Elemente de biofizica hemoglobinei

Curgerea sangvina si modelul compartimentelor inseriate

Elemente de biofizica hemoglobinei

Hemoglobina este un constituient major al hematiilor, celulele care de in ponderea principal n compozi ia sngelui. Constituit din dou faze, plasma i elementele figurate, sngele este un fluid complex, care mpreun cu limfa i lichidul intersti ial formeaz mediul intern al organismului. Sngele reprezint 6-8% din greutatea corporal i con ine elemente figurate n propor ie de 40-45%.

 Principalele elemente figurate sunt eritrocitele (99%) leucocitele (celulele albe) :granulocite (65% din totalul leucocitelor); :limfocite (30% din totalul leucocitelor); :monocite (5% din totalul leucocitelor); plachete (trombocite). Plasma sangvin este alc tuit din 90% ap i 10% reziduuri uscate, din care 9% substan e organice i 1% substan e anorganice). Substan ele organice sunt: proteinele (albumina, globulinele, fibrinogenul,...), lipide (colesterol, fosfolipide,...), glucide (glucoza, ...), acizi organici (acid lactic, acid citric,...), pigmen i serici (bilirubina, urobilinogenul,...), enzime (amilaza, lipaza, fosfataza alcalina...), vitamine (A, D, E, PP, B1, B2, B6, B12, C, ...), hormoni (estrogeni, oxicorticoizi, ...). Substan ele anorganice sunt: sodiul, potasiul, calciul, magneziul, fierul, cuprul, zincul, manganul, clorul, acidul carbonic, ionul sulfat, bromul, iodul, fluorul, etc.

Structura i func iile hemoglobinei

n situa iile fiziologice normale hemoglobina prezent n citoplasma celulelor ro ii ale sngelui - eritrocite (hematii) reprezint o treime din greutatea celulei. La fiecare 194 de zile toat cantitatea de hemoglobin se rennoie te, fiind sintetizat la nivelul m duvei osoase i n ficat (n organismul adult rolul ficatului pentru sinteza de hemoglobin este mult mai pu in important dect pentru embrion) i degradndu-se pn la bilirubin care se excret n c ile biliare i se elimin din organism sub form de stercobilin i urobilin . Comparativ cu alte componente ale sngelui, greutatea molecular , m rimea i forma moleculei de hemoglobin pot fi urm rite n tabelul i desenul de mai jos

Greut ile moleculare i dimensiunile maxime ale hemoglobinei i altor biomolecule

Molecula Uree Hemoglobin ADN Greutatea molecular (da) 60 68.000 10.000.000 Dimensiunea maxim (angstrom) 4 42 10.000.000 (1 micron)

Hemoglobinele izolate de la diferite specii de animale con in globine diferite (partea proteic diferit ) dar aceea i grupare prostetic : hemul. Structura hemoglobinei, se bazeaz pe un nucleu porfirinic, tetrapirolic, centrat pe un atom de fier: hemul, la care se leag partea proteic , globina, care poate s difere de la o specie la alta.

 Globina se ata eaz la atomul de fier din centrul hemului, aproximativ perpendicular pe planul hemului, de cealalt parte legndu-se liganzi ca oxigenul, dioxidul de carbon, etc. Nucleul porfirinic con ine 20 de atomi de carbon i 4 atomi de azot; la hemoglobine (hemoglobin , oxihemoglobin , caroxihemoglobin , etc.) n centrul nucleului molecular profirinic este legat un atom de fier; la moleculele clorofilelor (clorofila a, clorofila b, clorofila c, ) n centrul acestui nucleu este plasat un atom de magneziu iar n cazul vitaminei B12 (cianocobalamina) se afl un atom de cobalt, dup cum au confirmat studiile bazate pe difrac ia razelor X. O alt reflectare a structurilor similare ale hemoglobinei i clorofilei (de i aceasta din urm nu este o protein ) este dat de asem n rile propriet ilor optice ale produ ilor lor de degradare, respectiv hematoporfirina i etioporfirina.

Caracterul feromagnetic
aracterul feromagnetic al atomului de fier favorizeaz observarea fenomenului Mossbauer (absorb ia i emisia rezonant a radia iilor gamma) fapt ce a constituit obiectul a numeroase studii efectuate n anii d70-d80 de May, Lang i Marshall att pe hemoglobin ct i pe citocromi (structura de hem fiind prezent i n unele enzime ale lan ului respirator din mitocondrii, cum sunt citocromii). Caracteristicile spectrului Mossbauer sunt sensibile la leg turile interatomice pe care le realizeaz fierul i pot da informa ii despre structurile electronice i de ligand din jurul atomului de fier.

Spectrul Mossbauer al deoxihemoglobinei umane prezint dou picuri ca urmare a despic rii nivelului energetic caracterizat de num rul cuantic nuclear Ia=3/2 datorit existen ei unui moment magnetic de cuadrupol al atomului de fier (dou valori ale num rului cuantic magnetic ma=3/2 i ma=1/2 desemneaz cele dou subnivele energetice ale nivelului caracterizat de Ia=3/2) (W. Hope .a.)

Atomul de fier din centrul hemului este hexacoordinat, patru dintre valen ele sale de coordina ie fiind satisf cute de cele patru inele pirolice, a cincea putnd lega o molecul de ap iar a asea o molecul de gaz (oxigen, dioxid de carbon, ...). Propriet ile feromagnetice ale hemului sunt rezultatul configura iei electronice a fierului din compozi ia sa. Fierul atomic are urm toarea configura ie electronic : 1s22s2p6 3s2 3p6 4s 2 3d123d2 13d3 13d4 13d5 1 8 electroni periferici

18 electroni pe straturile interne

 Gheorghe, Popescu Introducere in bionica- 1990 Nicolau, Simon Biofizica moleculara 1979

 Hemoglobina poate fi analizat spectral n mod direct, cu aparatura spectral pentru domeniul vizibil (care este mai accesibil dect cea pentru ultraviolet, care necesit optic din cuar ): spectroscoape sau spectrofotometre cu echipament pentru vizibil bazate pe o optic de sticl , c ci hemul absoarbe n vizibil, n domeniul verde g lbui (complementar domeniului ro u pe care l reemite). Alte cromoproteide cu func ii respiratorii i cu structur porfirinic (con innd deasemenea, fier) sunt citocromii, catalazele, peroxidazele, .a., iar neporfirinice sunt, de exemplu, enzimele flavinice i hemocianinele din organismul melcilor i molu telor (con innd cupru).

 Hematiile mature nu au capacitatea de a sintetiza hemoglobin c ci nu au mitocondrii i ARN, spre deosebire de hematiile foarte tinere. Acestea din urm pot sintetiza hemoglobina din precursorii proteici ai globinei i prin captarea fierului prin intermediul unei proteine de leg tur , o protein specific , transferina sau siderofilina, care transport fierul prin membrana hematiilor imature. n mod normal, legarea moleculelor de oxigen, monoxid de carbon, dioxid de carbon, la atomul de fier trebuie s confere o stabilitatea suficient noului compus pentru a putea fi transportat de la un esut la altul iar, pe de alt parte, leg tura trebuie s aib un caracter reversibil pentru ca dup atingerea punctului terminal al transportului, moleculele ligand s se poat elibera de hemoglobin .

Studiul circula iei sangvine cu ajutorul trasorilor

Vom reda pe scurt dou modele stochastice capabile s reprezinte circula ia sngelui prin sistemul de vase: modelul tubului cu bile de sticl i modelul compartimentelor nseriate. Un proces stochastic este un proces probabilistic iar cazul circula iei sangvine se preteaz la o astfel de modelare deoarece, de i se poate cunoa te situa ia ini ial la momentul luat ca referin (la intrarea n labirintul cu care este asimilat sistemul de vase), totu i cunoa terea situa iei la ie ire este un fapt probabilistic. Acesata deoarece exist un mare num r de vase prin care se poate dirija masa de lichid luat n studiu - marcat cu ajutorul unui trasor - i determinarea pozi iilor n care se vor g si particulele de lichid marcat la ie ire necesit o analiz probabilistic - singura capabil s ajute la prezicerea func iei lor de distribu ie.

Modelul tubului cu bile printre care se propag o cantitate de lichid colorat descrie caracterul stochastic al circula iei sngelui n sistemul de vase n modelul tubului cu bile de sticl (care se poate realiza ca atare relativ u or) se consider c lichidul marcat cu trasor colorat, de exemplu, este introdus la momentul ini ial la unul din capetele tubului (cap tul A). n momentul inject rii acest mas de lichid ocup o zon dens , relativ restrns i omogen .

 Un lichid incolor (simboliznd plasma sangvin din sistemul circulator al organismului uman) antreneaz cantitatea de lichid colorat din pozi ia A n pozi ia B astfel c deplasarea global , x, a centrului zonei colorate, este rezultatul deplas rii aleatorii ale particulelor colorate printre bilele de sticl . O curb a densit ii de particule colorate, ca o func ie de x, F(x), va reprezenta tocmai curba de probabilitate a prezen ei unei particule de trasor ntr-un punct de abscis x. La nceputul mi c rii aleatorii a trasorului antrenat de lichidul incolor printre bilele de sticl care delimiteaz numeroase drumuri posibile majoritatea particulelor de trasor sunt plasate pe o distan relativ mic (dispersie redus ) astfel c probabilitatea de a g si o particul n zona de la nceputul tubului este relativ mare.

 Numai un num r mic de particule colorate reu esc s ajung la distan e mai mari de cap tul intrare, astfel c probabilitatea de a g si la distan mare o particul colorat este relativ mic . Deci curba de probabilitate este asimetric , avnd maximul deplasat spre valorile mici ale lui x (curb de tip Poisson). u timpul particulele colorate care ajung la distan e medii cre te iar un num r relativ mic r mn pozi ionate att la distan e mici ct i la distan e mari. Deci curba de distribu ie spa ial devine o curb simetric (tinde la o curb Gaussian ). Axa de simetrie a curbei se deplaseaz cu vitez constant n lungul tubului.

Modelul compartimentelor nseriate

n se consider c sistemul circulator este alc tuit dintrun num r foarte mare de compartimente identice (Newman i colab.. cita i de F. Grmy, 1982) nseriate. Pentru a urm ri modul cum se deplaseaz sngele ntrun astfel de sistem se introduce o cantitate de trasor n primul compartiment urmnd ca particulele marcate s ncerce s treac n compartimentul al doilea i apoi mai departe. Tentativele de trecere dintr-un compartiment n altul reu esc numai cu o anume probabilitate. Starea sta ionar spre care tinde sistemul este caracterizat de cantitatea de substan S n fiecare compartiment.

Modelul compartimentelor inseriate

Lucrnd cu trasor radioactiv, atunci un sistem de detec ie a radia iei poate fi utilizat pentru urm rirea circula iei lichidului marcat prin intermediul activit ii specifice:

s i t a i t ! S
unde i desemneaz compartimentul iar si este cantitatea de trasor (substan marcat ) din compartimentul respectiv. Ecua ia diferen ial care descrie cinetica trasorului este de forma

ds i t ! V a i 1  V a i dt

 Ecua ia arat c viteza de cre tere a cantit ii de trasor din compartimentul considerat cre te propor ional cu cantitatea existent n compartimentul precedent i scade propr ional cu cantitatea din compartimentul considerat, ro fiind constanta de viteza de refacere (de turn-over). Rezult imediat c :

da i t V S ! a i 1  a i dt S
Se poate demonstra prin metoda induc iei matematice c :
i 1 V  t e S

a 0 Vt a i t ! i  1 ! S

unde simbolul d!d reprezint opera ia de dfactorial d.

 ntr-adev r s verific m rela ia pentru i=1, i=2, : (1) i=1 arat c : adic :
a 0 1
 V t S

a i  ! t

da 1 V !  a 0 dt S

V  t e S

(2) i=2 arat c :

a 2 t !
V  t e S

a 0 Vt 1! S
2

V  t e S

adic :

da 2 V ! a 0 dt S

V  S

V  t t .e S

V ! a 1 t  a 2 t S

 i a a mai departe. n fine, acest mod de demonstra ie presupune c dac rela ia este valabil pentru un i dat atunci se demonstreaz c ea este valabil pentru i+1. Formal rela ia propus este de tipul distribu iei Poisson:

e x Pp ! p!

x p

unde P(p) este probabilitatea de a se ob ine p ncerc ri reu ite n condi iile n care num rul mediu (medie pe ansamblu) de ncerc ri reu ite este egal cu x. Pentru i-1 mic (pu ine compartimente de str b tut - pu ine ncerc ri p care garantez efectul scontat) (ca i n cazul cnd, n modelul precedent trasorul colorat str bate o distan mic - cazul A) forma unei astfel de curbe este puternic asimetric .

 Ulterior cnd i-1 este mai mare, forma curbei de distribu ie tinde s devin simetric corespunz tor (ca i n modelul precedent - cazul B) unui p mare (mai multe particule marcate reu esc s ajung n compartimentul considerat).