Replicação de Ac.

Nucléicos
in vitro

Prof. Ronald Neto

Biomédico – Lab. Citogenética USS
 Replicação de DNA

in vivo:

• Biossíntese de DNA a partir de um molde

de DNA

• Ocorre na fase S

• Ocorre no sentido 5’ – 3’
• contínua
• descontínua (Fragmentos de OKASAKI)

• Semi-conservativo

• Várias origens de replicação (A-T)

 Replicação de DNA

Componentes da reação:

• Primer

• Helicase

• DNA Polimerase SIGMA

• Topoisomerase

• Primase

• DNA Ligase
Replicação de DNA
Reação em Cadeia da Polimerase – PCR
(polymerase chain reaction)

Descoberta:

1983- Kary Banks Mullis

1985- 1º paper (Nature/Science - recusado)

1993 - Nobel da Química

 PCR
Princípios da metodologia:

• Método de amplificação rápida in vitro de

seguimentos específicos de ácidos nucléicos.

• Se baseia em uma ação enzimática através de

ciclos contínuos de alternância de temperaturas.
 Etapas da PCR:

Coleta e Preparo da Amostra

Extração de DNA

PCR

Detecção e Análise de Resultados

 Componentes da PCR:

Enzima - Polimerase termoestável (Tac ou Pfu);

dNTPs - A,T,C,G;

Molde ou Template;

Um ou mais pares de primers;

Tampão e sais;

Cofatores enzimáticos;

TERMOCICLADOR
 Condições da PCR:

Temperatura:
Desnaturação: 95o C
Hibridização: 60oC
Extensão: 72oC

Vários Ciclos: 30
PCR
Video:
Análise:
 Aplicações:

• Diagnósticos de doenças genéticas e

infecciosas;

• Estabelecimento de vínculo genético;

• Genética forense;

• Pesquisa;
PCR por um mundo melhor
ronald.neto@bol.com.br