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ELECTROFORESIS

Paula Cancelado Medina


Cristian Castillo Navas
Yesenia Gómez Acevedo
¿QUÉ ES?
Técnica de separación y cuantificación, que se basa en la movilidad que tienen ciertas
partículas, al estar influenciadas bajo un campo eléctrico.
• Peso molecular
• Punto isoeléctrico
• Distinguir moléculas por su carga neta

Existen varios tipos de electroforesis, entre los cuales, los que mas resaltan:
ELECTROFORESIS DE FRENTE MOVIL O LIBRE
ELECTROFORESIS EN PAPEL
ELECTROFORESIS DE ZONA ELECTROFORESIS • PAGE- nativa
EN GEL • SDS- PAGE
• Isoelectroenfoque
ELECTROFORESIS CAPILAR
FUNDAMENTO FÍSICO
El movimiento de las moléculas está gobernado por dos fuerzas:
● La fricción con el solvente dificultará este movimiento por una fuerza que se opone.
● El movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia.
Clave: La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una
manera homogénea, sino que comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura
aumentara con el tiempo.

Esta separación se basa en la diferente velocidad de migración de partículas con carga diferente
dentro de un campo eléctrico.
V= µ.E

La movilidad electroforética de una partícula dependerá de su carga, de su masa, del medio en


el que tiene lugar la separación y del campo eléctrico.

µ = Q /6Πηr
PARÁMETROS QUE AFECTAN LA MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA

● Externos : Campo E y Temperatura


● Solvente : Constante dieléctrica (ε), Viscosidad (η), Fuerza iónica (FI), pH: Da el grado de ionización
de la partícula.
● Sustancia problema : Carga de la partícula, forma y tamaño
● pH = PI de la proteína, no hay migración.
● Para valores de pH por debajo del PI, predominan las cargas positivas y las proteínas migran hacia el
cátodo (-). y Para valores de pH superiores al PI, las proteínas están cargadas negativamente y migra
hacia el ánodo (+).

PARA TENER EN CUENTA…!

La mayoría de las proteínas intracelulares tienen carga negativa, ya que su punto isoeléctrico es
menor que el pH fisiológico (aprox. 7,4)
CÁMARA ELECTROFORÉTICA
1. COMPONENTES
2. PREPARACIÓN DE LA CAMARA
3. ACCIONAMIENTO DE LA CAMARA
COMPONENTES
PREPARACIÓN DE LA CÁMARA
ELECTROFORÉTICA
1. Ensamblaje de las placas de vidrio y
espaciadores en la base
2. Introducción del peine en la cámara
3. Adición del gel de resolución y de
forma posterior del gel de
empacamiento
4. Disposición del peine y
polimerización
5. Proveer en una zona plana la cubeta
electroforética
ACCIONAMIENTO
APLICACIONES DE
ELECTROFORESIS
• Electroforesis en gel de agarosa como método de separación de fragmentos
de ADN

1. Cuando se aplica un campo eléctrico al ADN este se desplaza del polo negativo al polo
positivo. Para dicho proceso se utilizan:
❖ TAMPON TBE: Trisbase 0,4M, Acido Bórico 0,4M, EDTA 10mM, pH=8
❖ TAMPON DE CARGA: 40% sacarosa, 0,25% azul de bromofenol, EDTA 0,1M
❖ GEL DE AGAROSA: Disolver la agarosa en tampón TBE

2. Muestra: Se añade tampón de carga + muestra y la mezcla se pone en los pocillos


del gel.

3. Aplicación de Campo eléctrico

4. Tinción de gel con Bromuro de Etidio (Iluminación de gel con luz ultravioleta)

5. Resultados
Procedimiento
Aplicabilidad de la electroforesis en biología
molecular
• Southern blot: separación de secuencias especificas de ADN.

• Northern blot: separación de secuencias especificas de ARN.

• Western blot: se usa principalmente para demostrar que un tejido

expresa una proteína determinada.


ELECTROFORESIS DE PROTEINAS DE SUERO EN ACETATO DE
CELULOSA
• El soporte consiste en tiras delgadas de acetato de celulosa, con propiedades de adsorción mínimas.
PROTEÍNAS
• Las proteínas de suero se pueden separar mediante esta técnica. Sus puntos isoeléctricos están entre 4,9
(Albúmina) y 7,4 (Gamma-globulinas).
• En suero humano la composición normal es:
• Albúmina ........... 54 - 62%
• α-globulinas ....... 9 - 15%
• β-globulinas ....... 8 - 13%
• γ-globulinas ....... 14 - 19%
CAMPO ELECTRICO
• Conectar la corriente, aplicando una diferencia de potencial de 200 voltios durante 60 minutos.
REVELADO
• Depositar las tiras en una cubeta con solución de tinción, de modo que queden cubiertas por el líquido,
durante 10 minutos.
REFERENCIAS
[1] fecha de consulta: 25/09/2018. Tomado de: Isaac Túnez Fiñana. Electroforesis:
electroforesis en papel de proteínas séricas. Departamento de Bioquímica y Biología
molecular; Facultad de Medicina, Universidad de Córdoba, Avda. Menéndez Pidal s/n,
14004- Córdoba
[2] fecha de consulta: 24/09/2018. Tomado de: Edgar A. Electroforesis de proteínas de
suero en acetato de celulosa. Fundamento teórico electroforesis, Facultad de
Farmacia, Universidad de Sevilla, España.
[3] fecha de consulta: 25/09/2018. Tomado de: Instituto Nacional de Salud: Manuel
de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN. Pág. 7-12.