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INTERAÇÃO ANTÍGENO-ANTICORPO

Dayse Locateli
2005

 Interação reversível  Complementariedade Especificidade Ligações não covalentes: ‡Pontes de Hidrogênio ‡ Ligações iônicas ‡ Interações hidrofóbicas ‡ Interações de Van der Waals

 Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).  Avidez Força de interações total entre Ac e Ag. Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos 

Reação cruzada

Dois Ag diferentes apresentam um epítopo idêntico Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.

Aplicações Pesquisa Diagnóstico Soroepidemiológia Métodos:  Precipitação  Aglutinação  Imunoensaios .

Metodologias que utilizam: 1) Reagentes não marcados ‡ Reação de precipitação ‡ Reação de aglutinação 2) Reagentes marcados ‡ RIA ‡ ELISA ‡ Imunofluorescência ‡ Western Blot .

Reagentes não marcados Detectam / quantificam as conseqüências da ligação Ag ± Ac .

Anticorpos bivalentes + Antígenos multivalentes PRECIPITADO .Reação de Precipitação Interação: ac .ag solúvel forma uma rede que pode desenvolver um precipitado visível.

Reação de precipitação em soluções Reação quantitativa: ‡Qtidade cte Ac ‡Qtidade cresc. Ag Qtidade precipitina .1.

2 .Reação de Precipitação em gel  Utiliza uma matriz de ágar  Ag + Ac = linha de precipitação visível a) Imunodifusão radial (Método de Mancini) ‡ Ag ou Ac fixos ‡ Dosagem de proteínas séricas b) Imunodifusão dupla ‡ Identidade de Ags = Ac de reatividade conhecida .

Reações de Aglutinação Ac + Ag particulado aglutininas Agregação visível de partículas Eritrócitos Bactérias Fungos látex ‡ Efeito pró-zona .

Aglutinação Direta Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação ‡ Detecção Acs específicos ‡ Quantificação  Tipagem ABO Testes confirmatórios para sífilis  Aglutinação bacteriana Presença de infecção Diferenciação de espécies .

.

Aglutinação passiva Ag solúveis associados a outras superfícies (Partículas de látex ou superfície de hemácias) + .

Inibição da Aglutinação .

Reagentes Marcados Detectam / quantificam diretamente a ligação Ag .Ac .

Ensaio Imunoadsorvente Ligado à Enzima .ELISA Ac marcados com Enzimas + Ag + substrato = COR (incolor) Fosfatase alcalina Peroxidase B-galactosidase · Direto = Ag · Indireto = Ac  Qualitativos  Quantitativos .

ELISA Indireto ELISA Direto ou Sanduíche .

ELISA Competitivo  Aplicações do ELISA:  Testes de rotina em Laboratórios Clínicos e de Pesquisa  Vantagens:  Teste de alta sensibilidade  Permite quantificar Ag ou Ac das amostras  Seguros e de baixo custo .

Imunofluorescência .

P luz Ac + fluorocromo P Ac + Fluorocromo r ght .

IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA Reagentes secundários: Anticorpo secundário marcado com fluorocromo proteína A marcada com fluorocromo = porção Fc das IgGs .

Isotiocianato de fluoresceína (FITC) Ficoeritrina (FE) VERDE VERMELHA .

Fc Aplicações: ‡ Identificar subpopulações de linfócitos ‡ Identificar espécies bacterianas ‡ localização de hormônios ‡ Detecção complexos ag-ac em doenças auto-imunes ‡Detecção anticorpos anti-DNA ‡ Teste qualitativo .

Citometria de Fluxo  Separação de células ativadas por fluorescência  Anticorpos contra moléculas de membrana ou Antígenos do Conjunto de Diferenciação (CD)  Cada Ac é marcado com um fluorocromo diferente  Teste qualitativo e quantitativo CD 18 CD 4 CD 125 CD 147 .

 Tamanho  Granulosidade  Fluorescência .

CD20  Uso de múltiplos anticorpos fluorescentes HIV . sanguíneas brancas CD4  isolar populações celulares  distribuição de céls de acordo com a densidade dos Ag CD8  o tamanho celular.Aplicações:  Determinar o tipo e no de céls. Leucemias .

Western Blotting ‡ ‡ ‡ ‡ Eletroforese de proteínas Diferença de tamanho (PM) Mobilidade da proteína Detecção Ag ou Ac .

ligado a enzima .Western Blotting Gel membrana de transferência papel filtro preenchimento tela de suporte Gel/ membrana/ filtro Separação e detecção de proteínas Tampão ‡ Identificação de Ac específico ( +) Ac radiomarcado ou (-) Ac sec.

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Radioimunoensaio RIA ‡ Hormônio ‡ proteínas séricas ‡ drogas ‡ vitaminas ‡ Ac Moléculas marcadas com ISÓTOPO 0.0001 microgramas/ mL .

 Marcações: ± I125: emite raios gama ± H3: raios beta  Aplicações: Testes que necessitem de alta sensibilidade Triagem vírus da hepatite B em doadores de sangue Pesquisa  Desvantagem:  Não é um teste seguro! .