Preparação e distribuição de meios de cultura
‡ Os meios comerciais devem ser hidratados; ‡ Devem ser pesados ‡ Frasco; papel manteiga/alumínio;

‡ Hidratar em pequena quantidade; ‡ Depois deve-se acrescentar o restante da água; ‡ Levar o meio para fundir aquecer;

Preparação e distribuição de meios de cultura
‡ Usar sempre luvas térmicas; ‡ Sempre que for usado o termo "esterilizar em autoclave", o tempo de esterilização é de 15 minutos e a temperatura de 121ºC; ‡ Sempre que for usado o termo "esterilizar por filtração", usar o filtro com porosidade de 0,22 micra, recomendado para partículas bacterianas; ‡ Distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos não precisam estar esterilizados; ‡ Distribuir o meio após a autoclavação, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estéreis; ‡ Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas, para que a esterilização seja por igual em todo o conteúdo dos tubos tampas fechadas não permitem a entrada do vapor;

Meios de cultura .transporte ‡ CARY BLAIR ‡ Microrganismos patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio. ‡ FUNÇÃO ‡ Transporte de material fecal e conseqüente conservação dos microrganismos. ‡ A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles. .

.

‡ FUNÇÃO ‡ Meio de transporte de fezes.Meios de cultura .transporte ‡ SALINA TAMPONADA ‡ Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável. .

entre outros.transporte ‡ MEIO STUART ‡ A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microorganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.. Salmonella spp. Shigella spp. .Meios de cultura . Pneumococcus.. ‡ FUNÇÃO ‡ Transporte de diversos materiais e conseqüente conservação dos microorganismos. ‡ Haemophilus spp.

manutenção ‡ ÁGAR NUTRIENTE ‡ Meio simples.Meios de cultura . ‡ FUNÇÃO ‡ Várias aplicações análise de água. ‡ Usado para observar esporulação de espécies de bacilos Gram positivos. de fácil preparação e barato. ‡ Conservação e manutenção de culturas em temperatura ambiente. alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas à exames bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras. .

o exigentes. adicionar os suplementos a base de NAD (coenzima I) e cisteína após resfriar a base achocolatada à aproximadamente 50ºC.Meios para crescimento e isolamento ‡ ÁGAR CHOCOLATE ‡ Utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes. . ‡ Cresce quase todos os tipos de microrganismos. ‡ Observação: se utilizar sangue de carneiro ou coelho no lugar do sangue de cavalo. carneiro ou coelho em temperatura alta hemácias lisam liberando hemina e hematina compostos crescimento dos m. ‡ À base do meio adiciona-se sangue de cavalo.

Meios para crescimento e isolamento ‡ THAYER-MARTIN CHOCOLATE ‡ É um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria sp. ‡ Inibem o crescimento de outras bactérias. . ‡ Contém em sua fórmula antibióticos. quando em amostras colhidas de sítios contaminados.

o é lactose positiva. alimentos e água. . ‡ FUNÇÃO ‡ Selecionar e isolar espécies de Salmonella sp e Shigella sp. ‡ Lactose ao meio se o m. em amostras de fezes.Meios para crescimento e isolamento ‡ ÁGAR SALMONELLA-SHIGELLA (SS) ‡ Possue componentes (sais de bile. ‡ Tissulfato de sódio e o citrato férrico permitem a detecção de H²S evidenciado por formação de colônias de cor negra no centro. verde brilhante e citrato de sódio) que inibem ‡ microrganismos Gram positivos.

.

urina e alimentos. . em amostras de fezes. e Shigella spp... ‡ FUNÇÃO ‡ Isolamento de Salmonella spp.Meios para crescimento e isolamento ‡ CALDO SELENITO ‡ Inibem coliformes e outras espécies da flora intestinal como estreptococos.

.Meios para crescimento e isolamento ‡ CALDO TETRATIONATO ‡ Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adição da solução de iodo inibe a flora intestinal normal de espécies fecais. ‡ FUNÇÃO ‡ Meio de enriquecimento para Salmonella spp.

.

‡ FUNÇÃO ‡ BGN (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose. ‡ A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros meios. ‡ Não é tão seletivo para Gram negativos como. o ágar SS. .Meios para crescimento e isolamento ‡ ÁGAR MAC CONKEY ‡ O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos. por exemplo.

úteis para a diferenciação de Streptococcus spp. ‡ Ótimas condições de crescimento. ‡ FUNÇÃO ‡ Usado para o isolamento de microrganismos não fastidiosos. . E Staphylococcus spp.Meios para crescimento e isolamento ‡ ÁGAR SANGUE ‡ Base rica. e Staphylococcus spp. ‡ Verificação de hemólise dos Streptococcus spp. ‡ Formação de halos de hemólise nítidos.

. ‡ A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus sp. Gram negativos e leveduras.Meios para crescimento e isolamento ‡ ÁGAR CLED ± CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT ‡ Microrganismos presentes em amostras urina. ‡ FUNÇÃO ‡ Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos.

.

enterobactérias. Função Cultivo de estreptococcos. carbono. A peptona e a infusão são fontes de nitrogênio. meningococos. peptona e dextrose. leveduras e fungos.Meios para crescimento e isolamento ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ CALDO BHI ± BRAIN HEART INFUSION Nutrientes de cérebro e coração. Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos. . Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C. não fermentadores. pneumococos. Realização de teste de coagulase em tubo. enxofre e vitaminas. A dextose é um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentação.

Meios para crescimento e isolamento ‡ LÖWENSTEIN JENSEN ‡ A base do meio é constituída por ovos integrais. . o que permite amplo crescimento das Micobactérias. ‡ FUNÇÃO ‡ Isolamento primário das micobactérias.

.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ÁGAR CITRATO SIMMONS ‡ Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono. ‡ FUNÇÃO ‡ Diferenciar gêneros e espécies de Enterobactérias e não fermentadores. . ‡ Sais de amônia alcalinizando o meio.

.

A hidrólise da esculina no meio resulta na formação de glicose e esculetina.. crescem presença de sais bile.o citrato férrico). que são Bile-Esculina positiva. A esculetina reage com íons férricos (fornecidos pelo composto inorgânico do meio . formando um complexo negro. As bactérias Bile-Esculina POSITIVAS biliares. A esculina é incorporada em um meio contendo 4% de sais biliares. .MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ÁGAR BÍLE-ESCULINA Capacidade de bactérias hidrolisarem esculina na presença A esculina é um derivado glicosídico da cumarina. FUNÇÃO Identificação dos Enterococcus spp..

.

.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ÁGAR FENILALANINA ‡ Verifica a capacidade da bactéria de produzir ácido fenilpirúvico a partir da fenilalanina por ação enzimática. ‡ FUNÇÃO ‡ Diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias.

1. exposta em toda sua superfície ao oxigênio atmosférico. A porção inclinada ou bico.0% lactose. vermelho de fenol para detecção da fermentação de carboidratos e sulfato de ferro para detecção da produção de sulfato de hidrogênio (indicado pela cor preta na base do tubo). ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ . A fermentação é indicada pela mudança da cor do indicador de pH de vermelho para amarelo. produção de sulfato de hidrogênio e gás. formando uma superfície inclinada. A porção inferior.0% sacarose.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ‡ ÁGAR TSI ± TRIPLO AÇÚCAR FERRO Este meio contém três açúcares: 0. denominada profundidade ou fundo. Essa configuração origina duas câmaras de reação dentro do mesmo tubo. está protegida do ar e é relativamente anaeróbia. é aeróbia. 1. FUNÇÃO Diferenciar bacilos Gram negativos com base na fermentação de carboidratos.1%glicose. O ágar fundido é deixado solidificar.

. ‡ Amarelo/amarelo = fermentação da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 açucares). ‡ H²S positivo = presença de precipitado negro. ‡ Presença de gás (CO²) = bolhas ou meio fragmentado.LEITURA ‡ Reações ápice/base: ‡ Púrpura/amarelo = fermentação apenas da glicose (lactose e sacarose negativos).MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ TSI .

.

.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ÁGAR BASE URÉIA (CHRISTENSEN) ‡ Determinar a habilidade do microrganismo de degradar a uréia em duas moléculas de amônia pela ação da enzima urease. na alcalinização do meio. ‡ Positivo ‡ Função ‡ BGN fermentadores e não fermentadores Staphylococcus e Haemophilus.

‡ FUNÇÃO ‡ Identificar e classificar bactérias fermentadoras. não fermentadoras e bacilos Gram positivos esporulados.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ PARA PROVA DE GELATINASE ‡ Determina a habilidade do microrganismo de produzir enzimas proteolíticas (gelatinases) que ‡ liquefaz/hidrolisa gelatina. .

.

e Vibrio spp. ‡ Diferencia algumas bactérias fermentadoras oxidase positiva entre elas Plesiomonas shigelloides. Aeromonas spp. ‡ FUNÇÃO ‡ Ajuda caracterizar espécies de Neisseria. . distingui não fermentadores (oxidase positiva) de enterobactérias (oxidase negativa).MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ PARA PROVA DE OXIDASE ‡ O teste de oxidase é baseado na produção intracelular da enzima oxidase pela bactéria.

fazer testes bioquímicos (enterobactérias). bactéria não fermentadora. ‡ Oxidase negativa: fermentadora. .Interpretação ‡ Oxidase positiva: roxo.

.

FUNÇÃO Determinar se o microrganismo é o não móvel. Motilidade). Lisina). Indol. Indol. Indol. MILI (Motilidade. MIO (Motilidade. . Flagelos ocorrem nos bacilos Gram negativos.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ PARA TESTE DE MOTILIDADE A bactéria é móvel flagelo. Meios associados a outros testes: Meios SIM (Sulfato. Ornitina) utilizados para testes enterobactérias. poucas formas de cocos são móveis.

5% ‡ A tolerância ao NaCl a 6. ‡ Na identificação de bacilos Gram negativos não fermentadores. ‡ FUNÇÃO ‡ Separa Enterococcus spp..MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ PARA PROVA DE TOLERÂNCIA AO NaCl 6. empregado para o cultivo de muitas bactérias. ‡ Meio base utilizado é o BHI caldo.. . que são NaCl 6.5% negativos. que são NaCl 6. que é um meio nutritivo de uso geral.5% é uma prova utilizada para verificar a capacidade de alguns microrganismos crescerem em presença do sal.5 % positivo dos demais Streptococcus spp.

‡ Não fermentadores. .MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ÁGAR MUELLER HINTON ‡ Ágar padronizado por Kirby e Bauer e pelo NCCLS que oferece condições de crescimento das principais bactérias. Staphylococcus sp e Enterococcus sp. ‡ FUNÇÃO ‡ Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias.

.Intepretação de entebactérias ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Identificação das enterobactérias Meios IAL ou Rugai Ápice LTD: reação positiva = verde garrafa. H2S (gás sulfidríco): reação positiva = negra. Fundo Lisina: reação positiva = qualquer cor diferente de amarelo. Base Glicose fermentação: reação positiva = amarelo. Produção de gás: reação positiva = formação de bolhas. Reação negativa = amarelo. Sacarose fermentação: reação positiva = amarelo. Tampa Indol: reação positiva = rosa ou vermelha após a adição do reagente de Kovacs. Mobilidade: reação positiva = turvação do meio e ou qualquer crescimento além da picada ou arrebentamento do meio. Hidrólise da uréia: ração positiva = azul intenso.

.

H2S: prova positiva = cor negra. primeiro descarboxila a glicose. Tubo MILI: após o inóculo. Indol: reação positiva = negra. sua tampa deve ser bem fechada. Provas Glicose: prova positiva = base do tubo amarela. a tampa deve fica um pouco frouxa. Lisina: as enterobactérias capazes de descarboxilar a lisina presente no meio. Reação negativo = amarelo claro. Uréia: reação positiva = alcaliniza a base do tubo provocando viragem do indicador para azul. onde reação positiva = qualquer cor diferente do amarelo. . Provas Mobilidade: reação positiva = crescimento para todos os lados.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Kit EPM-MILI Tubo EPM: após o inóculo.

.

‡ VM: reação positiva = coloração avermelhada. Leitura 48 ± 72 horas.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ Prova do VM: testa a capacidade da bactéria em produzir ácidos orgânicos a partir da fermentação da glicose. . ‡ VP: reação positiva: turvação. ‡ Prova do VP: as bactérias utilizam à glicose presente no meio liberando um produto que é a acetoína.

lactose e sacarose negativa a base é amarela. ‡ Resultados ‡ Vermelho o ápice: fermentação apenas da glicose. lactose e ou sacarose a base é amarela.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ TSI ‡ Verifica se a bactéria degrada carboidratos específicos incorporados ao meiocom ou sem produção de gás. . ‡ H2S: positivo = negra. ‡ Amarelo o ápice: fermentação da glicose. ‡ Gás: positivo = formação de bolhas.

‡ Uréia negativa = amarelo. ‡ Interpretação dos resultados ‡ Uréia positiva: reação alcalina = vermelha. ‡ Indol negativo = ausência de cor avermelhada.MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO ‡ Caldo indol-uréia ‡ Esse caldo tem por finalidade diferenciar as enterobactérias com base na capacidade de produção de indol e de hidrólse da uréia. . ‡ Indol: reação positiva = anel avermelhado.

‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Indol. ‡ Lisina. ‡ Oxidase.5% . DNAse. ‡ Arginina. ‡ TSB para motilidade em lâmina. Tubo com caldo NaCl 6.Testes necessários para a identificação de rotina dos BNFs ‡ Tubo de OFglicose (com vaselina). Tubo com gelatina. Tubo com TSI. Disco de polimixina. Esculina. ‡ PYR. Placa de Mac Conkey.

COLORAÇÕES

Colorações diferenciais
‡ Reage de modo distinto em diferentes bactérias; ‡ Servem para diferenciar as bactérias; ‡ Ex.: Gram e BAAR;

BAAR
‡ BACILOS ÁLCOOL-ÁCIDO-RESISTENTES; ‡ Coram fracamente pelo gram; ‡ Ácido micólico de parede; ‡ Circundados por uma parede celular hidrofóbica; ‡ Resistem a descoloração; ‡ Misturas de álcool-ácido usadas na identificação;

.

‡ Método difícil.Coloração para cápsula ‡ Chamada coloração negativa. lavagem retira . ‡ Durante o procedimento cápsula.

Coloração para cápsula ‡ Cápsulas geralmente não aceitam corantes biológicos. . ‡ Tinta nanquim.

.

corante primário. ‡ Safranina ‡ Bactéria cora o restante da bactéria. verde e rosa.Coloração de esporos ‡ Verde malaquita ‡ Lavagem. .

‡ Aumenta o diâmetro dos flagelos ao microscópio óptico. visível . ‡ Usa-se mordente e carbolfucsina. ‡ Procedimento delicado para coloração.Coloração dos flagelos ‡ Estruturas muitos pequenas.

Recomendações ‡ Toda amostra é potencialmente contaminada. cabine ‡ Procedimento com risco com respingos de segurança. ‡ Não pipetar com a boca. . ‡ Manipulação de material biológico EPI.

‡ Material contaminado deve ser descontaminado antes do descarte. ‡ Descartar em recipiente adequado. .Recomendações ‡ Não reencapar agulhas. ‡ Determinar área limpa e contaminada.

‡ Não estocar material contaminado. ‡ Tirar jaleco quando sair do setor.Recomendações ‡ Limpar e desinfetar todas as áreas de trabalho. ‡ Manter bancadas organizadas. .

‡ Separar materiais em sacos de lixo. ‡ Todos os reagentes identificados. .Recomendações ‡ Lavar as mãos sempre.

Recomendações ‡ Ter manual de procedimento. . ‡ Estocar inflamáveis local adequado.

‡ Não omitir fatos. ‡ Material biológico 2%.Acidentes ‡ Sempre pedir ajuda. superfície hipoclorito .

pele sabão e álcool ‡ Material biológico no jaleco lavagem.Acidentes ‡ Material biológico 70%. .