Biologia Molecular

Ana Helena F. Ferreira

21/08/2007
 Descoberta do DNA
 A descoberta do DNA ocorreu em 1869 e foi feita
pelo bioquímico alemão Johann Friedrich Miescher
(1844 - 1895). Miescher buscava determinar os
componentes químicos do núcleo celular e usava os
glóbulos brancos contidos no pus para suas
pesquisas. Os glóbulos brancos eram um bom
material pois são células que apresentam núcleos
grandes e fáceis de serem isolados do citoplasma.
Além disso, o pús era muito fácil de se conseguir na
época em ataduras usadas em ferimentos.
 Analisando os núcleos, Miescher descobriu a
presença de um composto de natureza ácida que
era desconhecido até o momento. Esse composto
era rico em fósforo e em nitrogênio, era desprovido
de enxofre e resistente à ação da pepsina (enzima
proteolítica). Esse composto, que aparentemente
era constituído de moléculas grandes, foi
enominado, por Miescher, nucleína. Essa
substância foi isolada também da cicatrícula da
gema do ovo de galinha e de espermatozóides de
salmão.
 Em 1880, um outro pesquisador alemão,
Albrecht Kossel (1883 - 1927), demonstrou
que a nucleína continha bases nitrogenadas
em sua estrutura, explicando o fato da
nucleína ser rica em nitrogênio. Nove anos
depois, Richard Altmann (1852 - 1900), que
era aluno de Miescher, obteve a nucleína
com alto grau de pureza, comprovando sua
natureza ácida e dando-lhe, então, o nome
de ácido nucléico.
A partir daí, o material mais utilizado para
estudo e obtenção do ácido nucléico passou
a ser o timo de bezerro, cujo tecido
apresenta células com núcleos grandes. Foi
descoberto que a degradação do ácido
nucléico do timo, chamado de ácido
timonucléico, liberava quatro tipos de bases
nitrogenadas:
 dois tipos de bases púricas: adenina e guanina
 dois tipos de bases pirimídicas: citosina e timina

 Foi demonstrado também que um outro produto da

degradação do ácido nucléico era um glicídio com 5
átomos de carbono, uma pentose, no caso uma
desoxirribose. O fósforo estava presente na forma
de um derivado do ácido fosfórico, fosfato. Tinha-se
até o momento que o ácido nucléico era composto
de bases nitrogenadas (púricas e pirimídicas), de
um glicídio (pentose) e de fosfato.
 Em 1890, foi descoberto em levedura
(fermento) um outro tipo de ácido nucléico,
que possuía uracila ao invés de timina e
ribose ao invés da desoxirribose. Dessa
maneira, foram caracterizados dois tipos de
ácidos nucléicos, de acordo com o glicídio
que possuíam:
 - ácido ribonucléico (RNA)

 - ácido desoxirribonucléico (DNA)

 Em 1912, Phoebus Levine (1869 - 1940) e
Walter Jacobs (1883 - 1967) concluíram que
o componente básico dos ácidos nucléicos
era uma estrutura composta por uma
unidade que se constituía numa base
nitrogenada ligada a uma pentose, e esta por
sua vez, ligada a um fosfato. Esta unidade foi
denominada de nucleotídeo.
 Um ácido nucléico seria então uma molécula
composta por vários nucleotídeos unidos
entre si, ou seja, um polinucleotídeo.
 Os estudos dos ácidos nucléicos
continuaram por muitos anos sem que os
cientistas soubessem de sua importância
como material hereditário, descoberta que só
foi realizada muitos anos depois.
DNA como material hereditário
 A hipótese de que o DNA era a molécula que
continha as instruções hereditárias foi levantada
anos após a descoberta de sua existência no
núcleo das células.
 Dois clássicos experimentos contribuiram para isso.
O primeiro deles foi a identicação do material
hereditário em bactérias, que levou à conclusão, em
1944, de que o princípio transformante das
bactérias era o DNA.
 O outro experimento foi o da identificação do
material hereditário de fagos, que, em 1952, revelou
que apenas o DNA do fago penetrava e se
multiplicava nas bactérias gerando novos fagos.
 Após a descoberta de que o DNA era o material
hereditário, iniciou-se uma série de pesquisas que
buscavam elucidar sua estrutura, e entender quais
características permitiam ao DNA ser o banco de
memória da informação hereditária.

 Foram realizados experimentos que levaram a

proposta do modelo da dupla hélice do DNA (1953),
experimentos que evidenciaram a replição
semiconservativa (1958) e um experimento que
permitiu a visualição da replicação do cromossomo
bacteriano (1960).
 ESTRUTURA E FUNÇÃO DOS
GENES
Genoma - DNA

 1865, GREGOR MENDEL – Monge

austríaco, pai da genética. Estudou
ervilhas e formulou os princípios
fundamentais da hereditariedade
 1909, Johannsen – GENE
 1953, WATSON e CRICK - determinaram
a estrutura tridimensional do DNA
 DESCOBRINDO A BIOLOGIA
MOLECULAR
 1957, Francois e Jaques Monod do instituto
Pasteur/Paris conseguiram isolar o RNA
mensageiro
 1964, Robert Holley conseguiu as primeiras
seqüências de DNA
 1975, Walter Fiers conseguiu a seqüência
completa de um cromossomo do fago MS 2
 GENOMA HUMANO
 Cerca de 6 bilhões de pb.
 23 pares de cromossomos
 Aproximadamente 30.000 genes
 Controlam a embriogênese,
desenvolvimento, crescimento,
reprodução e metabolismo do
ser humano
A influência dos genes no estado de
saúde e doença é ampla
 A caracterização, organização e o
conhecimento do funcionamento
dos genes ainda está sendo
pesquisada.
 Compreensão dos processos
fisiológicos do organismo saudável
e doente.
CONSTITUIÇÃO DA MOLÉCULA
DO DNA / RNA

Seqüências de BASES
NITROGENADAS
DNA RNA

Adenina - Timina Adenina - Uracila

Guanina - Citosina Guanina - Citosina

 NUCLEOTÍDEOS

 Grupo fosfato
 Ose
 Ribose (RNA)
 Desoxirribose (DNA)

 Base nitrogenada
 Purina: Adenina e Guanina (DNA/RNA)
 Pirimidina: Citosina e Timina (DNA)

Uracila (RNA)
 DNA RNA

Açucar Desoxirribose Ribose

Base A, C, G, T A, C, G, U
Nitrogenada
dupla hélice (exceção: fita única, não
Estrutura na replicação), espiralizada e
Secundária espiralizada e com sem pontes
pontes de hidrogênio
hidrogênio
autoduplicação e síntese protéica
Funções síntese protéica (RNAm; RNAt e
RNAr)
 Replicação
 Uma característica essencial à continuidade
da vida em nosso planeta é a capacidade
que os organismos tem de fazerem cópias de
si mesmos.
 Essa capacidade de copiar está associada
ao material hereditário, o DNA.
 Agora, de que maneira os organismos
fazem as cópias?
 Essas cópias são feitas através da
duplicação do material hereditário, ou seja,
do DNA.
 Esse processo de duplicação do DNA,
chamamos de replicação.
 Em 1953, Watson e Crick propuseram um
modelo para o DNA, e também sugeriram um
mecanismo para sua replicação.
 A compreensão desse processo vem aumentando e
hoje em dia a ciência tem uma boa idéia de como
se dá o processo de replicação do DNA.
 Descobriu-se que ocorrem erros no processo de
replicação e que, se esses erros não forem
corrigidos pelas polimerases (A enzima que catalisa
a formação de um novo DNA e RNA a partir de uma
molécula existente de DNA ou RNA.), eles se
perpetuam na forma de mutações.
 Além disso, o DNA sofre continuamente
danos causados por agentes externos físicos
e químicos. As células tem um mecanismo
sofisticado para reparar esses danos, mas,
entretanto, alguns permanecem e se
perpetuam também na forma de mutação.
 Essa baixa taxa de mutação, é, no entanto,
fundamental para a evolução, pois é através
dessas falhas que novos alelos se formam.
 O processo de replicação do DNA envolve a
participação de diversas enzimas, entre elas, as
polimerases. Elas atuam no processo da síntese da
nova molécula de DNA.
 Mas, como a síntese ocorre?
 A síntese semi-conservativa do DNA precisa que
desoxirribonucleotídeos livres, sejam posicionados
sobre uma cadeia polinucleotídica molde, e estejam
unidos entre si, formando uma nova cadeia
complementar à cadeia mãe que serve como
molde.
 A enzima que atua nesse processo é a polimerase.
 Desoxirribonucleotídeo
 Um desoxirribonucleotídeo é um nucleotídeo
composto por uma desoxirribose, uma base
nitrogenada e um ou mais grupos fosfato.
 O desoxirribonucleotídeo trifosfatado é
composto por 3 grupos fosfato.
 Um nucleotídeo consiste de uma base nitrogenada,
um açúcar com cinco átomos de carbono e um ou
mais grupos fosfato.
 Dependendo do açúcar que compõe o nucleotídeo,
podemos ter um ribonucleotídeo, se o açúcar for a
ribose, ou um desoxirribonucleotídio, se o açúcar
for a desoxirribose.
 Como as polimerases foram identificadas e classificadas?

 Em 1957, a primeira enzima capaz de polimerizar

desoxirribonucleotídeos trifosfatados (dNTPs) à medida em que
eles se ordenam sobre a cadeia polinucleotídica (molécula
molde), foi extraída da bactéria Escherichia coli.

 Mais tarde descobriu-se mais duas enzimas também capazes de

catalisar a síntese do DNA. Elas foram denominadas
polimerases do DNA e identificadas por números romanos de
acordo com a ordem de sua descoberta.

 As polimerases e outras enzimas foram identificadas e

caracterizadas em mutantes bacterianos deficientes em
replicação.