You are on page 1of 62

LOGO

Avances en el Diagnostico del VIH

Integrantes

• • • •

Costa Quispe, Melissa Chacolla Huaringa, Rafael Julián Dávila Cayhualla, Elisa Palomino Poma, Edda Libertad

Estructura del VIH

VIH Genes y su Función Tres grupos de genes estructurales
  
env: Glucoproteìnas de transmembrana y superficie. pol: transcriptasa reversa,integrasa y proteasa. gag: antígeno de grupo, proteínas de matriz y cápside.

VIH Genes y su Función

VIH Genes y su Función Genes reguladores :
       tat: rev: vif: vpr: vpu (VIH-1) : Vpx (VIH-2) : nef : regulador de expresión vira regulador expresión mRNA incrementa la infectividad viral replicación viral liberación viral infectividad viral regulador inmunológico

CICLO DE VIDA DEL VIH

LOGO

Métodos

Pruebas de tamizaje
Objetivo

Detectar la presencia de anticuerpos anti - VIH

Objetivo de la prueba Selección de la técnica depende Sensibilidad y Especificidad Prevalencia de la infección VIH en población estudiada. estudiada

Pruebas de tamizaje del VIH

ELISA Pruebas Dot-blot Pruebas de Aglutinación

Pruebas Inmunocromatograficas

Prueba de ELISA

 Prueba para la detección
o la cuantificación de un anticuerpo o un antígeno mediante un ligando (por ejemplo una antiinmunoglobulina) conjugada con una enzima que cambia el color de un sustrato.

ELISA Indirecto

Solid Phase   Complex

Antigen  

Enzyme  Conjugate      Sandwich

ELISA COMPETITIVO

Solid Phase    Antigen   Enzyme-labeled Antigen   Product

Reaction

Anti-HIV 1+2 (mejorados), ademas detecta el antigeno p24

EIA/ELFA 4ª generación

Anti-HIV 1+2 (mejorados)

EIA/ELFA 3ª generación

Anti-HIV 1+2

EIA 2ª generación
Anti- HIV

EIA 1ª generación

Pruebas DOT BLOT

Prueba rápida

Prueba de aglutinación
PRUEBA RÁPIDA

Principio: Formación de complejos inmunes en la superficie de partículas (soporte sólido)

Inmunocromatografía
Muestra: Suero (Anticuerpos a IgG) Conjugado: Oro Coloidal conjugado a antígeno de VIH
Control Antígeno de VIH

PRUEBA RÁPIDA

“Flujo lateral en el dispositivo: CORE
HIV”

Línea de control: Anticuerpos Anti-IgG/Oro coloidal prueba: Antígeno de Línea de VIH

* La muestra fluye a lo largo de la membrana y los anticuerpos anti-VIH (si están presentes) se unen al antígeno de VIH conjugado al oro coloidal formando una banda roja visible. * Los anticuerpos anti-IgG/Oro Coloidal en la línea control se une a cualquier partícula de Oro coloidal no unido formando una banda roja visible.

Procedimiento Core-VIH
PASOS A SEGUIR: 1. Codificación del test 2. Añadir 2 gotas de suero, plasma o sangre total en el pocillo marcado como A 3. Añadir 5 gotas de buffer en el pocillo B Positivo 4. Lectura e interpretación a los a VIH-1 15 minutos INTERPRETACION CORE - VIH
C T A B REACTIVO NO REACTIVO

Contro reactiv o

C

T

A

B

Pruebas confirmatorias

Western Blot

Inmunofluorescenci a Inmunoensayo en Linea

Inmunofluorescencia

LIA
Identificación y localización de los antígenos y controles recubiertos en la tira.

Controles internos

CN ( estreptovidina) CP ( Línea intensa = 3+) CP (Línea moderada = 1+ ) CP ( Línea débil = +/ - )

Antígenos

sgp 120 gp 41 p31 p24 p 17 sgp 105 gp 36

CONTROL POSITIVO

WESTERN BLOT

Técnica utilizada para la detección de anticuerpos

Prueba específica y determina que proteínas del patógeno son reconocida por el sistema inmune.

Principio de Western Blot
Tiras de Nitrocelulosa con proteínas virales separadas por Electroforesis  Detección de Ac. Muy especifica, poco sensible

PRINCIPALES BANDAS DEL WESTERN BLOT Denominación gp160 gp120 gp41 p55 p40 p24 p17 p66 p51 p31 Endonucleasa Proteína principal Proteína de la matriz Transcriptasa inversa pol Proteína Precursora de la envoltura Glucoproteína externa Glucoproteína transmembrana Precursora del core gag Gen env

CRITERIOS MÍNIMOS DE POSITIVIDAD DEL WESTERN BLOT FDA Existencia por lo menos de tres bandas: p24, p31 y gp41 u otra glucoproteína Existencia de al menos 3 bandas una por cada uno de los 3 genes estructurales Al menos dos bandas: p24, gp41 y gp160/120 Al menos una banda del core (gag/pol) y otra de envoltura (env) Al menos dos bandas de envoltura

ARC

CDC CRSS

OMS

Métodos Directos

Detección de Antígeno p24

 La detección del antígeno del VIH-1, usualmente la      

proteína p24, es un marcador directo de la presencia del virus en el organismo. La cuantificación del antígeno p24 en el suero es la prueba más barata y sencilla para obtener una información de la cantidad de virus circulante. La antigenemia se ha utilizado para predecir la evolución clínica de individuos asintomáticos. Monitorización de la respuesta a antirretrovirales. Diagnóstico precoz de la infección aguda por VIH-1. Diagnóstico de la infección por vía vertical. Reconocimiento de la replicación viral en cultivos celulares.

Detección de Antígeno p24

Cultivo viral
IL-2
LT CD4

IL-2

Ag 24
Cel.Mononucleares

Cultivo Viral
 Las aplicaciones en la práctica clínica del cultivo     
viral, que realmente es la técnica más específica de diagnóstico, son: Infección pediátrica. Infección silente. Estudios de variabilidad genética y epidemiología molecular. Sensibilidad a antirretrovirales. Además el cultivo viral es la herramienta imprescindible para la caracterización biológica de las diferentes cepas del VIH-1.

Prueba del ADN Proviral Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Provirus

Reacción en cadena dela polimeraza (PCR)

Prueba del ADN Proviral Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• La PCR es un método altamente sensible que nos permite amplificar por lo menos 1 copia de ADN proviral. • El cultivo viral y la PCR son las técnicas más utilizadas, permitiendo detectar entre el 30-50% de los neonatos al nacer, y entre el 80-100% dentro del primer mes de vida.

• Es muy utilizada para:

 Diagnosticar primo infección por el HIV-1 (período ventana)  Resolución de la infección en casos indeterminados  Vigilar terapia antiretroviral  Diagnosticar infección por HIV en niños  Diferenciar infección por HIV-1 y HIV-2 diferenciación de subtipos.

La saliva como medio de Dx de VIH
 La saliva es un ultrafiltrado del plasma donde se puede
encontrar IgG (llega a la cavidad bucal como transudado de suero de la mucosa bucal transudado de suero) e IgA (glándulas salivales).  En la saliva se puede encontrar Ac para el VIH, es en ello que se basan las pruebas de Dx. usando saliva.

   

Ventajas: Es un método no invasivo, no necesita refrigeración. Ayuda geriátricos y RN con exámenes Cte.. aplicados en zonas geográficas inaccesibles (estudio).

Prueba rápida de detección de anticuerpos anti VIH1/2.

Prueba rápida de detección de anticuerpos anti VIH1/2.
 No
ha sido ha sido aprobada para la detección en donantes de sangre u órganos.  Es un inmunoensayo cualitativo para detectar anticuerpos contra el VIH-1 y VIH-2 en muestras de fluido oral, sangre por punción en pulpejo de dedo u obtenida por venopunción y plasma.

OraQuickAdvance HIV-1/2

No pasar por el paladar, la lengua o mejillas

La S.R. permite el flujo de la muestra al dispositivo y al tira de prueba con para rehidratar el reactivo calorimétrico Ac contra Ag inmovilizados de la membrana de nitrocelulosa línea de color rojo-púrpura (cualitativo)

15ºC – 37ºC.

Resultados:

Una línea de color rojo junto a “C” Una línea de color rojo junto a “T” Independiente de la tonalidad de la línea

Uni-Gold Recombigen

 Para muestras de pulpejo de dedo suero o plasma.  La prueba sale en 10 minutos.  Para VIH-1

Se coloca una gota de la muestra y luego 4 gotas de la “solución reveladora”.

Reveal G2
 Prueba de moderada
complejidad con suero y plasma, requiere refrigeración para DX de HIV-1; T 5”

Obtener suero o plasma mediante centrifugación.

MultispotHIV-1/HIV2

Algoritmo - VIH
Muestra: Suero / Plasma

ELISA
Reactivo Indeterminado No reactivo

2° ELISA
Reactivo Indeterminado No reactivo

Pbas. Confirmatorias
Positivo Negativo

IFI / WB

Indeterminado Control en 3 meses / PCR

Actualidad del VIH

¿Cuál es el problema?

En un sujeto infectado se producen en promedio aproximadamente diez billones de viriones por día y, en promedio, aparece una mutación por cada 9200 bases copiadas del ADN viral.

Diversida d genética

¿Cuáles son las consecuencias?

Comportamiento viral

Virulencia

Respuesta a la terapia antirretrovira l Citotoxicidad

Las mutacione s

Capacidad de replicación

Competencia

¿Lo peor es?

Diversidad Genética

Resistencia a la terapia empleada para su tratamient o

La ineficaci a de las vacunas

El Problema

 La consecuencia más importante de la variación
genética que acompaña a la dinámica de la replicación del VIH es la adquisición de resistencia a la terapia empleada para su tratamiento, pues esto hace posible que surja una mutante resistente a un medicamento diariamente.

 Desde el punto de vista genético los virus están
provistos de una gran capacidad de adaptación a los cambios introducidos en su medio natural. El VIH fundamenta esta cualidad en diversos mecanismos, entre los que cabe destacar tres: 1
La retrotranscriptas a que transcribe el ARN a ADN, no cuenta con un sistema para reparar los errores

2
Tanto las proteínas estructurales como aquellas con actividad funcional poseen una notable plasticidad funcional

3
El virus presenta una alta tasa de replicación, que permite generar del orden de 1010 «nuevos» viriones cada día

¿Otro problema es?

 El

desarrollo de una vacuna se ha visto enormemente dificultado. Si estudiamos la historia natural de la infección por el VIH comprobamos que tras su penetración en el individuo, el sistema inmune responde de forma aparentemente adecuada, elaborando una respuesta inmune humoral y celular, que no es capaz sin embargo de parar la evolución de la infección.

 1. 2. 3. 4. 5. 6.

La siguiente lista resume los principales enfoques de la vacuna: Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas recombinantes de subunidades recombinantes de vectores de ADN de combinación vivas atenuadas enteras inactivas

0

Consideraciones finales

 La pandemia del SIDA/VIH se perfila como
uno de los problemas más agudos de la salud pública mundial de este milenio. La dinámica mutacional del VIH-1 asociada con factores ambientales naturales o impuestos, hace casi imposible en las condiciones actuales, la cura de esta enfermedad.

Encontrada mutación del VIH en Nueva York
17 de febrero de 2005  Nueva York, Estados Unidos – Una mutación resistente y de acción rápida del VIH, virus causante del sida, se detectó en Nueva York.  Esta cepa, llamada 3-DCR HIV, progresa más rápido que otras formas del virus. En el caso del hombre infectado, cuya identidad se mantiene en reserva, el virus fue diagnosticado a mediados de octubre y se había desarrollado completamente a mediados de enero, tres meses después, cuando normalmente la infección con VIH puede tardar hasta 10 años para convertirse en sida. El enfermo habría confesado haber tenido relaciones sexuales sin protección con varios compañeros.

Encontrada mutación del VIH en Nueva York

 El Dr. Ronald O. Valdiserri, director del programa

de prevención del sida en el Centro para Control y Prevención de Enfermedades (CDC), dijo al New York Times que esta nueva forma del virus es única por el rápido avance de la enfermedad y su resistencia a los tratamientos farmacéuticos actuales. A pesar de ser un caso aislado, el CDC ya envió una alerta nacional a los departamentos de salud de todos los estados de la Unión Americana.

LOGO

Lo que puedes hacer, o has soñado que podrías hacer, debes comenzarlo. La osadía lleva en sí, Thanks… genio, poder y magia.