EXTRAÇÃO DE DNA

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 FONTES DE DNA

 Bactérias, células vegetais

 animais
 Saliva, sangue, urina, escarro
 Lavagem broncoalveolar
 Fluido cerebroespinhal, Fluido pleural
 Secreção vaginal, esperma
 cortes de tecidos (biópsias frescas ou parafina)

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 Cultura de células

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 Biópsia tecidual Desparafinização

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 Método de Lise alcalina

Lisozima (enzima encontra da na clara de ovo, lágrimas e saliva).

Digere compostos polissacarídeos da parede bacteriana.

EDTA (Tetracetato de Etilenodiamina)

Remove íons de Mg+2 da parede celular e RNases

SDS (Sulfato dodecil de sódio).

Rompe a membrana celular e lipídeos.
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 TÉCNICA EXEMPLO EFEITO EM MEMBRANAS TIPO CELULAR

Baseado em Lisozima Produz orifícios na membrana Bactéria

Enzimas/ Temperatura originando estado hipotônico
Agente Físico Alta

Solução Solução salina Produz ambiente hipotônico que Bactérias/

hipotônica rompe as membranas geral
celulares

Detergente SDS Solubiliza a camada lipídica Células animais e

em cultura

Sonificação Ondas Rompe membranas através de Células

sonoras sons de alta frequência bacterianas

Homogeneização Ruptura Rompe membranas por força Tecidos de

mecânica iônica plantas/
biópsias

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8
Precipitação de Proteínas e Purificação do DNA
Fenol ;

Fenol: Clorofórmio 1:1

Proteinase K

Remoção de RNA
Adição de RNase (ribonuclease).

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 Quantificação de DNA

Padrões quantiicados

O novo NanoPhotometer™ Pearl é um

espectrofotómetro poderoso que possibilita
trabalhar com volumes a partir de 0,3 ul

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 Inibidores deNucleases Ação

Baixa Temperatura Reduz atividade das proteínas

Agentes Quelantes: Removem cátions divalentes

Citrato de EDTA
Percloratos Dissociam proteínas ligadoras de DNA do
complexo DNA-Proteína
Fenol:Clorofórmio: Isoamil Desnaturação de nucleases e precipitaçãode
proteínas
Dietilpirocarbonato (DEPC) Inibidor de RNAses

SDS Inibidor de RNAses

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