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DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO

Dra. Lizzie Becerra Gutiérrez


Ms.C. Carlina Loayza Estrada
Ms. C. Max Siadén Ortega
Ms. C. Jesus Quiñones Esquerre
Objetivos de la Práctica
• Familiarizar al estudiante con las diferentes
técnicas de diagnostico de virus
• Explicar la importancia de las técnicas de
Diagnostico en virología y en otras disciplinas
científicas.
DIAGNÓSTICO VIRAL
Elemento crucial para realizar el DX de
laboratorio de un virus es

Toma de Procesamiento de
muestra una muestra clínica
adecuada
PARA EL DX VIROLOGICO EN EL LABORATORIO

Es importante

Información epidemiológica:
Diagnóstico clínico:
Identificación del paciente, Edad, Sexo, Antecedentes.
Orienta
Inicio de la enfermedad.
hacia la prueba
Fecha de obtención de la muestra.
apropiada a realizar
Obtener información si el paciente ha recibido vacunas
virales o
terapéutica antiviral en una fecha reciente.
TOMA DE MUESTRA

OBTENCION DE MOMENTO CONSERVACIÓN Y


MUESTRA ADECUADO TRANSPORTE
ADECUADO

OBTENER LA MUESTRA EN
USAR SOLUCIONES
UN ESTADIO TEMPRANO (72
EN FORMA TAMPONADAS, CON
HRS)
ASÉPTICA Y EN ANTIBIÓTICOS Y
EN INMUNOCOMPETENTES .
VOLUMEN ANTIFÚNGICOS.
ADECUADO
EN REACTIVACIONES
TRANSPORTE: EN
RECIPIENTE LIMPIO,
INMUNOCOMPROMETIDOS,
ESTÉRIL. CON HIELO
INFECCIONES VIRALES
PARA SER PROCESADAS O
PERSISTENTES O CRONICAS
COLOCARLAS EN
CONGELADORES (-20° C)
ALGUNOS TIPOS DE MUESTRAS
• HISOPADOS CONJUNTIVALES
HISOPADO FARÍNGEO:
ADENOVIRUS, INFLUENZA, SARAMPION, • HISOPADOS DE LESIONES Y VESICULAS
CITOMEGALOVIRUS, PAROTIDITIS.
CUTÁNEAS
HECES:
ROTAVIRUS, ADENOVIRUS, COXSACKIE A Y • ASPIRADO NASOFARÍNGEO
B, REOVIRUS, POLIOVIRUS.
• HISOPADOS NASALES
PIEL:
HERPES, VARICELA. • HISPADOS FARÍNGEOS

SECRECIONES OCULARES: • HISOPADOS RECTALES


ADENOVIRUS, HERPESVIRUS, SARAMPION.
• HECES
SANGRE:
HEPATITIS, VIH. • ORINA

• LCR

• SANGRE
METODOS DIRECTOS
Son aquellos que detectan:

1. El virus como agente infeccioso.

2. La presencia de antígenos virales (técnicas


inmunológicas): Inmunofluorescencia (IF),
Enzimoinmunoanálisis (EIA), Test de Aglutinación.

3.La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, etc.).

4.El virus como partícula viral (microscopía electrónica).


AISLAMIENTO VIRAL Cultivos celulares

Microscopía
electrónica

VIRUS COMO PRESENCIA DE


PARTICULAVIRAL
METODOS DIRECTOS A.N. VIRALES

PCR,
Sondas genéticas
Pruebas inmunológicas:
Inmunofluorescencia (IF), DETECCION DE
Enzimoinmunoanálisis (EIA), ANTÍGENOVIRAL
Test de Aglutinación.
• Cuando los virus no producen efecto
citopático, se puede recurrir a técnicas que
ponen en evidencia su presencia en el cultivo.
Las más usadas son:
• Hemadsorción
• Hemaglutinación
• Tinciones con anticuerpos monoclonales.
EXAMEN DIRECTO

se realiza de

Secreciones Excreciones Productos


Patológicos

Estudia las

Alteraciones Celulares Típicas


EXAMEN DIRECTO

Lesión Cutánea
Secreción
Mucosa
Nasofaríngea
Brónquica
Viruela
Varicela
Gripe
Vacuna
Herpes

se realiza de

Orina
Saliva
Saliva
Citomegalia
Parotiditis
Neurona sin cuerpos de Negri
Célula nerviosa infectada con el virus de la rabia con inclusiones intracitoplasmáticas (cuerpos
de Negri). La tinción roja indica áreas del antígeno viral de la rabia mediante el uso de
inmunohistoquímica o del complejo avidin-biotina
Cuerpo de Negri en neurona infectada
Cuerpo de Negri en célula cerebral
Virus de la Rabia gemando de una
inclusión (cuerpo de Negri) al retículo
endoplásmico en una célula nerviosa.

A. Cuerpo de Negri.

B. Abundantes ribonucleoproteínas en la
inclusión.

C. Virus de la rabia gemando.


METODOS INDIRECTOS
• Son aquellos que reconocen la respuesta
inmune (humoral o celular) por parte del
huésped:
• Detección de anticuerpos específicos
antivirales por técnicas inmunológicas (EIA,
IFI, WB, etc.).
• Producción de anticuerpos in vitro.
LA ELECCION DE UNA PRUEBA
DIAGNOSTICA
En la valoración de los diferentes
procedimientos de diagnóstico descriptos, se
pueden considerar tres parámetros de
importancia fundamental:
• SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD.
Técnicas para Evaluar Inmunidad
Viral
INMUNOCROMATOGRAFIA
ELISA
Inmunofluorescencia
• Es una técnica histoquímica o citoquímica, útil
para detectar y localizar antígenos en células o
tejidos. Se utiliza un anticuerpo específico
conjugado con un compuesto fluorescente
dando como resultado un marcador sensible
contra el antígeno.
• Inmunofluorescencia directa (ID). El
anticuerpo conjugado se añade directamente
a la sección de tejido o suspensión de células
viables.
La presencia de anticuerpos en el
citoplasma y superficie de las células
infectadas
Inmunofluorescencia
Indirecta
• Se basa en la unión de anticuerpos antivirales
a los antigenos virales expresados en la
superficie y el citoplasma de células
infectadas (fijadas en un portaobjetos). Útil
para la determinación de anticuerpos
antivirales en el suero del paciente. Se incuba
el suero del paciente con las células infectadas
y se agrega un anticuerpo anti-IgG humana
conjugada con isotiocianato de fluoresceína.
Inmunofluorescencia

• Puede usarse para detectar el virus de la influenza A


y B, Parainfluenza 1,2 y 3 y Adenovirus entre otros
Aglutinación en látex
• La aglutinación de las partículas de látex recubiertas
por un Ag específico permite la detección de Ac
libres específicos para el Ag
• Se basa en las interacciones Ag-Ac, donde la cantidad
y especificidad de la reacción se evalúa por los
cambios físicos inducidos tras la unión del anticuerpo
específico con su antígeno correspondiente para
formar inmunocomplejos.
Hemaglutinación
• Ciertos virus (influenza, parainfluenza y
togavirus) producen antígenos que logran
acoplarse de manera espontánea a los
eritrocitos y forman reactivos estables para la
detección de anticuerpos.
• Esta reacción puede inhibirse usando un
anticuerpo específico antiviral. De esta
manera la hemaglutinación puede usarse
para cuantificar el virus y el título de
anticuerpos contra el virus hemaglutinante.
Western Blot (WB)
• Con el uso combinado de electroforésis y
ELISA puede determinarse la respuesta a una
diversidad de proteínas específicas a
patógenos.
• Este procedimiento proporciona un medio
específico para identificar reactividad de
anticuerpos.
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN EN ANIMALES DE LABORATORIO

RATÓN LACTANTE para: RATÓN ADULTO para:

• Inocular por vía intracerebral • Inocular por vía intracerebral


(0,06 ml) : Herpes simple. (0,03ml) o intraperitoneal hasta
2 ml de encefalitis
• Inocular por vía subcutánea
(0,06 ml) : infección por • Inocular por vía intracerebral :
Coxsakie, Arbovirus y Reovirus rabia, coriomeningitis linfocitaria

• Inocular por vía intradérmica • Inocular por vía intranasal ( 0,05


(0,02ml) virus Coxsakie ml): Influenza A,B y C

• Inocular por vía intraperitoneal o


intracerebral para obtención de
inmunosueros.
Conejo para :
Cobaya para :
• Inocular por vía
• Inocular por vía intradérmica Herpes tipo B.
intraperitoneal hasta 5 ml
de coriomeningitis • Inocular por vía
linfocitaria intradérmica para la
obtención de vacunas.
• Inocular por vía
intraperitoneal o • Inocular por vía
intramuscular para intravenosa, intramuscular
obtención de o intraperitoneal hasta 2 ml
inmunosueros hasta un para la obtención de
ml inmunosueros
RESULTADOS
Manifiestacón de la infección en el ratón:
Observar sintomatología, la muerte o la elevación del título de anticuerpos.
Observar durante dos o más semanas el animal inoculado
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Koneman y Col. Diagnóstico Microbiológico.


Edit. Panamericano. 2017.
2. Murray y Col. Microbiología Médica. Edit.
Panamericano. 2017.