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LABORATORIO

Procedimientos
de cultivo y
aislamiento de
hongos
Q.C CIRENIA HERNANDEZ TREJO
OBTENCION Y
PROCESO DE
MUESTRAS
Consideraciones
generales
 Tomar muestra del lugar
adecuado
 Usar tecnica esteril
 Enviar material adecuado
 Enviar y procesar con prontitud
 Etiquetar y enviar diagnosticos
probables
Origen de
especimenes
 Sangre  Orina
 Médula osea
 Líquido
 Vagina y cuello
cefalorraquideo uterino
 Cutáneo (pelo, uñas y
piel)
 Heridas
 Tracto respiratorio  Lesiones
 Tejidos subcutáneas
 Lesiones
mucocutáneas
Sangre
 Se realiza como hemocultivo
 8 ml
 Vacutainer con polietanol
sulfonato de sodio
Médula ósea
 Se colectan 3-5ml de médula
ósea
Líquido cefalorraquideo

 Se colecta asepticamente, la
mayor cantidad posible.
 Del sedimento se toma muestra
para examen directo e
inoculacion en medios aerobicos y
anaerobicos
Especimenes
cutaneos, pelo
 Se toman tallos pilosos (10)
 Si son pelos rotos se frota la piel
cabelluda con hoja de bisturi
 Colocar el material entre dos
portaobejtos o en caja de Petri o
incluso en un sobre limpio
Especimenes cutáneos,
uña
 Se limpia la uña con alcohol 70%
 Con bisturi estéril, se rebaja las
capas superficiales y se obtiene
queratina mas profunda
 Se extrae material bajo la lámina
 Se coloca el material en caja de
Petri estéril
Especimenes cutáneos,
piel
 Limpiar la piel con alcohol 70%
 frotar con hoja de bisturi estéril
 colocar el material obtenido en
caja de Petri estéril
Tracto respiratorio,
esputo
 Se colecta por la mañana
 Se retira la dentadura y se
enjuaga la boca
 Debe ser de una espectoracion
profunda
 colectar en recipiente estéril
Tracto respiratorio, exudado
faringeo
 Se puede usar hisopo
 Preferentemente con
abatelenguas estéril que se
coloca en tubo estéril
manteniendose húmedo
Tracto respiratorio,
secrecion bronquial
 Si es lavado bronquial, por lo
general se contamina con flora de
cavidad oral.
 Si es punción transtraqueal no
estará conta- minada.
Tracto respiratorio
 La secrecion mucosa espesa
deberá ser pro- cesada para
exponer la mayor cantidad de
microorganismos
 Centrifugar para examen directo
y cultivo
 Si se hace un estudio
micobacteriologico separar la
muestra en dos tubos antes del
Tejidos
 Las biopsias seran tomadas
incluyendo el borde y el centro de
la lesion
 Se mantienen húmedas con
solución salina
 Buscar granos, absesos para
cultivar
 Picar y homogenizar el resto del
tejido para cultivar
Orina
 La primera de la mañana
 Metodo ideal: cateter
 No conviene de muestras de 24
hrs.
 Centrifugar para examen directo
y cultivo
 No exceder de 12-14 hrs a 4°
Vagina y cervix uterino

 Se puede usar un par de hisopos
 Uno se coloca en medio de
transporte
 Otro se usa para extendido y
examen directo
Heridas, abscesos y
secreciones
 Hacer raspado de fondo y borde
de lesiones
 Aspiración de absesos
 Hacer extendidos en busqueda de
granos y elementos fungicos
EXAMEN
DIRECTO DE
ESPECIMENE
S
Examen directo

 Fresco en solucion salina
 Fresco con Lactofenol azul-
algodon
 Preparacion con Hidroxido de
Potasio
 Tincion de Gram
 Tincion para AAR
 Tincion con tinta china
Solución salina

Cloruro de sodio 0.85 gr
Agua destilada 100 ml

- Colocar una gota del especimen y una gota
de solucion salina
- Las estructuras micoticas se observaran lige-
ramente verdes, brillantes y birrefringentes
Examen directo

Esferulas de C. immitis
en esputo
Lactofenol Azul-algodón
Cristales de fenol 20 gr
Acido lactico 20 ml
Glicerina 40 ml
Agua destilada 20 ml
Azul algodón
solución acuosa 1% 2 ml
- El azul algodon se fija a la quitina de los hongos
- Se puede hacer una preparacion permanente
Examen directo

Histoplasma

Critptococo
Examen directo

Aspergillus

Mucor
Hidroxido de Potasio
Hidroxido de potasio, cristales 10 g
Glicerol 20 ml
Agua destilada 80 ml

De mayor utilidad en observacion de escamas, pelo y
uñas, para aclarar la queratina
Se deja reposar 20 min o se calienta suavemente
Las estructuras fungicas se observan birrefringentes
Examen directo
Examen directo
Examen directo

Hifa tabicada
en KOH
Examen directo
Examen directo

Parasitacion endotrix
Examen directo
Examen directo

Agentes de Piedra
Examen directo

Malazesia
Tincion de Gram
Los hongos suelen ser Gram +
Los mas frecuentemente encontrados con
esta tincion son levaduras
Examen directo

Pseudohifas
y blastoconidias
Examen directo

Malazesia
Examen directo

Actinomicetos
Tincion de Calcofluor
blanco
- Se trata de un agente blanqueador usado
en la industria textil y del papel
- Se une a la quitina de los hongos
- Se interpreta con el microscopio de
fluorescencia
Examen directo

Pelo parasitado
Tincion para AAR

- Para Actinomicetos
- Coloracion de Ziehl-Neelsen
- Coloracion modificada de Kinyoun
Tinta china
Tinta china 15ml
Merthiolate 1:1000 3ml
Tween 80 1:1000 0.1ml

- Es de utilidad para reconocer la capsula de C. neo-
formans
- Se observa con el condensador del microscopio a la
máxima intensdad de luz
Examen directo

Criptococo
Otras tinciones
 Tinción Hematoxilina y Eosina
 Tinción de Gomori para
actinomicetos
 Tinción de PAS
 Tinción de mucicarmin para
Criptococo
 Tincion de Wright
 Tinción de Fontana-Masson