Sekundarni metaboliti

~IN VITRO~

5/3/2008

Dragoljub Dimitrijevic BI020088

Metaboliti
Primarni - neophodni za fotosintezu, respiraciju, transport, sintezu proteina, shecera … -Sheceri -Amino kiseline -Nuleotidi -Lipidi *Prisutni su u svim biljkama ______________________________________________________ Sekundarni - nemaju direktnu ulogu u rastu i razvicu - za zashtitu - atraktanti - sredstvo kompeticije *Nisu prisutni kod svih vrsta

Fenoli .Azotna jedinjenja .Podela sekundarnih metabolita .Terpeni .

steroli(membrana). triterpeni C30. abscisinska kiselina. fitoekdizoni. saponini .Terpeni (terpenoidi. esencijalna ulja.Uloga u razvicu giberilini (diterpeni). fitol u hlolofilu… Zashtita od herbivora piretroidi.kardenolidi. izoprenoidi) . limonoidi.brasinosteroidi (triterpeni). diterpeni C20. politerpeni (C5)n ) . karotenoidi.Od izoprenskih jedinica (monoterpeni C10.

1993) -Antimikrobna svojstva (izoflavonoidi.T.Fototoksichnost UV-A (furanokumarini) .Fenoli .Osobine: .Privlache zivotinje (antocijanini) -Shtite od UV zrachenja (flavonoidi A. anti-estrogeni efekat) -Tanini (nezrelo voce. glifosfat) .Chvrstina (lignin) . 2001) . put shikimata*. rotenoidi.Od fenilalanina (PAL aktivnost. endotelin-1 Corder et al.Alelopatija . Li et al.

Lys. N-heterocikli. farmakoloshko dejstvo -Cijanogeni glikozidi HCN (metaboliti i enzimi prostorno razdvojeni) -Glukozinolati (nitrili i izotiocijanat) -Kanavanin (Arginin) nefunkcionalni proteini. posebni enzimi za prepoznavanje .000 vrsta alkaloida u 20% vrsta.Trp.Azotna jedinjenja -Sintetishu se od obichnih AK uglavnom -Tipovi: Alkaloidi. cijanogeni glikozidi.Thy. glukozinolati neproteinske AK -15.

bolja odbrana Fitoaleksini Samo prilikom infekcije Samo na mestu infekcije .* Zanimljivosti * Proizvodnja sekundarnih metabolita samo u simbiozi -veci rast.

Kratki istorijat -1956 Routienn i Nickell predlozili kulturu tkiva u zamenu za cele biljke -Otkrivene i nove supstance -1956 patentiran prvi biljni bioreaktor -1983 Mitsui petrochemical Industries proizvodi shikonin (Lithospermum erythrorhizon) (x1000$/L) -1980-ih celije duvana i koren ginseng-a.metabolita u pochetku . 20k L bioreaktori Niska stopa sek.

nikotin Coffea arabica Panax ginseng Lithospermum erythrorhizon Nicotiana tabacum Atropin. skopolamin Berberin Taksol Atropa belladonna Coptis japonica Taxus brevifolia .Primeri sekundarnih metabolita proizvedenih u kulturi tkiva Kafein Saponini ginsenga Shikonin Ubiquinon 10.

Transformacijama veca iskorishcenost i uvodjenje novih gena .Uspeshna proizvodnja saponina ginsenga 20k L.1990) . strujanjem vlaznog vazduha .Korenje chvrsto fiksirano u bioreaktorima .metabolita u korenu nego u nediferenciranom tkivu (Yamada i Hashimoto.Raste bujno uz auksine ili transformacijom Agrobacterium rhizogenes .Kultura organa .koren .Vece koncentracije sek.

Razmnozavanje izdanka je teshko ostvarljivo na technoj podlozi .Digitalis izdanak.izdanak .m.Kod vrsta sa vecom produkcijom s. proizvodnja srchanog glikozida bolja nego u kulturi celija ili korena . u listovima i izdancima .Kultura organa .

Metode .Slichne metodama u mikrobiologiji .Faze: 1) Izbor divlje/kultivisane biljke 2) Visokoproduktivna biljka (in vitro) 3 ) Pochetni kalus i klonska selekcija 4) Stabilna linija sa visokom proizvodnjom 5) Visokoproduktivna linija u optimalnim uslovima 6) Bioreaktor .

moze biti priblizno jednaka in vivo (retko) Razlike in vitro i in vivo kvantitativne ali i kvalitativne 1973 prvi radovi in vitro > in vivo (Coptis japonica) Vremenska podela prema kolichini prinosa (do 1973) Do 1973 rad na hranljivim podlogama Posle 1973. mofin i kodein – mlechne cevi Proizvodnja izvodljiva i u nediferenciranom stanju. Catharanthus roseus) . Daucus carota. 5-100x veci prinosi in vitro od in vivo (Nicotiana tabacum. Coptis japonica) Nediferencirano stanje = slaba produktivnost ? Terpeni – uljne zlezde.Prinosi sekundarnih metabolita U pochetku male kolichine – selekcija (Coffea arabica. Panax ginseng.

. 1977) Razlichita i brzina rasta kulture Nemoguce predvideti proizvodnju Potreban veliki broj genotipova u startu Nestabilnost kultura – vremenom opada proizvodnja (chuvanje “dobrih” linija) - .Parametri proizvodnje Genotip biljke Proizvodnja zavisi od genotipa biljke Razlichite linije imaju razlichitu proizvodnju (kolichina serpentina kod Catharantus-a Zenk i sur.

i vrstu ugljenih hidrata u podlozi.. ugljeni hidrati.. temperatura. kiseonik… Ne postoji jedinstven pristup ! Uslovi za brz rast kulture nisu najbolji za produkciju sekundarnih metabolita Dvofazne kulture (shikonin. 30x veca produkcija antrakinona zamenom NAA sa 2. soli metala… Ostali fizichki uslovi – bez pravila (. giberelini (IAA. pH.4D (Tabata i sur.4-D) (10-8 M Gib –Berberin) Prinosi zavise od vrste auksina.Parametri proizvodnje Ishrana i fizichko-hemijski uslovi - Regulatori rasta. UV. 1985) Imobilizacija alignatom (L-tirozin u L-DOPA) Auksini i citokinini.oshtecenja) . 1975).NAA. 0 prinosa naftokinona Lithospermium-a sa IAA.4D kod Morinda citrifolia ( Zenk i sur. 2. 1974) Slichno je i za konc. samo sa 2. Fujita 1982) Dodavanje prekursora (Trp za Catharantus) Izlaganje stresnim uslovima (gljive) Elicitori (Heinstein.mehan.

Klonovi daju razlichite prinose ..Razlichiti prinosi celija .Mikrokulture i replica-plating (na kalusu i podlozi) . radio-imunoloshki testovi… .Kloniranje celijskih kultura – 2 nachina . hemijska analiza ekstrakata.Izbor “pregledanjem” : vizuelno.Izbor klonirane linije – “brute force” . specifichna bojenja. fluorometrijsko.Variranja do 30x kod Nicotiana rustica (Ogino i sur. 1978) .Heterogenost pre i posle kulture .

spor rast kulture .Rast u bioreaktorima Problemi: .osetljivost (stres) . iz celije (DMSO) .izbacivanja sek.imobilizacija .met.meshanje (flat bed turbine impellers) .ochuvanje “dobrih” linija (techni azot) .

Nova. do sada nepoznata jedinjenja*** Potrebno je unaprediti: Metode oslobadjanja sek.Zakljuchak . iz celija Znanje biohemijskih mehanizama formiranja i regulacije produkcije sek.met.met Chuvanje “dobrih” linija Sastave hranljivih podloga - .Veliki potencijal i isplativost .

M.L.Pierik Transgenic crops for improved pharmaceutical products Kirsi-Marjs Oksman-Caldentey .Literatura • • • • Plant physiology 4th ed. Taiz&Zeiger Kultura biljnih stanica i tkiva Sibila Jelaska In Vitro Culture of Higher Plants R.

hFala na paznji :-) .

they selected many higher alkaloidproducing cell lines. spermidine.1. Mitsui Petrochemical. and Hara et al. stirring without damaging the cells. The maximum stimulative effect was obtained by addition of 2 mM spermidine. Addition of a polyamine.Bonus : berberin detaljno • • 7.4 g per L of their optimized medium within 2 weeks. in Tabata's laboratory (158) although other polyamines such as cadaverine. The continuous culture with high cell density was also conducted successfully.45 g/day of berberine. As a result. • • . and that of appropriate nutrients were optimize.1. the yields reached 70 g per L of cell mass and 0. In order to achieve a cell mass of 70 g/L on a dry weight basis. They indicated that spermidine effected an increase of ethylene generation which was associated with activation of berberine synthesis. Berberine chloride is used for intestinal disorders in the Orient and it takes 5 to 6 years to produce Coptis roots as the raw material. Mitsui Petrochemical has improved the productivity. was found to stimulate the production of berberine by Thalictrum minus cell suspension cultures by Hara et al. japonica which was transferred to a Japanese company. the Mitsui group produces berberine in a large scale at a level of 1. Furuya at Kitasato University (154) and Yamamoto at Nippon Paint (155) have investigated the production of berberine by Coptis japonica cell cultures since 1970's and Yamada et al. (157) found that addition of 10-8 M gibberellic acid into the medium stimulated berberine productivity up to 1. Thus. supply of sufficient amounts of oxygen. they established a "high-density cell culture" process to produce berberine much more efficiently. at Kyoto University (156) selected a high berberine producing cell line of C. japonica.66 g per L of the medium. Furthermore. Using a cell sorter and protoplasts of C.2 Berberine Berberine is an isoquinoline alkaloid which is distributed in roots of Coptis japonica and cortex of Phellondendron amurense. putrescine and spermine were ineffective.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful