Estrategias de anlisis por GC-MS

aplicadas a la determinacin de
plaguicidas y otros
contaminantes en aguas y
alimentos

INTRODUCCIN

METODOLOGA ANALTICA EN EL ANLISIS DE TRAZAS

>1
0.1

BIOENSAYO, GRAVIMETRA

TENDENCIA EN SELECTIVIDAD

LIMITES DE DETECCIN, ppm (Aprox.)

TENDENCIA EN COSTE

COLORIMETRA, ESPECTROFOTOMETRA

CROMATOGRAFA EN PAPEL Y CAPA FINA

0.01

CROMATOGRAFA DE GASES Y LIQUIDOS

0.001

GC-MS Y HPLC-MS

<0.0001

1940

1950

1960
AO (Aprox.)

1970

1980

1990

2000

INTRODUCCIN
Aguas: Normativa Europea
de Aguas de Consumo
76/464/EEC

Alimentos: Directiva 90/642 CEE

Tomate

Pimiento

Pepino

Abamectine

0.01

0.01

0.01

Benomyl

0.50

0.10

0.50

Cyromazin

0.50

2.00

0.10

Dimetomorf

0.50

0.02

0.50

Ethiofencarb

2.00

2.00

2.00

Flufenoxuron

0.50

0.50

0.20

Hexaflumuron

0.05

0.50

0.05

Hexitiazox

0.05

0.50

0.10

Aldrin

Disulfoton

Monolinuron

Imidacloprid

0.10

0.50

0.10

Atracina

Endosulfan

Ometoato

Lufenuron

0.02

0.02

0.02

Azinfos-etil

Endrin

Oxidemeton-metil

Methomyl

1.00

1.00

0.02

Azinfos-metil

Fenitrorion

Paration-etil

Oxamyl

2.00

2.00

2.00

Clordane

Fention

Paration-metil

Teflubenzuron

0.50

0.50

0.20

Coumafos

Hepatclor

Foxim

Tiabendazole

0.10

1.00

1.00

2,4-D

Hexaclorobenceno Propanil

Acrinathrin

0.10

0.20

0.02

DDT

Linuron

Pirazon

Bifenthrin

0.20

0.20

0.01

Demeton

Malation

Simazina

Buprofecin

0.50

0.50

0.20

Diclorprop

MCPA

2,4,5-T

Chlorpyriphos-me

0.50

0.50

0.05

Diclorvos

Mecoprop

Triazofos

Endosulfan

1.00

1.00

1.00

Dieldrin

Metamidofos

Triclorfon

Malathion

3.00

3.00

3.00

Dimetoato

Mevimfos

Trifluralin

Methalaxyl

0.20

0.05

0.05

Methamidophos

0.50

0.01

1.00

0.1 mg/l plaguicidas individuales

0.5 mg/l plaguicidas totales

Lista negra de plaguicidas prioritarios

INTRODUCCIN

REQUERIMIENTOS PARA LA CONFIRMACIN DE

RESULTADOS

CONFIRMACIN DE RESULTADOS NEGATIVOS (<LCL)

Calibracin aceptable (medida del LCL)
Recuperacin aceptable (confirmada en lote)
CONFIRMACIN DE RESULTADOS POSITIVOS (>LCL)
Calibracin aceptable
Recuperacin aceptable
Confirmacin adicional
SANCO/3103/2000

INTRODUCCIN

CONFIRMACIN DE RESULTADOS
Empleo de diferentes detectores
Empleo de columnas de diferente polaridad
Empleo de tcnicas alternativas
Tcnicas de derivacin

Mayor coste

Mayor tiempo de anlisis

INTRODUCCIN
CONFIRMACIN DE RESULTADOS POSITIVOS
EJEMPLOS:
GC-ECD:
GC-NPD:
GC-FPD:
HPLC-UV:

2 columnas, 1 detector
Cuestionable
2 columnas, 2 detectores Aceptable (?)
Idem
Idem
2 columnas, 1 detector Mayor. Inaceptable
1 columna + HPLC-DAD Puede ser aceptable
2 columnas + HPLC-DAD Aceptable

HPLC-Fluor: 2 columnas, 1 detector

Aceptable

1 columna + HPLC-DAD
Mayor. Aceptable
GC-XX + HPLC-YY: Aceptable
GC-MS, LC-MS: Confirmacin inequvoca
SANCO/3103/2000

GC-MS
Quadrupolo (GC-Q-MS)
Trampa de Iones (GC-IT-MS)

INTRODUCCIN

GC-IT-MS (full-scan)
Extracto vegetal contaminado
(0.05 mg/kg)

45

40

EI

Clorpirifos
314

26000

97

18000

30

14000

213

10000
6000

25

125 169

65

258
286
244

351

2000
60

100

140

180

220

260

300

340

m/z

Diazinon

Relative Abundance

22000

Endosulfan II

Endosulfan I

197

35

20

15

10

0
8

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20
Time (min)

CLORPIRIFOS
4 ppm

1 ppm

0.1 ppm

IDENTIFICACIN/CONFIRMACIN

Abundance
3600000

tR = 10.48

CLORPIRIFOS

3200000
2800000
2400000
2000000

1600000
1200000
800000

400000
0
6.00

7.00

8.00

9.00

10.00

11.00

Abundance
280000

13.00

EI
Full scan

97
197

240000

12.00

200000
314

160000
120000
80000

258
65

125
169

40000
81
0
40

80

286

213

43
144
111
120
160

244
351
200

240

280

320

m/z

min

IDENTIFICACIN/CONFIRMACIN

CLORPIRIFOS
S

97

Abundance

197

6000

258

65

43

314

Cl

Cl

4000
2000

OP(OCH2CH3)2

Cl

8000

125

213

286
244

169

351

0
40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

240

260

280

300

320

m/z

FIT = 99%

REFERENCIA
Abundance

340

197
314

97

8000
6000

258
4000
2000
0

286

212
244
40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

240

351
260

280

300

320

340

m/z

CRITERIOS DE IDENTIFICACIN

TIEMPO DE RETENCIN (menos de 5 sec)

3 IONES ESPECIFICOS (S/N>3)
Similar tiempo de retencin
Similar pendiente de pico (Crom. de iones seleccionados)
Intensidad relativa 30% estndar
SI INTERFERENCIAS: SELECCIN DE IONES ALTERNATIVOS
SUSTRACCIN DEL FONDO: PRECAUCIN.
FIT > 750
IONES MATRIZ <25% DEL PICO BASE (EI).

EFECTO MATRIZ

IDENTIFICACIN ERRONEA (FALSOS POSITIVOS/NEGATIVOS)

INCORRECTA CUANTIFICACIN
DISMINUCIN DE LA SENSIBILIDAD
CONTAMINACIN DEL SISTEMA CROMATOGRFICO

PROCEDIMIENTOS DE CLEAN-UP EXHAUSTIVOS

REDUCCIN DEL TAMAO DE MUESTRA
TCNICAS DE ANLISIS MS SELECTIVAS Y SENSIBLES

IONIZACIN QUMICA

Interferencia al tiempo de
retencin del Clorfenvinfos
Muestra de aceituna: Blanco Matriz

EI-MS

S/N: 7/1

m/z 267

IONIZACIN QUMICA
Muestra de aceituna: contaminada con
0.1 mg/kg Chlorfenvinphos

CI-MS

Fit 978

S/N: 60/1

m/z 359 (M+1)

IONIZACIN QUMICA
AFINIDADES PROTONICAS DE LOS PRINCIPALES GASES
REACTIVOS

GAS REACTIVO

PA (kJ/mol)

He

178

H2

423

CH4

550

C 2 H4

680

H2O

697

H2S

712

CH3OH

761

CH3CN

787

i-C4H10

823

NH3

854

CH3NH2

896

IONIZACIN QUMICA
ESPECTRO DE DIAZINON
Abundancia

179

16000
137

14000

304

199

12000
152

10000

EI

8000
227

6000
93

4000
2000

54

216

124

163

66

0
60

81
80

276

248
260

289

109
100

120

140

160

180

200

220

240

260

ESPECTRO DE DIAZINON
305

Abundancia

280

300 m/z

[M+H]+

220000
180000

PCI/CH4

140000
[M+C2H5]+

100000

333 [M+C H ]+
3 5
345

60000
20000
0

137

80

259 277
290
100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360m/z
165

IONIZACIN QUMICA
Abundance

276
Identificacin
de
PTs:
EI GC-MS/EI
Anlisis por GC-MS

Abundance
5000000

140000

PY

120000
100000

4000000

80000

60000

3000000
2
3

20000
U5

40

8
5.00

U
2
9 10

U3

11

60
6

13
U1

233

319
249

212

U4

1000000

[M]+

194
125
93109
152 177

40000

2000000

262

80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 m/z

12

6.00

7.00

8.00

9.00

Abundancia

GC-MS/PCI

44000
Abundance

320 [M+H]+

10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 Time (min)

PCI

PY

36000
3e+07
2

2.5e+07

28000
4

20000

1
2e+07
13

1.5e+07
U1

1e+07

4000

U5

50

*
*

12
0
5.00

6.00

7.00

8.00

278

360

U2
11

10

5000000

U3

348

180
208

12000
U4

9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 Time (min)

100

150

200

250

300

350

400

450

500 m/z

TRAMPA DE IONES

GC-MS/MS
METOLACLOR
(0.1 mg/L)

TRAMPA DE IONES

Relative Abundance

Relative Abundance

GC-MS/MS
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

RT: 9.48
AA: 44388
SN: 8

9.3

9.4

9.5

9.6

9.7

FULL SCAN

9.8
Time (min)

10.0

91.4

60

97.3

40
20

10.2

10.3

CLORPIRIFOS

79.4

80

50

313.5
315.5
199.1
285.6
354.6
213.0
258.1
147.2
428.3
171.1
227.0
316.4 355.6 413.5 430.3
462.7 502.0

135.2

100

150

200

250

300

100

350

400

450

500

60
40

550

600

MS/MS

RT: 9.48
AA: 11034
SN: 71

80

20
0

6.5

7.0

7.5

8.0

8.5

9.0

9.5
10.0
Time (min)

10.5

11.0

11.5

12.0

12.5

258

100
Relative Abundance

10.1

67.4

100

Relative Abundance

9.9

80
60

259

40

286

20
0
40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

240

260

280

300

320

340 m/z

m/z

TRAMPA DE IONES
GC-CI-MS/MS
Ionization

MS/MS Fragmentation

Ionization
mode

Main ions (m/z)

(RA, %)

Precursor ion
(Isolation window)a

Excitation rf
voltage (mV)b

Product ions (m/z)

(RA, %)

Chlorothalonil

NCI

266(100), 264(50), 268(40)

266 (6)

1700

229(100), 231(90), 266(20)

Dichlofluanid

NCI

199(100), 155(60), 99(10)

199 (2)

800

155(100), 91(51), 199(25)

Sea-Nine 211

NCI

245(100), 209(30), 281(10)

245 (4)

800

160(100), 162(56), 245(25)

Irgarol 1051

PCI

254(100), 282(25), 198(20), 294(10)

254 (2)

900

198(100), 254(30)

TCMTB

NCI

166(100), 58(20)

166 (2)

1100

134(100), 166(25)

SELECCIN DEL ION PRECURSOR

MXIMA ABUNDANCIA: MAYOR SENSIBILIDAD
RELACION m/z ELEVADA

GRUPO DE IONES

TRAMPA DE IONES

GC-IT-EI-MS/MS
NUARIMOL

100

139

100

139

DICOFOL

75

123

Unid.

25
235

40

0
75

100

125

150

175

200

50

Dicofol

50

Nuarimol

75

25
251
0
125

225 m/z

150

175

200

30

20

10

Ion: 139

Ion: 139

0
30.4

30.5

30.6

30.7

30.8

30.9

31.0

min

Analyst, (2001) Enviado

225

250m/z

CUANTIFICACIN
ELIMINACIN DE EFECTOS MATRIZ
CUIDADOSA SELECCIN DEL ION/IONES DE CUANTIFICACIN
PREPARACIN DE ESTANDARS EN MATRIZ
CLEAN-UP DE LAS MUESTRAS
METODOS DE CUANTIFICACIN ALTERNATIVOS