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Bioqumica vegetal

Luz Yineth Ortiz Rojas M. Sc.


Las enzimas son protenas
Catalizan reacciones qumicas necesarias
para la sobrevivencia celular
Sin las enzimas los procesos biolgicos
seran tan lentos que las clulas no podran
existir.
Las enzimas pueden actuar dentro de la
clula , fuera de sta, y en el tubo de
ensayo.
E + S ESEP E + P
E
E E E
La enzima disminuye la energa
de activacin
Tiempo de la reaccin
E + S
E + P
Sin enzima
Con enzima
La Ea de la hidrlisis de la urea
baja de 30 a 11 kcal/mol con la
accin de las enzimas, acelerando
la reaccin 10
14
x
El aumento de temperatura
necesario para producir la reaccin
no catalizada seria de 529C
Enzima - Catalizador
Tanto la enzima como el catalizador
aceleran la velocidad de una reaccin
qumica.
Una enzima puede transformar 1000
molculas de sustrato/ segundo
Las enzimas tienen 3 propiedades que los
catalizadores NO tienen
Especificidad por el sustrato
Se inactivan por desnaturacin
Pueden ser reguladas

Las enzimas se unen a los
reactivos (sustratos) reduciendo la
energa de activacin

Cada enzima tiene una forma
nica con un sitio o centro activo
en el que se une al sustrato

Despus de la reaccin, enzimas y
productos se separan.

Las molculas enzimticas no han
cambiado despus de participar en
la reaccin

Las enzimas cumplen su papel cataltico gracias a:
Fijacin estereoqumicamente complementaria
del substrato
Transformacin cataltica del mismo

En ambas funciones participan:

Cadenas laterales de los aminocidos
Grupos o molculas no proteicas:
Grupos prostticos
Iones metlicos
Cofactores
Los siguientes hechos:
Especificidad de la reaccin enzimtica
Carcter heterogneo de la catlisis enzimtica


Nos llevan a postular la existencia de un Centro
Activo en la molcula de enzima, capaz de:

Fijar especficamente al substrato
Transformarlo catalticamente.

Enzima
Sitio activo
Sustrato
Complementariedad geomtrica
Complementariedad de cargas, uniones
inicas
Modelos:
Encaje inducido
Llave cerradura.
Estado de transicin
La unin del sustrato es muy
especfica
Teoras de la accin enzimtica, 1
Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)
Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecfica,
de la misma manera que una llave se ajusta a su
cerradura.

Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se
considera insuficiente al no explicar algunos fenmenos
de la inhibicin enzimtica
Teoras de la accin enzimtica, 2
Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)
Tanto la enzima como el substrato sufren una alteracin
en su estructura por el hecho fsico de la unin.

Est mucho ms de acuerdo con todos los datos
experimentales conocidos hasta el momento.
Teoras de la accin enzimtica, 3
La teora del Ajuste Inducido se ampla en la actualidad
definiendo la accin enzimtica como
Estabilizacin del Estado de Transicin
Segn lo cual, el Centro Activo enzimtico es en realidad
complementario no al substrato o al producto, sino al
estado de transicin entre ambos.
Una enzima puede unir dos
sustratos en su sitio activo
Clasificacin y nomenclatura de
enzimas

EC 2.7.1.1
Nmero Enzyme Commission:
Enzyme
Comission
Grupo
Subgrupo
Nombre comn (sustrato+asa): Hexokinasa
Clasificacin y nomenclatura
ATP: hexosa fosfotransferasa
Nombre sistemtico:
Donador Aceptor
Grupo transferido
Tipo de reaccin catalizada
Grupos
qumicos
Enzimas
EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas
Clasificacin de enzimas por Grupos
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, en que tomos de
oxigeno hidrogeno son trasladados entre molculas:
En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a
la vez el aceptor y el dador electrnico.
AH
2
+ B A + BH
2

Clasificacin y nomenclatura
A
red
+ B
ox
A
ox
+ B
red

Nombre: Dador:Aceptor oxidorreductasa
Nombre comn:
Glucosa oxidasa
|-D-Glucosa : O
2
1-oxidorreductasa
Dador Aceptor
EC 1.1.3.4
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x - Deshidrogenasas
EC 1.2.x - Oxidasas
EC 1.3.x - Peroxidasas
EC 1.4.x - Oxigenasas
EC 1.5.x - Hidroxilasas
EC 1.6.x - Reductasas
etc.
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
A-X + B
A + B-X
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de tomos
grupo de tomos entre molculas:
Dador: Aceptor Grupo transferido - transferasa
ATP: D-Hexosa Fosfotransferasa
EC 2.7.1.1
Nombre comn: hexokinasa
Clasificacin y nomenclatura
Clasificacin de subgrupo de las transferasas:
EC 2.1.x - Grupos monocarbonados
EC 2.2.x - Grupos aldehido o ceto
EC 2.3.x - Aciltransferasas
EC 2.4.x - Glicosiltransferasas
EC 2.5.x - Alquil- o Ariltransferasas
EC 2.6.x - Grupos nitrogenados
EC 2.7.x - Grupos fosfato
EC 2.8.x - Grupos sulfato
EC 2.9.x - Grupos selenio
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Aplicaciones: Sntesis de oligosacridos
Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis y tambin su reverso. Son
las ms comunes en el dominio de la tecnologa enzimtica:
A-B + H
2
O A-OH + H-B
No se suelen utilizar nombres sistemticos en las
hidrolasas. Muchas de ellas conservan el nombre
Primitivo. Ejemplo: Quimosina EC 3.4.23.4.
Clasificacin y nomenclatura
Clasificacin de las hidrolasas:
3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas, fosfoesterasas, sulfoesterasas)
3.2.-.- Glicosidasas
3.3.-.- ter hidrolasas
3.4.-.- Pptido hidrolasas
3.5.-.- Acil anhdrido hidrolasas
etc.
Grupo 3: Hidrolasas
Clasificacin y nomenclatura
Aplicaciones: Lipasas Sntesis de tensioactivos
Proteasas Fabrico de quesos
Glicosidasas Clarificacin de jugos; liberacin de aromas en los
vinos; aplicaciones textiles
Caso particular Pptido hidrolasas: clasificacin comn (no
sistemtica)
I. Segn la situacin del enlace atacado:

- Exopeptidasas (extremos de la cadena) (Peptidasas)
- Endopeptidasas (interior de la cadena) (Proteinasas)

II. Segn el mecanismo cataltico:

- Serin proteinasas
- Tiol proteinasas
- Aspartil proteinasas
- Metaloproteinasas
Grupo 3: Hidrolasas
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remocin de grupo de
tomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):

A-B A + B
Clasificacin y nomenclatura
Ejemplo
Nombre sistemtico:
Histidina amonio-liasa (EC 4.3.1.3)

Nombre comn:
Histidasa
Clasificacin de las liasas:
4.1.x - Actan sobre enlaces C-C
4.2.x - Actan sobre enlaces C-O
4.3.x - Actan sobre enlaces C-N
4.4.x - Actan sobre enlaces C-S
4.5.x - Actan sobre enlaces C-Haluro (S
-
, Cl
-
, Br
-
, I
-
At
-
)
4.6.x - Actan sobre enlaces P-O
4.99.x - Otras liases
Clasificacin y nomenclatura
Aplicaciones: Pectato liasa Remueve los compuestos indeseables (ceras,
pectinas, protenas) en fibras en la industria textil bioscouring
Grupo 4: Liasas
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin moleculares
Clasificacin y nomenclatura
A B
Ejemplo:

Glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5)
5.1.x - Rasemasas y Epimerasas
5.2.x - cis-Trans-Isomerasas
5.3.x - Oxidoreductasas Intramolecular
5.4.x - Transferasas Intramoleculares (mutases)
5.5.x - Liasas Intramoleculares
5.99.x - Otras Isomerasas
Grupo 5: Isomerasas
Clasificacin y nomenclatura
Clasificacin de las isomerasas:
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.).
A + B + ATP A-B + ADP + P
i

Clasificacin y nomenclatura
Ejemplo: Glutationa sintasa (EC 6.2.2.3)


Nombre sistmico:
G-L-glutamilo-L-cisteina:glicina ligase


Grupo 6: Ligasas
Clasificacin y nomenclatura
Clasificacin de las ligasas:
6.1.x - Forman enlaces C-O
6.2.x - Forman enlaces C-S
6.3.x - Forman enlaces C-N
6.4.x - Forman enlaces C-C
6.5.x - Forman enlaces steres fosfricos
6.6.x - Actan sobre enlaces N-metal
COENZIMAS



Fuera de la cadena ptdica requiere de un
un in metlico, molcula orgnica denominada cofatores
Holoenzima = enzima + Coefactor (ACTIVO)
Apoenzima = enzima - coefactor


HOLOENZIMA
Poro protica
APOENZIMA
Grupamento
prosttico
Ativador:ons inorgnicos
que condicionam a ao
cataltica das enzimas. Fe
+
Cofator
Coenzima: molcula
orgnica complexa.NAD+
HOLOENZIMA
Poro protica
APOENZIMA
Grupamento
prosttico
Ativador:ons inorgnicos
que condicionam a ao
cataltica das enzimas. Fe
+
Cofator
E: PM 100000, 7 nm
S: PM 250, 0.8 nm
Cofactor
Orgnico:
Coenzimas
NAD,
FAD,
CoASH.
Inorgnico:
Fe
2+
, Mn
2+
, Zn
2+
,etc.
Grupo Prosttico
Enzimas que requieren
elementos inorgnicos
Citocromo oxidasa
Catalasa, peroxidasa
Fe
2+
, Fe
+
,

Citocromo oxidasa Cu
2+

DNA polimerasa
Anhdrasa carbnica
Alcohol deshidrogensa

Zn
2+


Hexoquinasa
Glucosa 6-fosfatasa
Mg
2+


Arginasa Mn
2+

Piruvato quinasa K
+
, Mg
2+

Ureasa Ni
2+

Nitrato reductasa Mo
2+




Mayoria de molculas orgnicas se derivan de las
vitaminas hidrossolveis
Las cuales son:
- transportadoras de hidrognio
- transportadoras de grupos qumicos
Transportadoras de hidrognio
Cofactores de naturaleza vitamnica

1. Hidrosolubles
Tiamina Tiamina pirofosfato B
1

Riboflavina Flavinas: FAD, FMN B
2

Piridoxal Piridoxal fosfato B
6

Cobalamina Coenzimas cobamdicos B
12

c.Ascrbico Ac. Ascrbico C
Nicotinamida NAD
+
, NADP
+
PP
c.Lipoico Lipoamida
c.Flico Coenzimas folnicos
c.Pantotnico Pantetenas (CoA, p.e.)

2. Liposolubles
Naftoquinonas -Carboxilacin K
Vitaminas que no forman parte de cofactores enzimticos

Liposolubles

Retinoides vit. A
Calciferoles vit. D
Tocoferoles vit. E
Vitamina
Liposolubles
Funcin biolgica Hipovitaminosis
C ( cido
ascrbico)

Coenzima de enzimas peptidasas
intracelulares.
Estimula las defensas contra las
infeccines.
Indispensable para le buen funcionamiento
de las hormonas antiestrs ( de las glndulas
suprarrenales)

ESCORBUTO
B1o Tiamina
pirofosfato
(Antiberibrica)
Coenzima de enzimas descarboxilasas
Fundamental en el metabolismo oxidativo
de los Hidratos de Carbono
BERIBERI(degenerac
in neuronal y
afecciones del
corazn)
B2( Rivoflavina) Forma parte de los coenzimas FAD
Participa en el transporte electrnico,
reacciones redox
Indispensable en la respiracin celular
Mantenimiento de piel y mucosas
La deficiencia de vitamina C causa escorbuto, que se
reconoci por primera vez en los siglos XV y XVI como una
enfermedad grave de los marinos en viajes largos por mar,
pues no tenan acceso a alimentos frescos, incluyendo frutas y
verduras.
Por qu Popeye consume espinacas?

Popeye"el marino"
no consume
espinacas para
obtener fuerza
sobrenatural, no no
no, lo que pasa es
que su consumo est
asociado al rico
contenido de
vitamina c.
Vitamina
Liposolubles
Funcin biolgica Hipovitaminosis
B3 (niacina, c.
Nicotnico o factor
PP)
Antipelagra
Constituyente de los coenzimas NAD,NADP
Interviene en el transporte electrnico,
reacciones redox
Imprescindible para el normal
funcionamiento del SN, piel, lengua y
sistema digestivo
PELAGRA(Enfermed
ad de las tres Ds)
B5 (c.
Pantotnico)
Es uno de los componentes de la CoA
Necesario para la sntesis de hormonas
antiestrs a partir del colesterol.
Sntesis y degradacin de los cidos
grasos.
La formacin de Ac
Sntesis del neurotransmisor acetilcolina
Biotransformacin y detoxificacin de
sustancias txicas
SINDROME DE LOS
PIES ARDOROSOS.
( Dolor, quemazn y
palpitacin de los
pies)
B6 Coenzima de enzimas transferasas
Vitamina
Liposoluble
Funcin biolgica Hipovitaminosis
B9(Ac. Flico) Coenzima de enzimas transferasas
Interviene en la sntesis de purinas y
pirimidinas, por tanto en la snteis de ADN,
ARN y protenas
Factor necesario para la hematopoyesis
ANEMIA
PERNICIOSA
B12
(Cobalamina)
Coenzima de enzimas transferasas de
grupos CH3
Sntesis de ADN, ARN y protenas
Eritropoyesis
Sntesis de neurotransmisores
ANEMIA
PERNICIOSA

Cofactores de naturaleza no vitamnica: ejemplos


Hemo Hemoenzimas, citocromos
Complejos Fe-S Ferredoxinas
Quinonas Tr.electrnico mitocondrial y fotosinttico
Glutatin Redox; transporte de aminocidos
ATP Transf.de fosfato y/o de energa
UTP Transf.de grupos glicosdicos
PAPS Transf.de grupos sulfato
S-AM Transf.de grupos metilo
Carnitina Transportador de grupos acil-
Cofactores redox
Operan en procesos de transferencia electrnica, a veces
como aceptores, a veces como donadores.

- Cofactores piridnicos (NAD
+
, NADP
+
)
- Cofactores flavnicos
- Cofactores hemnicos
- Ferredoxinas
- Quinonas
- c. Ascrbico
- c. Lipoico
- Glutatin
El NAD es una coenzima aceptora de
H
Sustrato
oxidado
O
O
H
H
OH
H
OH
CH
2
H
O P
O
O
-
O P
O
O
-
O CH
2
N
N
N
N
NH
2
OH OH
N
CONH
2
+
O
O
H
H
O
H
OH
CH
2
H
O P
O
O
-
O P
O
O
-
O CH
2
N
N
N
N
NH
2
OH OH
N
CONH
2
P O
-
O
O
-
+
Nicotinamida - Ribosa - P - P - Ribosa - Adenina
NAD
+

NADP
+

N
CONH
2
N
H H
CONH
2
AH
2
A + H
+
NAD
+
, NADP
+

(Formas oxidadas)

NADH, NADPH
(Formas reducidas)

AH
2
+ NAD(P)
+
A + NAD(P)H + H
+

O
-
P
O
O
-
O CH
2
C
C
C
CH
2
OH H
OH H
OH H
N
N
NH
N
H
3
C
H
3
C
O
O
Flavina (Isoaloxazina)
Ribitol
Fosfato
Riboflavina
(vit. B
2
)
FMN: Flavin mononucletido
(Riboflavin fosfato)
O
H
H
OH
H
OH
CH
2
H
O P
O
O
-
O P
O
O
-
O N
N
N
N
NH
2
CH
2
C
C
C
CH
2
OH H
OH H
OH H
N
N
NH
N
H
3
C
H
3
C
O
O
FAD: Flavin Adenin Dinucletido
N
N
NH
N
H
3
C
H
3
C
O
O
N
N
NH
NH
H
3
C
H
3
C
O
O
N
NH
NH
NH
H
3
C
H
3
C
O
O
Forma oxidada
Semiquinona
(Radical libre)
Forma reducida
N
N
Fe
++
H
3
C
CH
2
CH
3
CH CH
2
CH
2
-
OOC
N
CH
3
H
2
C
CH
2
COO
-
N
H
3
C CH
CH
2
Protenas conjugadas
Citocromos
Son protenas de tamao pequeo, que operan como
transportadores monoelectrnicos debido a una transicin
Fe
2+

Fe
3+

Se distinguen tres tipos:

1. Citocromos A: Alto potencial redox (transportadores terminales)
2. Citocromos B: Bajo potencial redox
3. Citocromos C: Potencial redox intermedio

(Se distinguen por su espectro caracterstico de absorcin)
Citocromo c
O
O
OH
OH
AH
2
A
Cofactores quinnicos
Quinona
Hidroquinona
O
O
CH
3
O
O CH
3
CH
3
CH
3
n
Ubiquinona (Coenzima Q)
O
O
OH HO
C
H
2
C
HO
H
OH
O
O
O O
C
H
2
C
HO
H
OH
cido Ascrbico
(vit. C)
A AH
2

S S
COOH
S S
CO
NH
CH
Lys
CO
NH
CH
SH SH
Lys
AH
2

A
Lipoamida
Dihidrolipoamida
c. Lipoico
COO
-
C
+
H
3
N H
CH
2
CH
2
CO NH CH
CH
2
SH
CO NH CH
2
COOH
Glutatin: -Glu-Cys-Gly
(forma reducida, GSH)
COO
-
C H
3
N H
CH
2
CH
2
CO NH CH CO NH CH
2
COO
-
CH
2
S
COO
-
C
+
H
3
N H
CH
2
CH
2
CO NH CH
CH
2
S
CO NH CH
2
COO
-
-Glu-Cys-Gly
S
S
-Glu-Cys-Gly
Glutatin:
forma oxidada, GSSG
2GSH + A
GSSG + AH
2

N
N
H
3
C
CH
2
N
+
S
H
3
C
CH
2
CH
2
O P O P O
-
O
-
O
-
O O
Tiamina pirofosfato, TPP
N
N
H
3
C
CH
2
N
+
S
H
3
C
CH
2
CH
2
OH
Tiamina (vit. B
1
)
N
OH
CH
3
HOH
2
C
CHO
N CH
3
HOH
2
C
CHO
O P
O
O
-
O
-
Piridoxal (vit. B
6
)
Piridoxal fosfato
N CH
3
HOH
2
C
CHO
O P
O
O
-
O
-
N CH
3
HOH
2
C
CH
2
NH
2
O P
O
O
-
O
-
Piridoxal fosfato
Piridoxamina fosfato
N
N
N
N
OH
H
2
N
N
C NH
O
C H
COO
-
CH
2
CH
2
CO OH
H
n
c. Flico
Pteridina
4-amino
benzoico
Poliglutamato
N
N
N
N
OH
H
2
N
N
C NH
O
C H
COO
-
CH
2
CH
2
CO OH
H
n
N
N
N
NH
OH
H
2
N
N
C NH
O
C H
COO
-
CH
2
CH
2
CO OH
H
n
N
N
NH
NH
OH
H
2
N
N
C NH
O
C H
COO
-
CH
2
CH
2
CO OH
H
n
Folato
reductasa
DHF Reductasa
c. Flico
c.Dihidroflico, DHF
c.Tetrahidroflico, THF
Methotrexate
Cobalamina
(vit. B
12
)
NH
2
COCH
2
CH
2
H
H
H CH
2
OH
OH
H
CH
3
CH
3
H
3
C CH
CH
2
NH
CO
CH
2
CH
2
NC
H
3
C
H
H
CH
3
NH
2
COCH
2
H
H
3
C
NH
2
COCH
2
H
3
C
CH
3
CH
2
CONH
2
CH
3
H
H
CH
2
CH
2
CONH
2
CH
3
CH
3
CH
2
CH
2
CONH
2
N
N
N
N
N
O
O
O
P
O
O
N
Co
+
NH HN
S
COOH
NH N
S
COOH
C
O
HO
CO
2

Biotina
Carboxibiotina
CH
2
OH C
CH
3
CH
3
CHOH CO NH CH
2
CH
2
COOH
CH
2
OH C
CH
3
CH
3
CHOH CO NH CH
2
CH
2
CO NH CH
2
CH
2
SH
c. Pantoico |-Alanina
c. Pantotnico
c. Pantotnico Cisteamina
Pantetena
O
H
H
OH
H
OH
CH
2
H
N
N
N
N
NH
2
O P
O
O
-
O P
O
O
-
O
H
3
C CH
3
HO H
C
N
C
N
HS
O
H
O
H
ADP
Pantetena
Coenzima A
O
H
H
OH
H
OH
CH
2
H
O P
O
O
-
O P
O
O
-
O N
N
N
N
NH
2
P
O
-
O
O
-
5- Adenosina trifosfato (ATP)
Cintica Enzimtica
Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto
de cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la
reaccin catalizada.
Las variables ms importantes son:
Concentracin de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
pH
Temperatura
1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:
- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato

2. Sobre la transformacin cataltica del substrato

3. Sobre la estructura de la protena enzimtica
Efecto del pH
Pepsina 1.5
Tripsina 7.7
Catalasa 7.6
Arginasa 9.7
Fumarasa 7.8
Ribonucleasa 7.8
Enzima pH ptimo
Mamferos 37
Bacterias y algas aprox. 100
Bacterias rticas aprox. 0
Enzima Temp. pt.
(
o
C)
Bacterias en muestra de hielo antigua
Estructura
globular
Hervir con HCl
Tripsina
Temperatura elevada
pH extremo
Funcionalidad Inactiva
Efecto de la temperatura en la ENZIMA
Cada enzima tiene una temperatura ptima.
Temperatura
15 40 75
Aumento de la
velocidad
Desnaturacin
por calor
Ella est basada en la medicin de la velocidad de reaccin. As en la reaccin:

Se tendr:







Desaturacin de la enzima con sustrato, por disminucin de la
concentracin del sustrato
Inactivacin de la enzima por su inherente inestabilidad
Inhibicin por el producto
Desplazamiento del equilibrio, si la reaccin es reversible
dt
ds
dt
dp
v = =
E
S P
Baja
concentracin
de sustrato
ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION
v
[s]
Efecto de la concentracin de substrato
.
.
.
.
.
. .
.
dt
t
s
p
[ ]
Concepto de velocidad inicial
d[P]
v =
, t 0
E + S
ES E + P
k
+1

k
-1

k
+2

Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:
Hay un nmero limitado de sitios en la enzima
para fijar substrato; una vez que estn ocupados
todos, por mucho que aumente la concentracin
de substrato, la velocidad permanecer constante
tendiendo a un valor asinttico



Victor Henri (1903): E + S ES


1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
E + S
K1
K-1
ES
Kp
E + P
Etapa rpida Etapa lenta
Hiptesis de Michaelis - Menten
E + S
ES E + P
k
+1

k
-1

k
+2

- La primera parte del mecanismo,
E + S
ES
k
+1

k
-1

Tiene lugar mucho ms rpidamente que la segunda:
ES E + P
k
+2

| || |
| |
( )
K
E S
ES
es
x
e x s
x
m
= = =

0
x
e s
K s
m
=
+
0
v
k e s
K s
m
=
+
+2 0
k e V
+
=
2 0 max
v
V s
K s
m
=
+
max
Hiptesis de
Michaelis-Menten
Equilibrio rpido
v k x =
+2
A partir de las suposiciones de Michaelis-Menten
K
m
+ s
v =
V
max *
s
K
m
y V
max
son caractersticos para cada pareja
enzima-sustrato
Significado de la constante K
m

1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rpido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato
(en condiciones de equilibrio rpido)

3. Mide la funcin de fijacin (en cond.de equilibrio rpido)

4. Concentracin de substrato para la que la velocidad se hace
igual a la mitad de la mxima (s
0.5
)

5. Se define para una pareja enzima-substrato

6. Se mide en unidades de concentracin
Significado de la constante V
max
= k
+2
e
0

1. Velocidad asinttica para s

2. Directamente proporcional a la concentracin de
enzima (hoy se prefiere caracterizar a la enzima
por k
+2
)


3. Mide funcin de transformacin cataltica

4. Se expresa en unidades de velocidad
Relacin entre Km y Vmax
Michaelis y Menten
Concentracin de Sustrato [S]
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

l
a

r
e
a
c
c
i

n

(
v
)

Km
Vmax
Vmax/2
La Km es la concentracin de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
Concentracin de Sustrato [S]
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

l
a

r
e
a
c
c
i

n

(
v
)

Km
Vmax
Vmax/2

A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato
A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato
Representacin directa
s
0 20 40 60 80 100
v
0
20
40
60
80
100
K
m

V
max

v
V s
K s
mx
m
=
+
Representacin recproca doble
(Lineweaver - Burk)
1/s
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
1 1 1
v
K
V s V
m
mx mx
= +
-1/K
m

1/V
max

Representacin Lineweaver-Burke
Supongamos que una enzima con dos centros activos y
un peso molecular 10.000, cataliza la reaccin de un sustrato.
Determinar
a) Velocidad Mxima
b) Km
c) Actividad mxima especfica
d) Concentracin en el centro activo
e) Nmero de recambio
Si se agrega 2mg de la protena por Litro, se encontr los siguientes valores:

[S] Velocidad de reaccin
mM M/min
3 18
4 22
9 40
13 50
25 67
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 5 10 15 20 25 30
[S] Velocidad de reaccin 1/ [S] 1/v
mM M/min
3 18 0,33 0,055
4 22 0,25 0,045
9 40 0,11 0,025
13 50 0,076 0,02
25 67 0,04 0,015
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35
1/km
1/v
a) Vmx = 1/0,01 Vmx = 100 M/min
b) Km = 1/ 0,075 Km= 13,33 M
c) Actividad mxima especfica = Vmx / [E]
100 M/min / 2mg = 50M/min.mg

d) Concentracin en el centro activo = No. Subunidades . ([E]) / P.M
C.C.A 2(2x10-4g) / 10.000g/mol
4x10-8 mol

e) Nmero de recambio = Vmx / C.C.A
100 M/min / 4x10-8 mol
2,5EX 9 M/min.mol


El "nmero de recambio o Kcat, es una relacin de afinilidad que tiene la enzima
con el sustrato. Muestra la eficiencia impresionante de la catlisis enzimtica.

Representa las moles de sustrato atacados por un mol de enzima
en una unidad de tiempo determinada, generalmente un minuto.

Unidad Internacional= cantidad de enzima necesaria para transformar un micromol
de sustrato por minuto. 1 U= 1 mol/min.
Definicin Actividad Enzimtica
Es el nmero de moles de sustrato que reaccionan para
formar producto, por mol de enzima y por unidad de
tiempo. Esto supone que la enzima est plenamente
saturada con sustrato y por tanto que la reaccin se
efecta con su mxima rapidez
El ndice de recambio muestra la eficiencia
impresionante de la catlisis enzimtica
Clculo de Actividad Enzimtica
La velocidad de reaccin catalizada por 0,1ml
de una dilucin 1:100 de Fosfatasa Alcalina es
0,3umoles / min. de producto. Cul es su
actividad enzimtica?
0,1ml-------- 0,3umoles producto / min.
1,0ml------------3,0umoles producto / min.
dil 1:100-------------300umoles producto / min.
Respuesta: 300U/ml
En el efecto de la temperatura hay dos componentes:
1. Aceleracin de la reaccin segn la ecuacin
de Arrhenius

k = A exp (-E
a
/RT)

2. Desnaturalizacin trmica de la protena
ORGANISMOS TERMFILOS
Son organismos que viven a altas t y realizan
sus reacciones enzimticas a estas altas t
Ejemplos son los que viven en las aguas
termales
Es tema de investigacin el aislamiento de las
enzimas de estos organismos para desarrollar
procesos industriales en condiciones ms
extremas
Inhibicin enzimtica

Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica

De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.
Inhibicin enzimtica
isostrica
Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:
1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E + I EI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:
E + I
E
ES + I
ESI
Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva

(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva
Inhibidores Competitivos
Compiten con el sustrato por el sitio activo
de la enzima
Se une solo a la enzima libre
V
mx
no se altera y K
M
cambia
Inhibicin competitiva
K
M
aparente es mayor que K
M
real
V
mx
no se modifica
Cuanto ms pequeo sea el valor de Ki mayor ser la potencia del inhibidor
Al aumentar la cantidad de SUSTRATO
el inhibidor competitivo es desplazado y se forma producto
E
ES
EI
I
S
E + P
Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato
Se define una constante de
equilibrio de disociacin del
inhibidor:
K
i
=
[E] [I]
[EI]
Km
Sin
inhibidor
Km
con
inhibidor
Sin inhibidor
Con inhibidor
El inhibidor competitivo
aumenta la Km
1/s
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
-1/K
m

-1/(K
m
(1 + i/K
i
))
1/V
max

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble
Ejemplo Inhibidor Competitivo
cido succnico + FAD == cido fumrico
+ FADH
2

El inhibidor competitivo es el cido
malnico
Es un anlogo estructuralmente parecido
al cido succnico
cido Flico y Sulfanilamida
La sulfanilamida es un anlogo estructural
del cido p - aminobenzoico (PABA)
PABA es el punto de partida para la
sntesis de cido flico en las bacterias
El cido flico es una vitamina esencial
para la proliferacin (divisin) bacteriana
Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones
Inhibidor competitivo
su estructura es similar a la del sustrato
No se forma producto
Inhibicin no-competitiva
Inhibidor No Competitivo
Se une a un lugar diferente del sitio activo
la enzima
Se une a la enzima libre y tambin al
complejo enzima-sustrato
Por accin del inhibidor disminuye la V
m

pero el valor de K
m
no se altera
E ES
EI
I
S
E + P
I
ESI
S
Inhibicin
No Competitiva
El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E
y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
Inhibicin acompetitiva
Inhibicin enzimtica

Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica

De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.
Inhibidor Irreversible
Malatin

Acetilcolinesterasa
Tripsina
Elastasa
Fosfoglucomutasa
Cocoonasa (larvas de
gusanos de seda

Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)