gerakan partikel yang bermuatan di dalam suatu media yang diberi arus listrik • Digunakan untuk pemisahan suatu campuran senyawa yang bermuatan : protein atau DNA Prinsip dasar elektroforesis • Elektroforesis adalah suatu proses migrasi molekul bermuatan di dalam suatu media yang bermuatan listrik, dimana kecepatan migrasinya tergantung pada muatan, ukuran dan bentuk setiap molekul yang terlibat. • Pada saat arus listrik diberikan, molekul bermigrasi melalui media (biasanya berupa gel), molekul yang kecil akan bermigrasi lebih cepat daripada yang besar, sehingga akan terjadi pemisahan Tipe Elektroferesis Elektroforesis vertikal untuk Elektroforesis horizontal untuk analisis protein analisis DNA DNA? • DNA adalah asam organik, dan bermuatan negatif • Ketika DNA terkena medan listrik, partikel bermigrasi ke arah elektroda positif • Potongan DNA yang lebih kecil dapat bergerak lebih jauh dalam waktu yang diberikan daripada potongan yang lebih besar Elektroforesis DNA • Pada gel electrophoresis untuk DNA, enzim restriksi memotong DNA menjadi beberapa fragmen dengan panjang bervariasi. • Semua fragmen tadi akan bergerak dari sisi gel yang bermuatan negatif ke arah ujung yang bermuatan positif. • Apabila arus listrik dihentikan , fragmen DNA tadi telah terpisah-pisah di dalam gel tersebut dan yang berukuran lebih kecil akan berada lebih dekat pada ujung postif. Fragmen tersebut akan terlihat seperti bentuk barcode. • Setiap bar dlm pola tersebut mengandung DNA fragments dgn ukuran tertentu. • Urutan DNA complement dpt digunakan sbg probe untuk menentukan restriction fragment pada gel yang memiliki urutan nukleotida tertentu.
• Contoh : Scientists dpt menggunakan DNA darah
dilokasi kriminal untuk mengungkap pelaku kejahatan. Jika contoh darah sesuai dengan yg terdapat pada gel elektroforesis , maka proses pairing akan terjadi Media Elektroforesis Berupa gel (sediaan semisolid transparan) • Utk pemisahan protein : digunakan gel polyacrylamide • Utk pemisahan DNA : digunakan gel agarose PREPARASI • Buat 250 mL larutan bufer TAE 1x dengan cara mencampurkan 5 mL TAE 50x ke dalam 245 mL akuades.
• Buat gel agarosa 1% dengan cara menimbang
agarosa 0,2 g untuk dilarutkan ke dalam 20 mL bufer TAE 1x dan dididihkan hingga larut sempurna. D:\Elektroforesis\Agarose Gel Electrophoresis - YouTube.MKV • D:\Elektroforesis\Elektroforesis - YouTube.MKV Contoh Kromatogram Hasil elektroforesis Elektroforesis DNA
DNA marker Produk PCR
Daftar Pustaka • Marlia Singgih Wibowo, School of Pharmacy ITB • Terima Kasih