superficiales Se realiza la incubación del sobrenadante con diferentes soluciones de nitrato de plata (0. Los extractos de organismos pueden actuar como agentes reductores y protectores en la síntesis AgNPs.0 mM y 12 horas de cultivo ya se presentaba un cambio significativo en el barrido espectrofotométrico y que al aumentar la concentración no aumentaba la intensidad del pico. proteínas. 2. Pero.

entonces el nitrato se convierte en nitrito. Reducción vía Nitrato reductasa Fusarium oxysporum Nigrospora Oryzae La reducción de Ag0 se debe a una conjugación entre el transporte de electrones con la participación de reductasa. cada vez que un electron sea transportado a los iones de plata entrantes Mecanismo hipotético de biosíntesis de AgNPs .

transmisión (TEM) apoyados del un software de análisis Caracterización AgNPs de imagenes obtenidas Espectroscopia de radiación Medición de los productos infrarroja por transformada biotransformados presentes durante de Fourier (FTIR el filtrado extracelular Método Difusión en agar empleando Actividad antibacteriana empleando diferentes patógenos Gram positivos y Gram negativos . METODOLOGIA. Para realizar el seguimiento Espectrofotometría Uv-vis de la reducción de los iones puros de plata sintetizados Para estudiar la morfología superficial Microscopia electrónica de y el tamaño de las nanopartículas. Caracterización de las AgNPs obtenidas Barrido espectrofotométrico de 350- 470 nm.

96 h) . incubación Existe el reporte de varios hongos como F. sanguineus. Estudios de caracterización Espectrofotometría UV-VIS La resonancia de plasmones superficiales es utilizado en bioquímica para el estudio de mecanismos y la cinética de los enlaces entre los ligandos y los receptores Banda de absorción característica (419 nm) Barridos espectrofotométricos para la superficie de correspondientes a 12 horas de plasmon. oxysporum. para diferentes tiempos de incubación (12. P. P. 24. correspondiente la banda característica. chrysosgenum en donde la máxima absorbancia se presenta en el intervalo de 420-430 nm.

proteínas. carbohidratos extensión de C-N amina primaria presentes en el extracto libre de (N-H) células. Los resultados del presente estudio evidenciaron claramente que las proteínas fueron responsables de la estabilización de las nanopartículas de plata sintetizadas mediante el filtrado libre de células . Estudios de caracterización Vibración de extensión para aminas aromáticas o alifáticas (C-N) Espectroscopia de Infrarrojo con transformada de Fourier (FT-IR) La interacción entre proteína y AgNP se analizó mediante FT-IR. Se piensa Picos de que las biomoléculas pueden ser los Vibración de vibración péptidos. con el fin Vibración de de entender que tipo de flexión de amida (N-H) biomoléculas pueden ser las responsables de la reducción de los iones de plata y la estabilización de los AgNP en la solución.

Los espectros FT-IR apoyan la presencia de un tipo de proteína compuesto en la superficie de nanopartículas biológicamente sintetizadas. Las proteínas pueden unirse a nanopartículas a través de grupos amina libres o residuos de cisteína en las proteínas y mediante la atracción electrostática de grupos carboxilato cargados negativamente. la estabilización de las nanopartículas de plata por proteína es una posibilidad . en las enzimas que se encuentran en la pared celular de los micelios y por lo tanto .

El tamaño de partícula de los AgNP sintetizados por dos hongos de podredumbre blanca varió de 15 a 25 nm . Las micrografías de TEM revelaron que las partículas son esféricas de forma redondeada y bien dispersas sin aglomeración en ambos organismos. Estudios de caracterización Microscopia Electrónica de Transmisión La medición TEM se llevó a cabo para determinar la morfología y la forma de los AgNP.

las nanopartículas de plata con diferentes formas tienen diferentes efectos sobre las células bacterianas.El impacto bactericida de las nanopartículas de plata depende del tamaño. Diversos estudios proponen que las AgNPs pueden unirse a la superficie de la membrana celular alterando la permeabilidad y las funciones de respiración de la célula. debido a que. Se ha probado la eficacia bactericida de las nanopartículas de plata. La eficacia antimicrobiana de las nanopartículas depende también de las formas de las nanopartículas. en donde la presencia de las nanopartículas aumenta el poder bactericida. esto daría un efecto bactericida más grande que AgNPs de mayor tamaño o soluciones de sales de plata. . funcionalizando diferentes tipos de antibióticos. Las partículas de tamaño más pequeño tienen una gran superficie disponible para la interacción. esto puede confirmarse aún más estudiando la inhibición del crecimiento bacteriano mediante nanopartículas de forma diferencial. encontrando resultados prometedores.

Estudios de caracterización Actividad antimicrobiana .

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deben ser. químicamente estables e inertes .Por que son importantes las AgNps sintetizadas biológicamente? Nigella sativa Estos no deben producir reacciones adversas al estar en contacto con tejidos vivos y fluidos fisiológicos. no tóxicos.