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Microbiología Industrial

Dr. Jorge Welti Chanes

1. De la Microbiología Industrial a la Biotecnología

Biología celular Biología molecular Ingeniería de procesos BIOTECNOLOGÍA Industria farmacéutica Ambiente y energía Diagnósticos médicos Industria química Bioquímica

Genética molecular

Microbiología

Industria alimentaria Y forrajera

Industria de la fermentación

PRODUCTOS TIPICOS EN INGENIERIA BIOQUIMICA
Ácidos orgánicos Aminoácidos

Alcoholes y solventes Antibióticos Esteroides Vitaminas Otros Proteína unicelular

Ejemplos:
Ácidos orgánicos: acético, cítrico, fumárico, glucónico, itacónico, láctico.  Aminoácidos: glutamato de sodio, Llisina, L-metionina, L-triptofano, Lvalina  Alcoholes y solventes: Acetona, butanol, 2,3 butanodiol, etanol, glicerol  Antibióticos: bacitracina, estreptomicina, neomicina, penicilina, tetraciclina 

Ejemplos:
Esteroides: cortisona, hidrocortisona, prednisolona, testosterona, triamcinolona.  Proteína unicelular: Algas, bacterias, levaduras, hongos  Vitaminas: ácido ascórbico, cianocobalamina, F-caroteno, rivoflavina  Otros: alcaloides, enzimas, insecticidas biológicos, metano, nucleótidos, polisacáridos 

Principales productos de la biotecnología comercializados: 
Bebidas  Quesos  Antibióticos  Alcohol

alcohólicas

de diagnóstico  Jarabes de alto contenido en fructosa  Aminoácidos  Levadura para panificación  Esteroides 
Reactivos

Principales productos de la biotecnología comercializados (cont.):
Vitaminas  Ácido cítrico  Enzimas  Vacunas  Albúmina  Insulina  Urokinasa  Factor humano VIII  Hormona del crecimiento  Insecticidas microbianos 

Fermentación 

Del latín fervere = ebullir Acción de las levaduras sobre extractos de frutas o granos Apariencia de ebullición producción de CO2  

Fermentación 
Significado

generación de energía por el catabolismo de compuestos orgánicos 
Significado

para bioquímicos:

industriales:

para

microbiólogos

Es mucho más amplio. Cualquier proceso para la generación de un producto mediante el cultivo másico de un microorganismo

1.1. Tipos de procesos biotecnológicos
a) Aquellos que producen células microbianas (biomasa) como producto b) Aquellos que producen enzimas microbianas c) Aquellos que producen metabolitos microbianos d) Aquellos que modifican algún compuesto, el cual se ha adicionado a la fermentación (proceso de transformación)

Ejemplos de productos de diferentes categorías en la biotecnología
(Cooney, 1983)

Masa celular

Levadura de Baker, proteína celular

Componentes celulares Proteínas intracelulares Productos biosintéticos

Antibióticos, vitaminas, aminoácidos, ácidos orgánicos

Ejemplos de productos de diferentes categorías en la biotecnología
(Cooney, 1983)

Productos catabólicos Bioconversión Tratamiento de desechos

Etanol, metano, ácido láctico Jarabe de maíz rico en fructosa, ácido 6-amino penicilánico Lodo activado, digestión anaerobia

a) Procesos para la producción de biomasa
Proceso de fabricación relacionado con el crecimiento  CONDICIONES ÓPTIMAS 

MAYOR CRECIMIENTO  De acuerdo al sustrato que utilizan se clasifican en: Sustratos naturales y Sustratos preparados a partir de productos químicos puros

Sustratos naturales 

Preparados a partir de productos o subproductos naturales, ejem: mostos Complejidad y poca versatilidad de los sustratos Requieren de investigación ingenieríl previa muy profunda, para determinar condiciones óptimas de proceso  

Sustratos preparados a partir de productos químicos puros 

Fuentes de carbono fijas para la producción de energía y proteínas en forma económica. Se usaron crudos de petróleo y productos derivados de éste (como metanol) Sustrato conocido y fácil de seguir en su reacción  

Producción comercial de masa microbiana
1. Producción de levaduras para la industria panificadora 1. Producción de células microbianas (proteína unicelular) utilizada como alimento humano o para animal

TIEMPOS TÍPICOS DE DUPLICACIÓN PARA MICROORGANISMOS, PLANTAS Y ANIMALES
Organismo Bacterias, hongos y levaduras Algas Pastizales Aves Cerdos Ganado Tiempo de duplicación (h) 0.3 ² 2 2 ² 50 170 ² 340 340 ² 680 680 ² 1,000 680 ² 13,600

b) Enzimas microbianas
Se producen a partir de fuentes vegetales, animales y microbianas  Ventaja de enzimas microbianas: se producen en grandes cantidades mediante técnicas de fermentación perfectamente establecidas  Se utilizan principalmente en el área de alimentos e industrias relacionadas 

Enzimas de uso común en la industria
ENZIMA E- Amilasa FUENTE
Aspergillus oryzal Bacillus amyloliquefaciens Bacillus licheniformis Aspergillus sp.

USOS
Hidrólisis de almidón (mieles, cervecería), Textiles y papel

Celulosas

Trichoderma rusei Penicilliun sp.

Procesamiento de frutas y hortalizas

F-Glucanasa

Bacillus subtilis Aspergillus niger

Hidrólisis (F-glucanos) en cervecería

Enzimas de uso común en la industria (cont.)
ENZIMA
Glucoamilasa

FUENTE
Aspergillus niger Rhizopus sp.

USOS
Producción de mieles de glucosa Isomerización de glucosa en mieles Hidrólisis de lactosa en leche y suero

Actinoplanes Glucosa Isomerasa missouriensis Strptomicetes sp.

Lactasa

Sacharomices sp.

Enzimas de uso común en la industria (cont.)
ENZIMA Lipasa FUENTE
Aspergillus sp. Mucor sp. Rhizopus sp.

USOS
Modificación de sabor en queso y mantequilla. Procesamiento de grasa y aceite

Pectinasa Proteasa

Aspergillus niger
Bacillus amiloliquenfaciens

Extracción y clarificación de jugos

Panadería y cervecería

c) Metabolitos microbianos 

El crecimiento de un cultivo se divide en una serie de etapas: Periodo de adaptación o fase lag Fase exponencial o logarítmica Fase estacionaria Fase de muerte 

Comportamiento de cultivo de acuerdo a los productos obtenidos en cada etapa: Fase logarítmica (TROFOFASE): Los productos generados son esenciales para el crecimiento de las células (aminoácidos, nucleótidos, proteínas, ácidos nucleícos, lípidos, carbohidratos, etc.) PRODUCTOS PRIMARIOS del metabolismo Fase estacionaria (IDIOFASE): Compuestos que no tienen una función obvia en el metabolismo microbiano PRODUCTOS SECUNDARIOS

PRODUCTOS DEL METABOLISMO PRIMARIO
Metabolito Primario Etanol Ácido cítrico Acetona y butanol Ácido glutámico Importancia Comercial
´Ingrediente activoµ en bebidas alcohólicas. Combustible en motores mezclado con petróleo Diversos usos en la industria de alimentos

Solventes Potenciador de sabor

PRODUCTOS DEL METABOLISMO PRIMARIO (cont.)
Metabolito Primario Lisina Nucleótidos Polisacáridos Vitaminas Importancia Comercial
Suplemento alimenticio Potenciador de sabor Diversas aplicaciones en la industria de alimentos, recuperación de aceites Suplemento alimenticio

METABOLISMO SECUNDARIO 

No todos los microorganismos lo presentan Común entre bacterias filamentosas, hongos y bacterias esporulantes No se presenta en enterobacterias  

Propiedades de productos secundarios: 

Actividad antimicrobiana Inhibición específica de enzimas Promotores de crecimiento Propiedades farmacológicas   

Relación entre metabolismo primario y secundario (Turner, 1971) 

Las rutas del catabolismo primario se muestran en la siguiente figura en líneas obscuras Los productos secundarios identifican con letra itálica se 

d) Procesos de transformación 

Se utilizan células microbianas para convertir un compuesto en otro estructuralmente relacionado pero de mayor valor

Las reacciones que pueden ser catalizacatalizadas para efectuar este proceso son: 
       Deshidrogenación Oxidación Hidroxilación Deshidratación y condensación Descarboxilación Aminación Desaminación Isomerización

Ventajas de los procesos microbianos sobre los puramente químicos: 
Son muy específicos  Operan a bajas temperaturas  No requieren de metales pesados como catalizadores

Ejemplos de procesos de transformación: 

Producción de vinagre Producción de esteroides Producción de antibióticos Producción de prostaglandinas   

Problema de los procesos de transformación:
Se tiene que producir una gran masa microbiana para catalizar la reacción

ENZIMAS o CELULAS INMOVILIZADAS

1.2. Historia de la Microbiología Industrial
‡ Período de ignorancia (antes de 1800) ‡ Período de descubrimiento (1800 ² 1900) ‡ Período de desarrollo industrial (posterior a 1900)

Período de ignorancia
almacenaban carne para mejorar su sabor, producían bebidas intoxicantes a partir de frutas y granos  Período a. C.: Diversas civilizaciones producían queso, yogurt y salsas de leguminosas  Año 4000 a. C.: pan, vino y cerveza 
Cavernícolas:

Período de descubrimiento
Siglo XVIII: desarrollo del microscopio y descubrimiento de los microorganismos. THENARD sugiere que los microorganismos producen el alcohol del vino  Siglo XIX: Pasteur demostró que eran correctas las ideas de Thenard. Hansen aisló y propagó cultivos de levadura (cervecería Carlsberg). 

Se descubre que algunas enfermedades son causadas por microorganismos Emmerich y Low aislaron de bacterias la FIOCIANASA (primer antibiótico) Primeros pasos para microorganismos. tratar aguas residuales con

Período de desarrollo industrial 

1900 1950: desarrollo procesos fermentativos industriales: fermentaciones alcohólicas, producción de ácidos acético, láctico, cítrico y glucónico, acetona, butanol y glicerol. Procesos AEROBICOS y ANAEROBICOS. Durante la Segunda Guerra producción de penicilina Mundial:  

Durante la post-guerra: Se presentó un retroceso debido al crecimiento de la industria petroquímica

Período de desarrollo industrial 
Años

60·s: Avance importante debido a la investigación para la producción de masa microbiana como fuente de proteína, por parte de compañías multinacionales fase de desarrollo: inicia con el 

Última

desarrollo de las manipulaciones genéticas de microorganismos IN VITRO, dando origen a la INGENIERIA GENETICA

Calendario de eventos (según Houwink, 1984) 

La era pre-Pasteur (antes de 1865): 
Bebidas alcohólicas (cerveza, vino) Productos lácteos (queso, yogurt) Otros alimentos fermentados 

La era Pasteur (1865-1940): 
Etanol, butanol, acetona, glicerol Ácidos orgánicos (ácido cítrico) Tratamiento aerobio de agua residuales

Calendario de eventos (según Houwink, 1984) 

La era de los antibióticos (1940-1960): 
Penicilinas: tecnología de la fermentación sumergida Gran variedad de antibióticos Tecnología de la estructura de la célula animal: vacunas contra virus Transformaciones microbiológicas de esteroides

Calendario de eventos (según Houwink, 1984) 

La era de los post-antibióticos (1960-1975): Aminoácidos Proteína celular Enzimas (detergentes) Tecnología de las células y las enzimas inmovilizadas (glucosa isomerasa) Tratamiento anaerobio de aguas de desecho Polisacáridos bacterianos (goma de xantán)

Calendario de eventos (según Houwink, 1984) 

La era de la nueva biotecnología (1975 -): Tecnología de los hibridomas: anticuerpos monoclonales Pruebas diagnósticas con anticuerpos monoclonales (1980) Ingeniería genética (1974) Vacunas de origen animal contra la diarrea (1982) Insulina humana (1982)

1.3. Elementos de un proceso biotecnológico
Formulación del medio de cultivo Esterilización del medio, bioreactores y equipo de apoyo iii. Producción de un cultivo activo y puro iv. Crecimiento del microorganismos en el bioreactor bajo condiciones óptimas para la formación del producto v. Extracción y purificación del producto vi. Manejo de los efluentes generados en el proceso i. ii.

DESARROLLO DE INÓCULO

Biomasa Cultivo
SEPARACION DE CELULAS

(fluido) Cultivo stock Biorreactor de siembra Biorreactor de producción

Sobrenadante
EXTRACCIÓN DEL PRODUCTO

ESTERILIZACIÓN DEL MEDIO

PURIFICACIÓN FORMULACIÓN DEL MEDIO EMPAQUE Constituyentes del medio

TRATAMIENTO DE EFLUENTES