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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA

“ELECTROFORESIS” Presenta: Ramírez Gutiérrez Erick Alán

estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos . peso molecular y estructura tridimensional. en dependencia de una combinación de su carga.Electroforesis  La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico.y +). .

 Dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico. estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta.  .

 Sirven como método de separación de mezclas complejas de ácidos nucleícos. proteínas y otras biomoléculas.Es de destacar que a escala analítica.  . los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad. poder de resolución y versatilidad. donde aportan un potente criterio de pureza.

  Los geles de poliacrilamida se forman por polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador. de propiedades uniformes. capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible.Electroforesis en gel de poliacrilamida. Forma. geles transparentes con estabilidad mecánica. además. insolubles en agua. . relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. es químicamente inerte.

 Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros. . lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad. se puede modificar de manera controlada en el tamaño del poro.

Poseen la propiedad de permanecer líquidas por encima de 50º C y formar un gel.Electroforesis en geles de agarosa. pero de composición homogénea). que retarda el paso de las moléculas Se usa usualmente para separar moléculas grandes de alrededor 20.     La agarosa es un polisacárido (originalmente obtenido de algas. como el agar-agar.5 a 2 %). . semisólido al enfriarse.000 nucleótidos. cuyas disoluciones (típicamente de 0. Este gel esta constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio líquido.

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cuando se aplica un campo eléctrico de 1 V/cm.Velocidad de migracion y velocidad molecular  La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula. o sea. a la resistencia que le ofrece el medio. del voltaje aplicado y de la porosidad del gel de electroforesis. V=qE/f La movilidad electroforética (Me) es un caso particular de la velocidad de migración de un ión. Su signo es igual al de la carga de la partícula.  La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso).  .

La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas. La carga neta de la partícula está dada por el pH del medio y puede ser modificada por la interacción con pequeñas moléculas de iones u otras macromoléculas. por causa de la difusión por tiempo muy prolongado de la corrida electroforética. En contraste. .   El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación. ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y catiónicos capaces de disociarse.

. y por encima del punto isoeléctrico tienen carga neta negativa y migra hacia el ánodo. esta no migra. Por debajo del punto isoeléctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el cátodo. En el punto isoeléctrico de la biomolécula. pH al cual su carga neta es 0.

 Por lo tanto la velocidad será:   Esta velocidad se alcanza a los pocos segundos. Se asume que la partícula es esférica y a partir de la Ley de Stokes se obtiene que: Donde R es el radio de la esfera. . por consiguiente se puede concluir que es constante durante todo el experimento. ν su velocidad y η la viscosidad del fluido.

A partir de la ecuación de velocidad se obtiene que:   Que también puede ser expresada por: . La movilidad molecular (μ) es una magnitud característica de la partícula o molécula que refleja la velocidad relativa a la fuerza del campo.

. La movilidad depende de la carga de la partícula que. Por esta razón es necesario indicar el electrolito o el pH utilizado para determinar la movilidad. depende del pH del medio en el que se encuentre.  Donde Z el número de electrones y es la carga del electrón. a su vez.

Factores que afectan la electroforesis  En general la electroforesis depende directamente del campo eléctrico y este depende de distintos parámetros. . Basándose en la ley de Ohm se tiene que: V= IR  Diferencia de potencial (V): define el campo eléctrico. se relaciona directamente con la distancia recorrida por las moléculas. Resistencia (R): la movilidad de las moléculas es inversamente proporcional a ella. Intensidad (I) : cuantifica el flujo de carga eléctrica. la velocidad de avance es directamente proporcional a ella.

. Por lo tanto.  Por último. otro factor que afecta significativamente a la electroforesis es la temperatura. esta es importante puesto que por el efecto Joule el paso de una corriente eléctrica va a producir calor y este es directamente proporcional a la diferencia de potencial y a la resistencia. es necesario controlar de manera estricta la temperatura para que esta no afecte a la muestra desnaturalizándola.

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