ENZIME

Caracteristici generale ale enzimelor

Ce sunt enzimele ? catalizatori ai reaciilor chimice din organismele vii

nsuirile comune cu catalizatorii

acioneaz n concentraii foarte mici; nu se consuma n cursul reaciei; nu modific constantele de echilibru ale reaciilor pe care le catalizeaz; grbesc numai atingerea strii de echilibru pentru reaciile termodinamic posibile.

nsuiri caracteristice enzimelor

1.Cu excepia ribozimilor, enzimele sunt invariabil proteine. Structural ele pot fi: a. enzime cu structura strict proteic: ribonucleaza, chimotripsina, lizozimul din mucusul nazal i lacrimi; b. enzime cu structura heteroproteic: -parte proteica numit apoenzim -i o parte neproteic numit: cofactor = compus neproteic; coenzim = component neproteic organic, legat slab necovalent de apoenzim; grupare prostetic = component organic legat puternic de apoenzima (ex. hemul)

 2.Enzimele asigur viteze mari reaciilor

reaciile enzimatice sunt de neenzimatice

106 1012 ori mai rapide ca cele

a.hidratarea CO2 este catalizat de anhidraza carbonic , cea mai activ enzim:

CO2 + H2O

H2CO3

105 molecule/ secund 7

reacia este de 10 b.descompunerea

ori mai rapid dect reacia necatalizat catalizat de

H 2O 2

Fe3

i de catalaz:

2 H2O2
activitatea catalazei este de

2 H2O + O2
2 x 106 ori mai mare ca a

Fe3

3.Specificitate
De reacie De substrat:

-absolut -relativ: -de grup -mai larg Stereospecificitate

Specificitate de reacie
Substrat + Reactant clasificarea enzimelor:
Oxido-reductaze; Transferaze; Hidrolaze; Liaze; Ligaze.

Produi

4.Enzimele prezint specificitate de substrat (selectivitate n alegerea substratului)

a.Specificitate absolut enzimele utilizeaz ca substrat un singur compus chimic:
-ureaza catalizeaz hidroliza ureei:

H2N

CO

NH2 + 2 H2O

CO2 + 2 NH3

-acetilcolinesteraza catalizeaz hidroliza esterului colinei cu acidul

acetic:

H3 C COO CH2 CH2

H2O

H3 C COOH + H2 C HO

CH2 N (CH3 )3
+

N+(CH3 )3
-anhidraza carbonic

b.Specificitate relativ de grup

Alcool dehidrogenaza transform alcooli monohidroxilici cu numr mic de atomi de carbon n aldehidele corespunztoare:

R CH2 OH

Alcool dehidrogenaza NAD+ NADH + H+

R CH

Enzima are afinitate mare pentru alcoolul etilic

c.Specificitate relativ larg

Glicozidazele
HO OH
HO CH 2-OH O
OH

CH 2-OH O
OH

CH 2-OH O
OH

(H, OH) OH

CH 2-OH O O
OH

(H, OH) OH

OH

CH 2-OH O
OH 1

HOH 2C
2 H

O
HO

H
5

HO OH

O HO
H

CH 2 OH

Proteazele
Pepsin

Pepsina

NH CH CO R2

NH CH CO R3

R3 = fenilalanin, tirozin metionin, leucin

Tripsin

Tripsina
NH CH CO R2 NH CH CO R3
Chimotripsin NH CH CO R2 NH CH CO R3 R2 = Phe, Tyr, Trp

R2 = lizin, arginin

Chimotripsina

Carboxil esterazele

O R C O R1

5.Specificitate stereochimic

Enzimele disting -un enantiomer levogir de cel dextrogir; -un izomer cis de cel trans.
COOH Lactat dehidrogenaza HO C H NAD+ NADH + H+ CH 3 Acid L-lactic COOH C O

CH 3 Acid piruvic

Succinatdehidrogenaza
COOH CH 2 CH 2 COOH Acid succinic FAD FADH2 HOOC H C C H Acid fumaric COOH

acidul maleic (izomerul cis) nu se obine nici n urme:

 6.Activitatea catalitic a enzimelor poate fi modulat de anumii ageni reglatori.

Complexul ES
reprezentare reacii enzimatice :

E + S

ES

E + Produsi

Centrul activ al enzimelor

Enzimele sunt macromolecule Centrul activ al enzimelor = o regiune restrns din proteina enzim, cu structura chimic i geometria bine determinate, conferite de natura resturilor aminoacidice i de organizarea secundar, teriar i cuaternar a proteinei.

Centrului activ al chimotripsinei

S A S S B S S -chimotripsina contine 5 legturi disulfurice S S C S S S

His - 57 din lanul B; Ser - 195 din lanul C; Asp - 102 din lanul B.

Structura tridimensional a chimotripsinei

Triada Asp-His-Ser

Centrul activ al enzimelor

centru de legare prezint resturi aminoacidice care asigur legarea substratului centru catalitic preyint resturi responsabile de catalizarea propriu-zis

Resturile de aa din situsurile catalitice ale enzimelor sunt: cistein, serin, histidin, tirozin, acid glutamic i acid aspartic, lizin cu gruprile + funcionale: HN OH, SH, NH3+, COO-

NH

imidazol

Centrul activ nu este o suprafa plan ci este o entitate tridimensional cu forme diferite.

Complexul enzim substrat (ES)

structuri labile, cu o via foarte scurt ntre E i S se stabilesc: - fore necovalente (puni de hidrogen, interaciuni hidrofobe, interaciuni electrostatice) sau -covalente reversibile

Complementaritatea chimic i geometric determin legarea E-S

Modelul clasic (lact cheie)

al structurii spaiale a centrului activ n raport cu structura substratului, propus de Emil-Fischer

Substrat

Enzim Modelul lact cheie

Complexul ES

Este un model rigid.

Modelul dinamic centrul indussau complementaritate indus,

produs de Koshland, este acela de mna n mnu

Modelul indus presupune o flexibilitate a zonei n care se afl centrul activ

Substrat

Complexul ES Enzim Modelul centrului indus

Cataliza covalent
Enzime care formeaz compui covaleni enzim-substrat. Clasa serinei Tripsina, Chimotripsina, Elastaza, Acetilcolinesteraza

Clasa cisteinei Gliceraldehid 3P-dehidrogenaza, Papaina

Clasa histidinei Glucozo 6-fosfataza, Succinil~CoA sintetaza Clasa lizinei D-aminoacid oxidaza, Transaldolaza

Triada Asp-His-Ser

Cataliza acido-bazic
Enzimele conin grupri funcionale care pot aciona ca donori sau ca acceptori de protoni: amino, carboxil, sulfhidril, imidazol, hidroxilul fenolic.

hidroliza esterilor carboxilici i fosforici, reacii de izomerizare

Glucozo-6-fosfat izomeraza

Factorul de tensiune n cataliza enzimatic

Legarea S la E poate deforma att enzima ct i substratul, fcndu-le s ating starea de tranziie mult mai rapid.

centrul activ al unor enzime este relativ nepolar

Energia de activare a reaciilor catalizate enzimatic

Variaia energiei libere DG = parametru termodinamic ce caracterizeaz reaciile din organismele vii superioare, care au loc la temperatur i presiune constante. reacie exergonic, DG<0 reacie endergonic, DG>0 Reaciile care decurg cu scderea energiei libere a reactanilor sunt posibile termodinamic . DGprodui DGreactani <0

Energia liber

Energia liber de activare a reactiei (necatalizate)

Stare de tranzitie (reactie necatalizat) Stare de tranzitie (reactie catalizat)

Stare initial
Reactanti A + B

Energia liber de activare a reactiei (catalizate)

Energia total eliberat

Stare final
Produsi C + D

Durata reactiei

Formarea strii de tranzitie

2.Legtura:

A.Se formeaz sub influena F-XIIIa. B.Este o legatur de tip baz Schiff C.Se formeaz ntre lanurile L i H ale imunoglobulinelor D.Se formeaz ntre lanurile alfa i beta din hemoglobin E.Particip la formarea structurii primare a proteinelor

Cinetica enzimatic
Factori care influeneaz activitatea enzimatic Teoria cinetic Michaelis-Menten Ecuaia Lineweaver Burk

Cinetica enzimatic
Cinetica studiaz reaciile chimice: desfurarea n timp a reaciei; factori care influeneaz viteza reaciilor; etapele intermediare prin care trec reactanii pn devin produi.

 Viteza unei reacii = variaia n timp a concentraiei reactanilor sau a produilor de reacie.

A
d[ A ] v dt

d[B] v dt

ecuaii cinetice

 Viteza de reacie este proporional cu produsul concentraiilor reactanilor Pentru o reacie: A Produi Pentru o reacie: A+B Produi

V = K [A]

V = K [A][B]

K = constanta de vitez sau viteza specific

(V de reacie la concentraii 1M ale reactanilor)

Activitatea enzimatic
U.I. (unitatea internaional) = activitatea enzimei care transform 1 mmol substrat/minut n cond standard de pH, temperatur, cofactori Activitatea molecular = nr. molecule de S transformate n produs de ctre o molecul de E /secund. Activitatea specific = nr. de uniti de activitate enzimatic / mg de protein total. Constanta catalitic (turn-over number) = nr. de transformri S P catalizate de fiecare CA al E n unitatea de timp.

Factorii care influeneaz activitatea enzimatic

Temperatura; pH; [E]; [S]; prezena inhibitorilor

Temperatura
T optim = temp. la care activitatea enzimelor este maxim
activitatea enzimatic % 100

50

20

40 Toptim 60 temperatura

pH
pH-uri extreme denatureaz enzimele Variaii mici de pH n zona de stabilitate a enzimei modific v.

Viteza de reactie (v)

Tripsina Pepsina Fosfataza alcalin

[E]
[S] = constant, v este proporional cu cantitatea de enzim
activitatea enzimatic %

concentratia enzimei

Ecuaia Michaelis Menten

K1 E+S K2 ES K3 E + Produs

V = f([s]) la [E], temp., pH = constante

activitatea enzimatic vmax saturatie vmax 2 KM

concentratia substratului

Michaelis i Menten au introdus parametrii cinetici KM i Vmax

K1 E+S

K2 Etapa rapid

ES

K3

E + Produs

Etapa lent

Unde E, ES i S sunt n echilibru

La echilibru v1 = v2 + v3 K1[E][S] = K2[ES] + K3[ES] K1[E][S] = [ES](K2 + K3)

KM
KM este o msur a afinitii dintre E i S
(afinitile enzimelor pentru substraturile lor sunt cu att mai mari cu ct valorile KM sunt mai mici).

[E ][S] K 2 K 3 KM [ES] K1

Ecuaia Michaelis - Menten

Ecuaia de vitez a reaciilor enzimatice cu un singur substrat sau ecuaia lui Michaelis-Menten, a crei reprezentare grafic vo = f([S]) este un arc de hiperbol.

Vmax .[S] v 0 K M [S]

Vmax v0 2
Vmax Vmax [S] 2 K M [S] K M [S]

KM este numeric egal cu [S] la care viteza reaciei este semimaxim

Ecuaia Lineweaver Burk

Ecuaia Michaelis-Menten inversat este ecuaia unei drepte. KM 1 1 1 V0 Vmax [S] Vmax
1/V Panta = KM/Vmax 1/Vmax

- 1/KM

1/[S]

Inhibiia activitii enzimelor

scderea activitii catalitice a enzimei n prezena unui compus chimic denumit inhibitor Inhibitorii pot fi: endogeni (metabolii) exogeni (substane toxice,medicamente) Inhibiia poate fi: - ireversibil - reversibil

Inhibiia ireversibil
legturi covalente ntre E i I
E + I EI

Cnd [I] = [E], activitatea catalitic a enzimei este redus la zero. diizopropil-fluorofosfatului (DIFP), un compus utilizat ca paralizant (acetilcolinesteraza este foarte sensibil la aciunea DIFP)

NH CH CH 2 OH + F O P O DIFP

CO

NH

CH CO CH 2

- HF CH 3 O CH CH 3

CH 3 HC CH 3 O

O P O

CH 3 O CH CH 3

CH 3 HC CH 3

Hemoproteinele (citocromi, hemoglobina) sunt inactivate de ctre: CO, CN care se leag de ionul de Fe2+ din hem

Inhibiia reversibil
E + I EI

Aciunea I este evaluat cu ajutorul efectelor pe care ei le au asupra celor doi parametrii cinetici vmax i KM

Inhibiia reversibil poate fi: competitive, necompetitiv, uncompetitiv.

Inhibiia reversibil competitiv

I este analog structural al S i se leag n centrul activ al enzimei prin aceleai grupri ca S; ntr-un sistem cu E, S i Inhibitor competitiv (Ic) au loc reaciile:
E+S + I ES E + Produsi

EI

 reacia enzimatic atinge vmax la concentraii mari de S. aparent creste KM, deci afinitatea enzimei pentru S scade i nu se modifica vmax;

activitatea enzimatic vmax saturatie vmax 2 KM K ` M - 1/KM + Ic

1/V

+ Ic

1/Vmax - 1/KM` 0

concentratia substratului

1/[S]

Exemple de Ic (compui naturali sau de sintez)

Acizii dicarboxilici: oxalic, malonic, malic, oxaloacetic, pirofosfat sunt inhibitori competitivi ai succinat dehidrogenazei (SD).
COOH CH 2 CH 2 COOH Acid succinic FAD FADH2 HOOC H C C H Acid fumaric COOH

Sulfanilamida
Folat sintetaza, la bacterii este pclit i sintetizeaz un intermediar cu sulfanilamid n locul acidului para-aminobenzoic care nu se poate transforma n acid folic. Cum acidul folic este indispensabil bacteriilor, acestea mor.
NH2 NH2

SO 2 NH2 Sulfanilamida

COOH Acid p-aminobenzoic

OH N H2 N N N 5 N pterina

10 9 CH 2 NH

COOH CO NH CH CH 2 CH 2

acid p-aminobenzoic acid pteroic

COOH acid glutamic

Analogi structurali ai bazelor purinice i pirimidinice

se utilizeaz n chimioterapia cancerului. inhib sinteza de acizi nucleici, mpiedicnd diviziunea celular care este mult mai rapid n tumori

Metotrexat

analog al acidului folic se folosete n chimioterapia leucemiilor.

NH 2 N N H 2N N N H CH2 N R C N H CH CH2 C O COOO O-

R=H aminopterin R= -CH3 metotrexat

Inhibiia reversibil necompetitiv

Substratul i inhibitorul necompetitiv (In) nu sunt analogi structurali, nu au dimensiuni comparabile.
E+S + I ES + I E + Produsi

EI + S

ESI

Se modifica Vmax KM nu se modific n prezena inhibitorului.

activitatea enzimatic vmax v`max vmax / 2 v`max / 2 KM concentratia substratului - 1/KM + Ic

1/v

+ Ic

1/v`max 1/vmax 0 1/[S]

grupri - SH libere din alte poziii dect centrul activ, pot fixa prin legturi slabe ioni ai metalelor grele Ag+, Hg2+ care micoreaz sau chiar anuleaz activitatea enzimelor (aa se explic efectul otrvitor al unor metale grele).

Inhibiia reversibil uncompetitiv

Un astfel de inhibitor modific i KM i Vmax
E+S ES + I ESI E + Produsi

Enzime alosterice
Sunt proteine oligomere (dimeri, tetrameri, etc.) Au mai multe centre de legare pentru S (cte un centru pentru fiecare subunitate. Curbele v = f([S]) sunt sigmoide Vmax se atinge atunci cnd toate centrele active sunt ocupate cu S;

 Parametrii cinetici pentru enzimele oligomere sunt: -Vmax i -S0,5(S50), concentraia substratului pentru care reacia are o vitez semimaxim.
Aspectul sigmoid al curbei v = f([S]) reflect o modificare a afinitii enzimei pentru substrat.

activitatea enzimatic vmax vmax / 2

KM

concentratia substratului

 Enzimele care dau curbe v=f([s]) sigmoide sunt denumite alosterice. Liganzii fixai pot s fie de acelai fel (de ex. substratul s fie fixat n ambele locuri ale unui dimer) sau diferii; centru izosteric leag substratul centru alosteric (allos=altul) care poate fi situat pe acelai lan polipeptidic dar n regiune diferit, fixeaz un efector alosteric;

 Activatori alosterici Inhibitori alosterici

activitatea enzimatic 100 %

3

vmax

50

1 2

KM

[S]

 Dup natura centrelor alosterice i a liganzilor pentru aceste centre, efectele alosterice sunt: Efecte homotrope (presupun cooperarea ntre dou centre izosterice Efecte heterotrope (cooperare ntre un centru izosteric i un centru alosteric)

Enzime
Alosteria Reglarea cantitativ a enzimelor Reglarea eficienei catalitice Complexe multienzimatice Antienzime Izoenzime Denumirea enzimelor Clasificarea enzimelor

 Alosteria = capacitatea unor liganzi de a modifica funciile unor proteine prin inducerea unor tranziii alosterice (modificri conformaionale). Enzimele alosterice: -regleaz etape cheie din cile metabolice; ireversibile, cu DGo < 0

-au structur cuaternar,

Dimer cu 2 centre de legare pentru S

1.modelul concertat (simetric) 2.modelul secvenial Elemente comune ale modelelor Fiecare monomer al oligomerului are centrul su activ Monomerii coopereaz n fixarea substratului : cooperare pozitiv; cooperare negativ; cooperare de tip homotrop cooperare de tip heterotrop

Reglarea alosteric se face cu consum minim de energie

Modelul simetric
Subunitile dimerului, pot avea dou
conformaii; -R (relaxat) cu afinitate mare pentru substrat -T (tensionat) cu afinitate mic pentru substrat.

Modelul impune simetria dimerului, care exist numai n forma R sau T.

 La enzimele heterotrope: Activatorii stabilizeaz starea R Efectorii negativi stabilizeaz starea T

Modelul secvenial

admite interacia strii R cu starea T

Legarea lui S la primul monomer se face cu dificultate

 Dei nu este enzim hemoglobina fixeaz O2 prin cooperativitate coordonat de factorii: H+; CO2; 2,3-DPG

Reglarea vitezei de reacie

Viteza reaciilor enzimatice cheie din cile metabolice depinde de: cantitatea de enzim;

eficiena enzimelor

Reglarea cantitii de enzim

prin dinamica proceselor de biosintez i de degradare
Aminoacizi

Ks Kd

Proteine

 Enzimele constitutive: Ks = Kd. Catalizeaz procese fundamentale pentru existena celulei. Se gsesc n celule n cantiti relativ constante. Ele nu sufer fluctuaii mari n raport cu factorii de mediu.

 Enzimele inductibile: Ks > Kd Sunt implicate n ci catabolice. Enzima este sintetizat numai dac exist substratul asupra cruia s acioneze Substratul acioneaz ca un inductor, accelernd sinteza enzimelor.

 Enzimele represibile: Ks < Kd Sunt implicate n procese anabolice Sinteza lor este ncetinit de produsul final al reaciei catalizate; Represia se face de obicei, prin intermediul complexelor corepresori - aporepresori.

 Controlul degradrii proteinelor (enzimelor) -se face indepen-dent de controlul sintezei; -se face prin intermediul ubiquitinei; -este proces dependent de ATP.

Reglarea eficienei catalitice a enzimelor

Reglarea prin concentraia substratului:
E1 E2 E3

Reglarea printr-un intermediar:

A E1 B E2 C E3 D Produsi

Glucoz + ATP

Glucozo-6-P + ADP

Hexokinaza: -prezent n toate esuturile extrahepatice, -are afinitate mare pentru glucoza (KM = 0,15 mM) -esuturile preiau glucoza din snge la orice valoare a glicemiei Glucokinaza: -prezent numai n ficat -are afinitate mic pentru glucoza (KM = 10 mM) - este activ dup ingestia de glucide

 Reglarea activitii enzimelor alosterice prin produsul final (inhibiie de tip feed back)
E1 E2 E3

Produsi

E1 A B

E2 C

E3 E4

D E

P1 P2

Reglarea covalent
Apare la organismele superioare i presupune: a.Transformarea unor enzime din forma activ n forma inactiv i invers prin ruperea unor legturi covalente (enzime interconvertibile). Conversia are loc prin: fosforilare; nucleotidilare

b.Trecerea enzimelor inactive n enzime active prin proteoliz, ruperea unei legturi covalente (proces unidirecional).

Enzime interconvertibile prin fosforilare <==> defosforilare

Fosforilrile: -sunt catalizate de kinaze (reglate hormonal, interconvertibile fosfo-defosfo); -sunt ireversibile; -necesit ATP Defosforilrile: -sunt ireversibile; -se fac hidrolitic n prezena unor fosfataze; -fosfatazele sunt supuse unui control hormonal.

 Unele enzime sunt active n forma fosforilat (glicogen fosforilaza implicat n catabolismul glicogenului), altele sunt active n forma defosfo (glicogen sintetaza implicat n proces anabolic). Acest tip de activare este, de multe ori, etapa final ntr-o cascad de evenimente declanate de legarea unui hormon la o membran celular.
ATP proteinkinaze ADP

Enzim (Ser-OH)
forma defosfo

Enzim (Ser-OP)
forma fosfo

fosfataze Pi H2O

Reglarea covalent prin proteoliz

Proenzimele (zimogenii) sunt forme inactive produse la locul de sintez, activarea acestora urmnd s se fac la locul de aciune. Activarea lor se face sub influena factorilor de mediu i autocatalitic, printrun proces ireversibil de rupere a unor legturi peptidice specifice.

De ce este necesar existena zimogenilor ?

Existena zimogenilor este o modalitate de a obine foarte rapid, prin transformri minore, cantiti mari de enzime active.

 Enzimele proteolitice digestive secretate de stomac (pepsinogenul) secretate de pancreas (tripsinogenul, chimotripsinogenul, proelastaza, procarboxipeptidaza) Enzimele coagulrii sngelui (secretate de ficat n form de proenzime) Enzimele sistemului complement

 a.Enzimele proteolitice digestive hidrolizeaz proteine: Transformarea

HCl
pepsinogen pepsina (- segment terminal (44 aminoacizi) cu caracter bazic)

 Transformarea Tripsinogen tripsin enteropeptidaz (enterokinaz) (fragment N-terminal de 6 aminoacizi din tripsinogen) Tripsina activeaz tripsinogenul, chimotripsinogenul, proelastaza, i procarboxipeptidaza. Zimogenii pancreatici se activeaz cnd coninutul stomacal a ajuns n duoden.

 Transformarea chimotripsinogen chimotripsin este activat de tripsin i se face prin ndeprtarea a dou dipeptide.
Chimotripsina cuprinde trei lanuri peptidice i cinci puni de sulf.

Tripsinogen

Chimotripsinogen

Enteropeptidaz

Chimotripsin

Procarboxipeptidaza A Tripsin Carboxipeptidaza A

Procarboxipeptidaza B

Carboxipeptidaza B

 Enzimele coagulrii i fibrinolizei. Exist dou ci iniiate de activatori diferii care converg ntr-o cale final comun calea intrinsec, cu participare de factori sanguini; calea extrinsec, la care particip i factori de origine exclusiv tisular.

Iniierea procesului de coagulare este urmat de activarea n cascad a factorilor de coagulare Care sunt avantajele unui rspuns reglator n cascad ? -o cantitate foarte mic de iniiator declanaz un rspuns amplu. -fiecare etap a cascadei amplific rspunsul

 Fibrinoliza. Componenii necesari dezagregrii chiagului se gsesc n snge n form inactiv i se activeaz proteolitic
Factor tisular Plasminogen Plasmin Cheag de fibrin Peptide solubile

 Antienzime (antiproteaze) = proteine reglatoare Serpinele sunt inhibitori de serin proteaze. Se leag necovalent n centrul activ al serin proteazelor:
antitrombina III 1 antiproteaza (denumit i 1 antitripsina) inhibitorul pancreatic al tripsinei inhibitorul proteinei C (proteina C este o serin proteaz plasmatic dependent de vitamina K, activat de trombin, care transform factorii activi VIIIa i Va ai coagulrii n forme inactive).

 Antitrombina III: -prezent n plasm; -inactiveaz trombina i ali factori ai coagulrii: IXa, Xa, XIa -Heparina mrete viteza de formare a complexelor ireversibile ntre antitrombina III i serin proteazele coagulrii.

 1-antiproteaza: -protein plasmatic; -este componenta fraciunii 1-globulinice. -inhib elastaza, tripsina i alte proteaze
1-antiproteaza sintetizat de ficat i de monocitele i macrofagele alveolare difuzeaz n plasm i apoi n spaiul intersitiial unde are rol n protejarea esuturilor de aciunea elastazei (enzim proteolitic distructiv, poate distruge elastina din pereii alveolelor pulmonare) secretat de neutrofilele activate. O deficiena la nivelul 1-antiproteazei poate duce la instalarea emfizemului pulmonar.

 Inhibitorul pancreatic al tripsinei: -este o protein cu masa molecular mic, produs de pancreas.

-se leag de tripsin, prevenind activarea prematur a cascadei enzimelor proteolitice pancreatice, fapt ce ar duce la distrugerea pancreasului.

Izoenzimele
Izoenzimele: - proteine oligomere -catalizeaz aceeai reacie n toate esuturile; -difer prin: structur distribuie tisular.

 Diferenele structurale pot influenta proprietile fizico-chimice: pH izoelectric mobilitate electroforetic masa molecular

 Izoenzimele se difereniaz i prin nsuirile lor catalitice: afiniti diferite fa de acelai substrat; sensibiliti diferite la aciunea unor efectrori alosterici; -specificiti distincte pentru coenzime.

Izoenzimele LDH (lactat dehidrogenaza)

LDH are structur cuaternar omogen sau heterogen; LDH este tetramer, alctuit din lanuri M (muscle) i din lanuri H (heart). LDH are cinci izoenzime: H4, H3M, H2M2, HM3, i M4 sau dup mobilitatea electroforetic LDH1 LDH5.

 Reacia catalizat:
Lactat dehidrogenaza H3 C CH COOH H3 C C COOH OH Acid L-lactic O Acid piruvic

NAD+

NADH + H+

Izoenzimele LDH au afiniti diferite pentru piruvat (sau lactat): H4 i H3M sunt caracteristice inimii - H4 are cea mai mica afinitate pentru piruvat (l transform greu n lactat). M4 i M3H sunt caracteristice muchilor scheletici, ficatului - M4 are afinitate mai mare pentru piruvat ca H4.

 Determinarea activitii enzimelor serice poate fi folosit n clinic pentru stabilirea originii esutului lezat

Izoenzimele creatin kinazei (creatin fosfokinaza)

Creatin kinaza: -enzim intracelular; -dimer format din dou subuniti: B (de la brain) M (de la muscle) Are trei izoenzime: MM (prezent n muchi i miocard) BB (prezent n creier i muchi) MB (prezent n urme numai n miocard).

 reacia catalizat este reversibil:

Creatin + ATP Fosfo-creatin + ADP

Creterea activitii creatin kinazei-MB n ser, indic lezarea miocardului (infarct de miocard).

Activitatea CK2 n plasm la 24 ore dup infarct

Activitatea LDH n plasm la 36 40 ore de la infarct

Ore Infarct

Complexe multienzimatice
Asamblri de proteine ntr-un complex, cu scopul de a crete eficiena global a procesului. Rolul lor: cataliza coordonat a unei succesiuni de reacii; minimalizarea unor reacii secundare. Exempl: acid gras sintetaz, complexul piruvat dehidrogenazei, etc.

Clasificarea i denumirea enzimelor

Denumirea enzimelor se pot utilza dou modaliti: -adugarea sufixului az la numele substratului (zaharaz, ureaz, glucozidaz) -denumire dup aciunea specific a enzimei (guanilat ciclaz, lactat dehidrogenaz, glutation reductaz). -denumiri particulare fr legtur cu reacia catalizat: pepsin, chimotripsin, tripsin.

 Numele enzimei cuprinde: -denumirea substratului, -tipul reaciei catalizate, -coenzima Fiecare enzim este codificat de patru cifre, care definesc: -clasa; -subclasa; -sub-subclasa; -numrul de ordine al enzimei din ir.

Clasificarea enzimelor
Sunt 6 clase de enzime dup tipul de reacie catalizat: 1.Oxidoreductaze 2.Transferaze 3.Hidrolaze 4.Liaze 5.Izomeraze 6.Ligaze

Oxidoreductazele catalizeaz reacii redox, de transfer de electroni sau de hidrogen.

Subclase: Dehidrogenazele catalizeaz transferul de hidrogen de la substrat (SH2) pe o coenzim redox (NAD+; NADP+; FMN; FAD):
SH2 + Co S ox + CoH2

 Reductazele catalizeaz transferul de hidrogen de la o coenzima redus (adesea NADPH) la un acceptor:

Sox + CoH2

SH2 + Co

 Oxidazele catalizeaz transferul de echivaleni reductori de la un substrat la dioxigen, reducndu-l fie la ap, fie la peroxid de hidrogen:

SH2 + 1/2 O2 SH2 + O2

Sox + H2O Sox + H2O2

 Peroxidazele catalizeaz transferul de echivaleni reductori de la un substrat la un peroxid (HOOH sau R-OOH)

SH2 +

HOOH

S ox + 2 H2O

 Dioxigenazele ncorporeaz dioxigenul n molecula de substrat (care cuprinde o legtur dubl):

CH CH

+ O2

CH O + O

CH

 Monooxigenazele ncorporeaz numai un atom de oxigen n substrat, celalalt atom al dioxigenului este redus la ap. Multe monooxigenaze sunt hidroxilaze care implic participarea sistemului redox: NADP+ - (NADPH + H+)
R-H + O2 + (NADPH + H+) R-OH + H 2O + NADP+

Transferazele
catalizeaz reacii de transfer a unei grupri de la un donor ctre un acceptor

AX + BY

AY + BX

Subclase: Aminotransferaze (transaminaze) catalizeaz transferul unei grupri amino ntre un amino i un cetoacid. Coenzima participant este piridoxal fosfatul.
R1 CH COOH + R2 NH2 C O COOH R1 C O COOH + R2 CH COOH NH2

 Aciltransferazele catalizeaz transferul restului acil de pe compui cu potenial chimic ridicat (R-CO~SCoA), pe acceptori potrivii cu formare de esteri, amide, anhidride:

R-CO~S-CoA + R1-OH

R-CO-OR1 + CoA-SH

 Fosforil transferazele (kinaze) catalizeaz transferul resturilor fosforil de pe ATP pe substraturi:

Glucoz + ATP

Glucozo-6-P + ADP

Metiltransferazele catalizeaz transferul gruprilor metil, coenzima care poart aceast grupare fiind tetrahidrofolatul (FH4).

Hidrolazele
A-B + H2O A-H + B-OH

Subclase

Esterazele care pot fi:

carboxilesteraze (cu substrat R-COOR)
tiolesteraze (cu substrat R-CO -SR)
fosfomonoesteraze (substrat R-O-PO3H2)

fosfodiesteraze sau fosfataze (substrat R-O-PO2H-O-R1)

Glicozidaze Peptidaze

Liazele
catalizeaz reacii de adiie reversibile, la legturi multiple. Anhidraza carbonic catalizeaz hidratarea dioxidului de carbon:
CO2 + H2O H2CO3

 Fumaraza catalizeaz hidratarea acidului fumaric la acid malic:

H C C

COOH + H2O Fumaraza

COOH HC CH 2 COOH Acid malic OH

H HOOC Acid fumaric

 Sintazele catalizeaz legarea a dou molecule fr implicarea ATP (daminolevulinat sintaza)

Izomerazele
catalizeaz reacii de izomerizare: Racemazele transform un enantiomer dextrogir n enantiomerul levogir

L-Alanina

D-Alanina

 Epimerazele schimb configuraia unui singur atom de carbon asimetric

D-Glucoz D-Galactoz

Izomerazele cis-trans modific configuraia unei duble legturi

Acid fumaric Acid maleic

 Mutazele schimb poziia unei grupri n molecul

COOH HC H2 C OH OPO3 H2 mutaz

COOH HC H2 C OPO3 H2 OH

Acid 3-fosfogliceric

Acid 2-fosfogliceric

Ligazele
catalizeaz reacii de condensare cuplate cu scindare de ATP
A-H + B-OH ATP ADP + Pi A-B

Sinteza glutaminei catalizat de glutaminsintetaz:

Acid glutamic + NH3 ATP

Glutamin