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PRODUCCION IN VITRO DE TRES VARIEDADES

DE PAPA (SOLANUM TUBEROSUM) LIBRES DE
ENFERMEDADES A TRAVES DEL CULTIVO DE
MERISTEMOS.
ILVY MEJIA, DELIA NAVARRO

Tecnologías para aumentar la productividad
de la papa a través de la distribución de
semilla de papa libre de enfermedad en
República Dominicana
INTRODUCCION

La papa (Solanum tuberosum) es un cultivo alimenticio de
mucha importancia mundial. En la producción mundial de
alimentos, la papa (315 millones de t) es solo superada por el
maíz (872.39 millones de t), arroz (680 millones de t) y trigo (663
millones de t). Las papas son consumidas por más de mil
millones de personas en todo el mundo. En la Rep. Dom. en el
año 2016 fueron sembradas 46,887 tas para una producción de
1,854, 657 qq.
Descripción del Problema
La semilla de papa es el insumo más importante para la
producción de este rubro y representa cerca del 35 % de su costo
de producción. Desde hace años no existe un programa local, ni
público ni privado, para la producción de semillas de papa. Los
pequeños productores de papa no pueden pagar los altos costos
de la semilla de papa. En las dos principales zonas de producción
(Constanza y San José de Ocoa) los productores guardan como
‘semilla’ la papa pequeña que no clasifica para el mercado por su
tamaño. Normalmente, en una plantación de papa de consumo,
las papas que se han quedado pequeñas provienen de plantas con
una alta probabilidad de estar infectadas por virus y bacterias.
PRODUCCIÓN DE PLANTAS DE PAPA
LIBRES DE VIRUS USANDO CULTIVO DE
MERISTEMO
La disponibilidad de material inicial libre de patógenos es un pre-
requisito para cualquier programa de micropropagación. Las
plantas producidas por medio de cultivo de meristemos, libres de
patógenos, pueden mantenerse indefinidamente por cultivo de
tejidos, las cuales garantizan un constante flujo de plantas libres
de enfermedades. Sin embargo, para la confirmación y
mantenimiento de la identidad, tal stock in vitro necesita,
regularmente, estar sujeto a pruebas, por lo menos una vez por un
año.
Material biológico
Tres variedades de papa fueron saneadas y multiplicadas para la
producción de semillas.
Granola: es la variedad mas cultivada y de consumo fresco.
Victoria: variedad importada de Ecuador (consumo fresco)*
FL: variedad utilizada por la industria de confitería para la
producción de chips.
Etapas de la micropropagación
• Fase 0. selección de la planta donadora.
Etapas de la micropropagación
• Fase I: Establecimiento o Iniciación de los cultivos. El objetivo de
esta fase es establecer cultivos asépticos y viables para así iniciar el
proceso de propagación.

Desinfección de esqueje (0.525%
NaOCl + Tween 20, 15 min). Aclareo Extracción de meristemo
(agua destilada estéril, 3-4 veces)
Continuación

Fase I

Meristemos cultivados durante dos meses a 18°C en un medio semi
sólido de Murashige & Skoog, con 0.05mg biotina, 0.05mg pantotenato
de calcio, 100mg ácido ascórbico y 30g de sacarosa
Etapas de la micropropagación
• Fase II: Multiplicación. Es considerada la etapa más
importante del proceso donde se debe garantizar la
propagación de los brotes y la estabilidad genética de las
plantas producidas.Transcurrido los dos meses se cultivan los
entrenudos procedentes de las plántulas del cultivo de
meristemo en un medio (MS) suplementados con 5mg de
thiamina, 100mg de Myo-inositol y 20g de sacarosa
Etapas de la micropropagación
• Fase II: Multiplicación.

VARIEDAD COEFICIENTE DE MULTIPLICACION

GRANOLA 5.3

VICTORIA 4

FL 3.8
Etapas de la micropropagación
• Fase III: En esta fase se realiza el diagnóstico de las plantas
procedentes de las líneas, eliminando todas aquellas muestras
positivas y manteniendo en multiplicación las negativas.
Etapas de la micropropagación
Fase III: Pruebas serológicas para verificar la ausencia de PVY
(Potato virus Y) utilizando inmunotirillas.

Negativo Positivo Negativo
Etapas de la micropropagación
Fase IV: Enraizamiento. Su objetivo es preparar las plántulas
para su re-establecimiento en condiciones de suelo.

Durante 21-30 días se mantienen las vitro plantas de 10 a 18°C
Fase IV: Enraizamiento.
Producción de semilla prebásica en camas
Medios de cultivo
Componentes Medio de Establecimiento Medio de Multiplicación Medio de Enraizamiento

Macronutrientes(10x) 100 ml 100 ml 100 ml

Micronutrientes(100x) 10 ml 10 ml 10 ml

EDTA-Fe(100x) 10 ml 10 ml 10 ml

Biotina 0.05 mg

Myoinositol 100 mg 100 mg 100 mg

Tiamina 5 mg 5 mg

Sacarosa 30 g 20 g 30 g

Agar 3g 3g 3g

pH 5.6 5.6 5.6
Protocolo de propagación
Pre-tratamiento del Tubérculo

Lavado (agua, sin lastimar las yemas)
Desinfección Superficial (5 minutos)
Corte (piezas de 2-3 cm conteniendo yemas)
Inmersión (20mg/l GA3, 20min)
Plantación (1 cm de profundidad en bandejas con vermiculita)
Mantenimiento (invernadero, 15-20 ºC, 4-6 semanas)

Desinfección

Lavado con detergente neutro)
Desinfección (0.525% NaOCl + Tween 20, 15 min). Aclareo
(agua destilada estéril, 3-4 veces)

Extracción del Meristemo

Inoculación en Medio de Iniciación Cultivo ( 25 ºC, 3 días en la oscuridad  2000 lux, 16 h)

Propagación Masiva Colocar horizontalmente en el medio las yemas de 2-3c

Aclimatización Sumergir la base de las plántulas en una solución de 53.7 mm ANA
CONCLUSIONES

• Para realizar un buen cultivo de tejido hay que tener en
consideración, la especie a propagar, el problema a
eliminar y el método a utilizar.
• El explante de meristemo más adecuado es el proveniente
de la parte axilar, se ha demostrado en investigaciones
anteriores que la parte axilar es la que esta en un gran
porcentaje libre de virus.
• El cultivo de meristemo es el mas comercial gracias a ellos
se obtienen microplantas y microtubérculos libres de
patógenos.
GRACIAS