Pruebas bioqumicas

Estudia el metabolismo de la bacteria

Estudio basado en la determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano Se detecta a travs de medios de cultivo especiales

Pruebas bioqumicas
Los medios de cultivo generalmente estn formados por: El sustrato sobre los cuales actan las enzimas

Un indicador que puede detectar la disminucin del sustrato o la presencia de un producto metablico especifico

Pruebas bioqumicas

La medicin de las diferentes caractersticas metablicas de un microorganismo permiten identificar la especie

Pruebas bioqumicas
Metabolismo fermentativo
Mide la capacidad del microorganismo para utilizar los hidratos de carbono Microorganismo acta sobre los carbohidratos y acidifica el medio El indicador presente vira

Clasificacin de bacterias por fermentacin

Agar Kligler

Agar Kligler
Composicin (g/litro)
Peptona de casena Peptona de carne Extracto de carne Extracto de levadura Cloruro de sodio Lactosa Glucosa Tiosulfato de sodio Citrato amnico frrico Rojo de fenol Agar 15.0g 5.0g 3.0g 3.0g 5.0g 10.0g 1.0g 0.5g 0.5 g 0.024g 12.0g

Agar Kligler
Componente del medio Funcin

Peptona de casena Fuente de carbono y nitrgeno Peptona de carne Fuente de carbono y nitrgeno Extracto de carne Fuente de carbono y nitrgeno Cloruro de sodio estabilizador osmtico Lactosa Fuente de energa Glucosa Fuente de energa Tiosulfato de sodio Produccin de gas sulfhdrico Citrato amnico frrico Detector de sulfhdrico Rojo de fenol Indicador de pH Agar Solidificante

Agar Kligler

Medio para la diferenciacin e identificacin de enterobacterias por la fermentacin de glucosa y/o lactosa, y la produccin de sulfuro de hidrgeno.

Agar Kligler
Algunos microorganismos pueden fermentar a glucosa y lactosa Otros no pueden fermentar a la lactosa Algunos no fermentan glucosa y lactosa La fermentacin puede ocurrir con produccin de gas (CO2 + H2) La fermentacin puede ser aerbica o anaerbica

Agar Kligler
GLUCOSA
Via Embden Meyerhot

Anaerobia

cidos orgnicos Aldehdos Alcoholes CO2 + H2 Energa

B galactosidasa

LACTOSA

Glucosa

Galactosa

Ciclo de Klebs

Glucosa

Galactosa
aerobia

CO2 + H2 +Energa

Agar Kligler
Pico de flauta Reaccin aerbica

pH-7.4

Reaccin anaerbica

Agar Kligler
Reaccin cido- cido gas

Porcin inclinada tiende a amarilla por la fermentacin de la lactosa En el fondo del tubo se produce cido y gas por la fermentacin de glucosa y vire del indicador

Agar Kligler
Reaccin alcalina- cido

Pico de flauta tiende a tornarse alcalina por la descarboxilacin oxidativa de protenas, proteosas y aminoacidos del medio (se libera NH3 ) Lactosa no fermentada En el fondo del tubo donde no hay oxgeno se produce cido por la fermentacin de glucosa y vire del indicador

Agar Kligler
Reaccin alcalino- cido gas

Porcin inclinada roja por ausencia de la fermentacin de la lactosa En el fondo del tubo se produce cido y gas por la fermentacin de glucosa y vire del indicador

Agar Kligler

Algunas bacterias pueden producir sulfhdrico en este medio

Bacterias (en ambiente cido) + tiosulfato de sodio H2S gaseoso

H2S gaseoso + iones frricos (precipitado negro insoluble)

sulfuro ferroso

Agar Kligler
Reaccin alcalino- cido y gas sulfhdrico

Porcin inclinada roja por la ausencia de fermentacin de la lactosa Fondo fermentacin de glucosa Produccin de gas sulfhdrico

Kligler
En resumen: La produccin de cido de glucosa se pone de manifiesto en el fondo del tubo por viraje del indicador a amarillo, La de la lactosa en el pico de flauta por viraje al mismo color, La produccin de gas a partir de glucosa por aparicin de burbujas que agrietan el medio La de sulfhdrico por la aparicin de un precipitado negro debido a las sales de hierro presentes.

Fermentacin de carbohidratos

Fermentacin de carbohidratos

Glucosa + con gases

Lactosa +

Sulfhdrico +

Microorganismos Escherichia Coli, Arizona Escherichia Coli, Klebsiella, Enterobacter, Escherichia intermedium Paratyphi B y C, Arizona, Edwardsiella, S. Tiphimurium S. Typhi, Xantomonas, S. Entereditis

+ con gases
+ con gases + solo acidifica

+
-

+ +

+ con gases
+ solo acidifica + solo acidifica + con gases

+ +

Coli, Pr. Morganii, S. Paratyphi A

S. Typhi, Shigella, Vibrio, aeromonas, Serratia, Yersinia Enterocoltica Aeromonas, enterococos Pseudomonas, Moraxella Arizona

Mc Conkey

EMB

CITRATO DE SIMMONS

CITRATO DE SIMMONS
Mide la capacidad de un organismo para utilizar el citrato como nica fuente de carbono Citrato compuesto orgnico constituye uno de los metabolitos del ciclo de Klebs Las bacterias al utilizar citrato extraen nitrgeno de la sal de amonio con produccin de amoniaco que hace vire el indicador

CITRATO DE SIMMONS
Para esta prueba se utiliza el agar de citrato de Simmons que contiene citrato de sodio y azul de timol como indicador. La nica fuente de carbono en este medio es el citrato. Si la reaccin es positiva el indicador vira a azul. En la reaccin negativa los microorganismos no crecen y el medio conserva su color verde

CITRATO DE SIMMONS
El primer paso metablico es Citrato oxalacetato + acetato piruvato+ CO2

Los productos metablicos del citrato dependen del pH del medio A pH alcalino se produce: Citrato CO2 + cido frmico + 2 acetato
No hay lactato

A pH cido Citrato oxalacetato + acetato 2 Piruvato 2 Piruvato

Piruvato+ CO2

acetato + CO2 + Lactato Acetoina + 2 CO2

CITRATO DE SIMMONS

El medio tambin contiene sales de amonio que la bacteria usa como fuentes de nitrgeno

Fosfato de amonio amoniaco alcalinizacin del medio

CITRATO DE SIMMONS

CITRATO DE SIMMONS

CITRATO DE SIMMONS

Descarboxilasas de aminocidos (arginina, lisina, ornitina

Los medios contienen: Peptona Extracto de carne Glucosa Aminocido Purpura de bromocresol

MEDIO DE LIA

Descarboxilasas de aminocidos (arginina, lisina, ornitina

Los aminacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en aminas lo que incrementa el pH del medio y el indicador (prpura del bromocresol) vira a violeta
R CH - NH2 - COOH Aminocido R- CH2 - NH2 + CO2 Amina Dixido de carbono pH alcalino

Descarboxilasas de aminocidos (arginina, lisina, ornitina

Descarboxilacin lisina (LIA y MIO)

Ejemplo:

Aminocido
Lisina

amina + dixido de carbono

lisina descarboxilasa

cadaverina

L- Ornitina

Ornitina descarboxilasa

Putrescina + CO2

Descarboxilacin lisina (LIA)

Descarboxilacin lisina (LIA)

Las descarboxilasas son tiles en la diferenciacin de enterobacterias