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V Corresponde a un grupo de técnicas de

inmunotinción que permiten demostrar


una variedad de antígenos presentes en
las células o tejidos utilizando
anticuerpos marcados.
V Estas técnicas se basan en la
capacidad de los anticuerpos de unirse
específicamente a los correspondientes
antígenos.
V `as técnicas inmunohistoquímicas
enzimáticas permite una localización
más precisa de las reacciones, ya que la
tinción es permanente, estable, puede
contrastarse y puede ser evaluada con
micro.
V `os anticuerpos monoclonales ha
permitido aumentar la especificidad,
sensibilidad y gama de esta
técnica.scopio de luz.
V Existen diversos tipos de técnicas, cuya
indicación dependerá del anticuerpo a
utilizar (monoclonal o policlonal),
material disponible (fresco, congelado o
fijado en formalina) y antígenos a
estudiar (de superficie o membrana,
citoplasmáticos o nucleares).

V Un elemento importante a considerar es


la óptima preservación del tejido y por
ende de los antígenos
V Existen varios tipos de anticuerpos, de los
cuales los IgG son los más abundantes
en suero y los que más utilidad tienen en
técnicas de laboratorio.
V Poli o mononucleares.
V El desarrollo de la metodología de
anticuerpos marcados con fluoresceína
(inmunofluorescencia indirecta)
realizado por Albert H Coons,Hugh
Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier,
en la Universidad de Harvard en 1941,
fue el antecedente del florecimiento de
la inmunopatología.
V ¢    
   

  
En las muestras que requieren estudios
inmunohistoquímicos, puede emplearse la
fijación con formol y la inclusión en
parafina, pero es esencial seguir
estrictamente las normas idóneas de
fijación y procesado tisular para evitar
pérdidas de antigenicidad, que puedan
falsear los resultados. `a fijación debe ser
inmediata y con un volumen de fijador
adecuado al volumen de la muestra, tal
como se describe en el apartado de
muestras tisulares.
V `a inmunohistoquimica puede realizarse
en tejidos de biopsia y autopsia, asi
como en material de citologia.

V Formaldehido al 4% tamponado a pH7.4

V 24-48 horas

V No > Tº de la ambiental

V descalcificacion: EDTA
V Puentes metilo cruzados
compuestos calcicos.
V Incubacion con calor 100º C buferes de
citrato o EDTA.
V Enzimas proteoliticas, sin calentamiento.
V Protease-induced epitope retrieval.
(inmunofluorescencia)
V Heat-induced epitope retrieval
Inmunomarcación de membrana: CD31 en células
plasmáticas reactivas. E-caderina en carcinoma mamario ductal
infiltrante. CD117 en seminoma clásico. CD138 en mieloma de
células plasmáticas. Distrofina, marcación submembranal en
músculo esquelético (cortesía Dra. B de `eón). EMA membrana y
acentuación paranuclear en linfoma anaplásico de células grandes.
CD15 positivo granular en región paranuclear. CD30, células de
Reed-Sternberg con marcación membranosa y paranuclear.
`infoma no Hodgkin difuso de células grandes con
matriz
fibrilar y formación de pseudosrosetas. Izquierda H&E,
derecha
CD20. Nótese como las células se agregan formando
´pseudorosetasµ
y las membranas son marcadas con CD20.
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V En la evaluación de las
inmunomarcaciones son importantes
dos elementos:
V ï  
   (intrínseco) y
V ÿ       
X u 
      
   del tejido y su preservación
antigénica.
X `os factores analíticos (extrínsecos) son los
elementos externos al tejido que pueden
controlarse en el laboratorio
V Negativo: total negatividad o menos del
50% cells diana, <intnsidad q el control.

V Positividad debil (+/-):


>50% <intensidad q el control.

V Positivo(+):
>50% =o> intensidad q el control.
V Realizarlos sobre la misma laminilla o
despegar zonas deseadas, y transferirlos
a otros portaobjetos.