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8vo CONGRESO DE LA SODIAF

Diversidad genética y distribución del Viroide del tubérculo ahusado de
la papa (PSTVd) en la República Dominicana

Luis A Matos Casado1, 2,

Danilo O. Soto1, 3
Andreina Cuello3
1,Facultadde Ciencias Agronómicas y Veterinarias-UASD, 2 Instituo Dominicano de Investigaciones Agropecuarias y Forestales
(IDIAF) 3 Laboratorio de Post-entrada Departamento de Sanidad Vegetal-Ministerio de Agricultura (DSV-MA)

12-15 noviembre 2018
Santo Domingo
República Dominicana
8vo CONGRESO SODIAF 2018

Introducción

 La producción en Invernaderos se inicio en el país en el
2004

 Solo con 269 mil m² de superficie

 Al 2016 se incrementó a mas de 9.0 MM m²

 Principales provincias productoras: San José de Ocoa, La
Vega, Espaillat, San Juan
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 Principales cultivos son: Tomates, Ajíes y
Pepinos

 En promedio se instalan 800 mil m² por
año con tendencia a seguir aumentando

 Mas de US$ 100 MM, en exportaciones y
mil millones en ventas locales.

 Plagas y enfermedades que afectan la
producción (TSWV, TYLCV, Bacterias,
Insectos,
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Síntomas de amarillamientos en plantaciones de invernaderos y campo abierto
son reportados desde el 2015
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Síntomas de amarillamientos, alargamiento inflorescencias y entrenudos cortos
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Cien por ciento de plantas infectadas y frutos sin calidad comercial
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Objetivos

1. Determinar agente causal de esta patología

2. Distribución e incidencia en plantaciones de tomates en
invernaderos

3. Progresión en el tiempo y mecanismos de dispersión

4. Determinar su diversidad genética y posibles poblaciones mixtas
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Métodos

1. Extracción de RNA y RT PCR para
1. Cinco (Virus mas viroides)
2. Evaluación zonal y porcentaje de plantas enfermas
3. Evaluación mensual de la progresión y factores ligados al
manejo
4. Amplificación por PCR, secuenciación y clonación
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Métodos
Identificar el agente causal asociado a los síntomas
observados en tomates.
a. Colección y preservación de muestras
b.Extracción y conservación de Ácidos nucleicos
(ARN)
c. Reversotranscripción del ARN en ADN (cADN,
ADN complementario)
d.PCR usando iniciadores universales para Viroides
y cinco géneros de virus.
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Métodos
Evaluación de la progresión de la enfermedad, con el 20% de las plantas
de cada invernadero

Cada cinco hileras se
evaluaba la totalidad de
plantas

Evaluaciones mensuales
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Métodos
Evaluar posibles poblaciones mixtas (varios
tipos o especies de viroides
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Resultados y Discusión
a. Identificar el agente causal asociado a los síntomas observados en tomates

Las muestras analizadas dieron productos de amplificación a dos
iniciadores universales para viroides

360 bp
260 bp
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Resultados y Discusión
Muestras analizadas para determinar presencia de viroides usando los
iniciadores PospiF PospiR
Y Vid-1 y Vid-2. Iniciadores universales o semi-universales para la
amplificación de fragmentos de ADN de viroides.

260 pb
PospiF-R 360 pb
Vid-1-2
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Los amplicones generados por PCR, fueron purificados y enviados a
secuenciar, de donde obtuvieron secuencias que coinciden en un 100%
con el viroides del tubérculo ahusado de la papa (Potato spindle tuber
viroid, PSTVd).
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Los amplicones generados por PCR, fueron purificados y enviados a
secuenciar, de donde obtuvieron secuencias que coinciden en un 99% con
el viroides del tubérculo ahusado de la papa (Potato spindle tuber viroid,
PSTVd).
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Resultados y Discusión

Todas las muestras analizadas por PCR y secuenciadas coinciden
con un 100% con el aislado DR-13-01 cuyo de número de registro
en el GenBank es KF683200.1

En La Vega (Constanza, Jarabacoa), en San José de Ocoa (Rancho
Arriba, El Naranjal, El Pinar, La Cienaga, Arroyo Palma) y en San
Juan, existe la misma población del PSTVd que aparentemente ha
sido distribuida a los diferentes centros de producción del país a
partir de una primera introducción
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Resultados y Discusión
b. Distribución e Incidencia de la enfermedad
Todas las regiones evaluadas presentaron
presencia del PSTVd
En La Vega (Constanza, Jarabacoa),

San José de Ocoa (Rancho Arriba, El Naranjal,
El Pinar, La Ciénaga, Arroyo Palma)
San Juan

La incidencia en 21 invernaderos evaluados
estuvo entre un 10 a un 90%
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Resultados y Discusión
c. Determinar progresión y las formas de transmisión
Se evaluaron invernaderos, los cuales mostraban
diferentes niveles iniciales de infección.

Invernaderos % de infección/ evaluación

1 1 2 3 4

2 0 0 1.6 12

3 1 _ 80 -

4 0 0.14 2.5 7
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Resultados y Discusión
c. Determinar progresión y las formas de transmisión
De todas las formas de transmisión que fueron probadas, se pudo
confirmar la transmisión mecánica, inoculado directamente sobre las
hojas de las plantas, la transmisión mecánica sin usar buffer de
extracción frotando los dedos en una planta enferma, luego frotando
los dedos sobre una planta sana y también la transmisión por semillas
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Resultados y Discusión
A pesar de la amplificación por PCR del RNA extraído de semillas,
no se pudo obtener amplificación de plantas generadas a partir de
semillas de frutos de plantas enfermas
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Resultados y Discusión
La transmisión mecánica, parece ser la principal vía de dispersión,
dentro de cada unidad productiva analizada
Luego de que aparece la primera planta enferma, a ambos lados
de esta, aparecen entre cinco y seis con síntomas, al siguiente
mes
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Resultados y Discusión

A B C D
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Resultados y Discusión
Los métodos de polinización, mas los trabajos de
deschuponamientos o “deshije” son factores que
contribuyen con la diseminación interna del PSTVd
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Resultados y Discusión
Los niveles mas bajos en términos de diseminación interna
fue observado donde los obreros trabajan en una sola
unidad de producción y hay desinfección de las manos
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Resultados y Discusión
d. Determinar su diversidad genética y posibles poblaciones mixtas

Árbol filogenético del resultado de las secuencias de nucleótidos generados de los
productos de PCR, usando los cuatro principales coincidencias en las bases de
datos del GenBank. RD-PSTVd secuencia resultante de las muestras analizadas,
DR-13-1, registro del primer reporte del PSTVd en la República Dominicana.
KF683200, KP454051 y KP454048 las próximas tres secuencias más cercanas en
similitud
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Resultados y Discusión
El resultado de 20 secuencias de ADN amplificado con iniciadores
universales indican que no hay mezclas de poblaciones

El PSTVd presente en el país, corresponde a una introducción que
se hiciera, probamente a través de semillas infectadas de papa y
desde esta, paso al cultivo del tomate
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Conclusión
 El PSTVd es una de las principales limitantes en la producción de tomates a
nivel de invernaderos
 Está ampliamente distribuido en las principales zonas de producción
 Los efectos de este patógeno, están estrechamente vinculados al manejo
que se les de en cada centro de producción
 En ninguna plantación evaluada se presentó infección antes del inicio de la
cosecha
 Los niveles de incidencia estuvo entre un 10 a 90% dependiendo del
manejo
 Aparentemente ha habido una sola introducción según las secuencias
analizadas
Gracias por su atención

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