SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

Soluciones amortiguadoras son aquellas soluciones cuya concentracin de hidrogeniones vara muy poco al aadirles cidos o bases fuertes. El objeto de su empleo, tanto en tcnicas de laboratorio como en la finalidad funcional del plasma, es precisamente impedir o amortiguar las variaciones de pH y, por eso, suele decirse que sirven para mantener constante el pH. Los mas sencillos estn formados por mezclas binarias de un cido dbil y una sal del mismo cido con base fuerte, por ejemplo, una mezcla de cido actico y acetato de sodio; o bien una base dbil y la sal de esta base con un cido fuerte, por ejemplo, amonaco y cloruro de amonio. La aplicacin ms importante de esta teora de los amortiguadores es, para los fisilogos, el estudio de la regulacin del equilibrio cido-base. Para dar una idea de la importancia de los amortiguadores de la sangre, recordemos que la concentracin de hidrogeniones del agua pura experimenta una elevacin inmediata cuando se aade una mnima cantidad de un cido cualquiera, y crece paralelamente a la cantidad de cido aadido. No ocurre as en la sangre, que admite cantidades del mismo cido, notablemente mayores, sin que la concentracin de hidrogeniones aumente de una manera apreciable. Mecanismo de la accin amortiguadora Supongamos un amortiguador constituido de cido actico y acetato de sodio. El cido estar parcialmente disociado estableciendo un equilibrio entre las partculas de cido sin disociar los iones hidrgenos y los iones de base conjugada. El acetato de sodio, como todas las sales, est disociado completamente y, por esta causa, el in acetato procedente de la sal desplaza el equilibrio hacia la formacin de cido, disminuyendo la concentracin de hidrogeniones libres. La presencia conjunta de la sal y el cido hace decrecer la acidez libre. Si las cantidades de sal y cido son del mismo orden de magnitud, la concentracin de iones hidrgenos se regular por la reaccin de equilibrio del cido, es decir CH3-COOH CH3-COO - + H+

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Si aadimos al sistema un cido fuerte, por ejemplo cido clorhdrico, se produce un aumento instantneo de la concentracin de iones hidrgenos, los cuales son neutralizados por la base conjugada del cido liberando as, una cantidad equivalente de cido dbil. Si aadimos al sistema una base fuerte, por ejemplo hidrxido de sodio, los iones hidroxilos consumen rpidamente iones hidrgenos del sistema para formar agua, lo que provoca la transformacin de una parte del cido actico libre en acetato que es una base menos fuerte que el hidrxido de sodio. La utilidad de las mezclas amortiguadoras en la regulacin del equilibrio cido-base del plasma sanguneo, estriba precisamente en la posibilidad de mantener la concentracin de iones hidrgeno dentro de lmites estrechos, que con razn puede considerarse invariable. El pH se puede mantener muy aproximadamente al nivel que convenga, escogiendo las mezclas adecuadas. Por un ejemplo, con un determinado amortiguador el pH de una cierta reaccin puede ser tres, y con otro amortiguador la misma reaccin se puede estudiar a pH ocho. Ecuacin de Henderson-Hasselbach La Ecuacin de Henderson-Hasselbach permite calcular el pH de una mezcla amortiguadora conociendo su composicin. En su deduccin, para un amortiguador compuesto de un cido dbil y una sal de su base conjugada, se considera que la concentracin de cido libre es aproximadamente igual a la del cido total, y la concentracin del in base conjugada coincide con la concentracin de la sal. Con ello, La Ecuacin de Henderson-Hasselbach expresa que el pH de una solucin amortiguadora se calcula sumando al pK del cido, el logaritmo de la relacin concentracin de sal / concentracin de cido, es decir pH = pKa + log [sal] De acuerdo con todo lo anterior, el pKa de un cido dbil se puede definir como el pH del

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sistema amortiguador que resultara al aadirle una cantidad equimolar de una sal fuerte del mismo cido, o bien el pH alcanzado despus de neutralizar con base fuerte, exactamente, la mitad de cido. Para el cido actico, una solucin uno molar de cido puro tiene un pH de 2.38, mientras que un sistema amortiguador con cantidades equimolares de cido y sal tiene un pH igual al pK del cido actico, es decir, 4.76. Propiedades de los amortiguadores 1. El pH de una solucin amortiguadora depende de la naturaleza del cido dbil que la integra, es decir del pKa del cido. 2. El pH de un sistema amortiguador depende de la proporcin relativa entre la sal y el cido, pero no de las concentraciones absolutas de estos componentes. Por ejemplo, un sistema amortiguador 2 M en sal y 1 M en cido, regula el mismo pH que un sistema amortiguador 4 M en sal y 2 M en cido, debido a que la relacin concentracin de sal / concentracin de cido es igual. 3. La modificacin del pH, en una solucin amortiguadora, resulta exigua hasta que uno de los componentes est prximo a agotarse, debido a que el pH vara con el logaritmo del cociente concentracin de sal / concentracin de cido. Este cociente es afectado por la adicin de cido o base fuerte, pero el valor logartmico de la relacin concentracin de sal / concentracin de cido vara muy poco. Ejercicios Propuestos Ejercicio 1. Calcular el pH de la solucin que resulta al mezclar dos soluciones acuosas que contienen, respectivamente, 2 moles de cido actico y 6 moles de acetato de sodio. El pKa del cido actico es 4.75 Se aplica la ecuacin de Henderson-Hasselbach

pH = 4.75 + log

6 = 5.22 3

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Ejercicio 2. Calcular el pH de una mezcla de 3 moles de cido actico 1 mol de hidrxido

de sodio en un litro de solucin acuosa al terminar la reaccin Una mol de hidrxido de sodio reacciona con una una mol de cido actico, convirtindose la mezcla en una solucin amortiguadora que contiene 2 moles de cido actico y 1 mol de acetato de sodio Aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbach tenemos que 1 = 4.45 2

pH = 4.75 + log

Ejercicio 3. Calcular el pH de una mezcla de 5 moles de lactato de sodio y mol de cido

clorhdrico en un litro de solucin acuosa al finalizar la reaccin. El pKa del cido lctico es 3.86 Una mol de cido clorhdrico reacciona con una mol de lactato de sodio, convirtindose la mezcla en una solucin amortiguadora que contiene una mol de cido lctico y 4 moles de acetato de sodio Aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbach tenemos que 4 = 4.46 1

pH = 3.86 + log

Ejercicio 4. Calcular el pH de una mezcla equimolar de NH3 y NH4Cl. El pKb del

amoniaco es 4.75 Para una solucin amortiguadora compuesta de una base dbil y una sal de su correspondiente cido conjugado, la ecuacin de Henderson-Hasselbach es de la forma

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pOH = pK b + log

[ sal ] [base]

Al aplicar esta ecuacin al sistema amortiguador amoniaco / cloruro de amonio resulta que el
pOH = pKb = 4.75

y entonces, el pH = 14 - 4.75 = 9.25

Capacidad o eficacia amortiguadora

La capacidad de amortiguacin puede definirse como "La cantidad de cido o base fuerte que deben aadirse a un litro de solucin amortiguadora para producir un cambio de pH de una unidad". Tambin puede definirse como "El cambio de pH que se produce por la adicin de una cantidad dada de cido o base fuerte". Puede demostrarse que la eficacia mxima de un amortiguador, tanto para neutralizar cidos como bases, est en la zona de pH prxima al pK del cido. El mximo de eficacia de un amortiguador frente a una base est en el punto de pH igual a pK - 0.5, mientras que la eficacia mxima frente a un cido fuerte est en el punto de pH igual a pK + 0.5. A medida que nos alejamos del pK, la capacidad amortiguadora decrece, considerndose nula a tres unidades de distancia, es decir, a un valor de pK + 3 frente a las bases y de pK - 3 frente a los cidos. En estas condiciones solo encontramos, prcticamente, uno de los componentes del sistema. Los amortiguadores fisiolgicos rara vez tienen un valor de pK que coincide con el pH que van a amortiguar. Normalmente sus pK estn unas dcimas ms abajo del pH fisiolgico. Esto se traduce en una mayor eficacia de los sistemas para amortiguar cidos que para amortiguar bases. De todo lo expuesto anteriormente, se deduce que puesto que el pH celular es prximo a siete, la eficacia amortiguadora mxima corresponde a los sistemas cuyo valor de pK est comprendido entre seis y ocho.

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Neutralizacin de un cido dbil con una base fuerte

Cuando se neutraliza un cido dbil con una base fuerte, el cido dbil se disocia en solucin dando una pequea cantidad de iones hidrgeno que son neutralizados por los iones hidroxilos alterando el equilibrio entre el cido dbil y sus iones. Por consiguiente, se ioniza mas cido dbil para reestablecer el equilibrio y los iones hidrgeno producidos se pueden neutralizar mediante mas hidroxilos y as sucesivamente hasta que todo el hidrgeno inicial sea neutralizado. Consideremos la neutralizacin de un volumen de una solucin de cido actico 0.1 M con hidrxido de potasio 0.1 M. Cuando se haya valorado menos de la mitad del cido, el pH es menor que el pK del cido; cuando se haya valorado mas de la mitad del cido, el pH es mayor que el pK del cido y cuando se haya valorado la mitad del cido, el pH es igual al pK del cido y la mezcla amortiguadora presenta la mayor eficacia. En la prctica se considera que una mezcla de un cido dbil y su base conjugada forman un amortiguador satisfactorio sobre el margen de pH desde pK - 1 hasta pK + 1. Una mezcla cuyo pH sea igual a pK - 1 en la que la proporcin sal / cido es 0.1, es un amortiguador efectivo contra un lcali, pero mucho menos efectivo contra un cido fuerte y la eficacia mxima est en el punto de pH igual a pK - 0.5. Una mezcla cuyo pH es igual a pK mas uno y cuya proporcin sal / cido es 10, es un amortiguador efectivo contra cidos fuertes, pero mucho menos efectivo contra bases y la eficacia mxima esta en el punto de pH igual a pK + 0.5. Cuando se haya valorado completamente el cido dbil, este se ha transformado ntegramente en su respectiva base conjugada pero, sin embargo, su pH en este punto no es siete (mayor que siete), por la hidrolizacin de la base conjugada. En el metabolismo se liberan cidos que forman sistemas amortiguadores como el del cido actico/acetato, como por ejemplo, pirvico, lctico, acetoactico, butrico, etc, pero como su concentracin en sangre no es elevada en condiciones normales y su pK est lejos del pH

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de la sangre, su accin amortiguadora en el plasma tiene poco inters, aunque pueden ser mas interesantes como amortiguadores intracelulares.

Neutralizacin de una base dbil con un cido fuerte

En este caso, el pH en el punto de equivalencia es, ahora, menor que siete y la curva en total parece la imagen especular de la curva de valoracin de un cido dbil con base fuerte. Las mezclas de una base dbil con su cido conjugado son amortiguadores de pH tan efectivos como las mezclas de cido dbil-base conjugada formadas durante la neutralizacin de un cido dbil con una base. Por idnticas razones, las mezclas cuyo pH, aproximadamente, est entre una unidad del pK del cido componente, tendrn una sustancial capacidad amortiguadora. Como los valores de pK de los cidos conjugados de bases dbiles son normalmente mayores que siete, esto significa que las mezclas de base dbil-cido conjugado son buenos amortiguadores en pH alcalino, como por ejemplo, en orinas alcalinas.

Neutralizacin del cido fosfrico

El cido fosfrico es triprtico y, por lo tanto, disocia en tres etapas. En cada etapa se forma una base conjugada anftera la cual, a su vez, disocia en la etapa siguiente como un cido. La curva de neutralizacin muestra dos puntos intermedios de equivalencia, en los cuales el pH es la medida de los valores de pK a ambos lados del punto de equivalencia. Los iones intermedios son las especies predominantes en los puntos de equivalencia intermedios. El pK de la segunda disociacin (pK2 = 6.8) es el ms prximo al pH del medio interno y, por lo tanto, esta segunda disociacin es la que tiene lugar reversiblemente segn el pH; de ah la accin amortiguadora del sistema fosfato monosustituido / fosfato monosustituido. La primera y tercera disociacin (pK1 = 2; pK3 = 12), no tienen inters biolgico. A un pH fisiolgico de 7.4, la concentracin de fosfato monocido es unas cuatro veces

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superior a la de fosfato dicido, el sistema es ms eficaz para amortiguar cidos fuertes que para amortiguar bases fuertes, lo que es una ventaja biolgica porque en el organismo predomina la tendencia a las variaciones hacia el lado cido. Como la eficacia de un amortiguador depende de la concentracin absoluta del amortiguador en el medio y de la proximidad de su pK al pH que se trata de regular, el sistema de los fosfatos, aunque est bastante diluido en el plasma cumple bien el segundo requisito, y por eso contribuye eficazmente a amortiguar las variaciones de pH. Los cidos policarboxlicos, tambin producidos en el metabolismo, como el succnico, fumrico, mlico, oxaloactico, cetoglutrico, ctrico, etc, se comportan segn los pK de sus diversos grados de disociacin, anlogamente al cido fosfrico. Tampoco tienen mucho inters cuantitativo como amortiguadores biolgicos.

Aminocidos y ptptidos
Los aminocidos comunes son sencillamente cidos poliprticos dbiles. La caracterstica mas especfica de la molcula de los aminocidos es la existencia en una misma molcula de grupos cidos y bsicos simultneamente, que corresponden a su carcter anftero. Los grupos cidos y bsicos suelen neutralizarse mutuamente constituyendo una sal interna, formando el llamado ion hbrido o zwitterion (especie de carga negativa y positiva). Los aminocidos neutros son cidos diprticos y los aminocidos cidos y bsicos son cidos triprticos. El primer grupo que disocia es el carboxilo. La segunda disociacin, para los aminocidos cidos es la del carboxilo de su radical caracterstico y para los aminocidos bsicos la del grupo alfa-amonio. El punto isoelctrico de un aminocido es el pH en el que este no lleva ninguna carga neta, es decir, la forma inica predominante es la especie isoelctrica (positiva v negativa) y hay cantidades iguales de las formas fnicas positiva (+) y negativa (-). Las curvas de neutralizacin de los aminocidos son de las mismas caractersticas de los

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cidos poliprticos, donde los pK corresponden a los puntos de inflexin de las dos regiones en que el pH vara lentamente con la adicin de cido o base, es decir, las dos regiones de pH en que el aminocido presenta mayor capacidad amortiguadora. En la zona del punto isoelctrico, el poder amortiguador del aminocido es nulo. El inters fisiolgico de los aminocidos como amortiguadores sanguneos depende de la proximidad del pK al pH fisiolgico, destacndose por su importancia la histidina por su pK2 = 6.0. Conocido el poder amortiguador de los aminocidos, poco hay que aadir para interpretar la accin amortiguadora de los pptidos en general. El enlace peptdico entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino del otro, bloquea las propiedades cidobsicas y amortiguadoras que tendran estos grupos. Sin embargo, todos los pptidos tienen algunos grupos disociables. En efecto, por lo menos habr un grupo carboxilo terminal (pK = 3.5) y un grupo amino terminal (pK = 8.0). Adems, los aminocidos cidos aportan los segundos grupos cidos de sus cadenas laterales (carboxilo de los cidos asprtico y glutmico, pK = 4 y sulfidrilo de la cistena, pK = 10). Y, por otra parte, estn los segundos grupos bsicos de los aminocidos bsicos como el de la lisina (pK = 10), el de la histidina (pK = 7.O) y el de la arginina (pK = 12.5). Las protenas del plasma, cuyo pK est en la zona dbilmente cida, a pH ligeramente alcalino se comportan como cidos dbiles y, as, al pH de la sangre son aniones, dato esencial para la interpretacin correcta de su accin amortiguadora correspondiente al contenido de proteinato.

El sistema bicarbonato / anhdrido carbnico: HCO3 - / CO2

El sistema bicarbonato/anhdrido carbnico es uno de los amortiguadores sanguneos principales. El cido carbnico se ioniza como un cido diprtico dbil tpico. Sin embargo, la mayora del cido conjugado disuelto en la sangre y en el citoplasma est como anhdrido carbnico y no como cido carbnico. El anhdrido carbnico disuelto est en

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equilibrio con el anhdrido carbnico gaseoso relacionados de acuerdo a La Ley de Henry. En el plasma sanguneo la etapa de ionizacin de inters biolgico es la segunda cuyo pK2 = 6.1, y para un pH sanguneo de 7.4 la relacin concentracin de bicarbonato / concentracin de anhdrido carbnico es de 20/1. Todo cambio en esta relacin significa, como es evidente, variacin de pH. Un aumento de ella corresponde al trastorno denominado alcalosis y si disminuye se llama acidosis. En condiciones in vivo, el amortiguador bicarbonato/anhdrido carbnico es un sistema abierto en el que la concentracin de anhdrido carbnico disuelto se mantiene constante. Cualquier exceso de anhdrido carbnico producido por la reaccin entre el ion hidrgeno y el ion bicarbonato es eliminado por los pulmones y contribuye, por lo tanto, a mantener el pH alrededor de 7.4. A primera vista, podra aparecer que en un sistema abierto, la reserva de bicarbonato se agotara rpidamente. Sin embargo, in vivo, el bicarbonato se recupera constantemente mediante los procesos metablicos oxidativos.

Sistema hemoglobina reducida / oxihemoglobinato: Hb/Hb02

Adems de su conocida funcin como transportador de oxgeno, la hemoglobina juega un papel importante como amortiguador sanguneo. Con el fin de entender la interrelacin entre la toma y liberacin de oxgeno y la accin amortiguadora de la hemoglobina, debemos considerar la interaccin entre algunos equilibrios simultneos. En cualquier momento, la hemoglobina se presenta como una mezcla de formas oxigenadas (HbO2) y desoxigenadas (Hb). La proporcin de cada una depende de la concentracin o presin parcial de oxgeno. La hemoglobina contiene muchos grupos ionizados. Uno en particular es el residuo de histidina que tiene un pK casi neutro. As, en cualquier momento, la hemoglobina est presente tambin como una mezcla de formas protonadas (cidas) y no protonadas (bsicas). La proporcin de cada una depende del pH de la sangre. Con el fin de combinar los dos equilibrios simultneos, debemos admitir que la desoxihemoglobina representa una

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mezcla de desoxihemoglobina protonada o reducida (cido conjugado, HHb) y desoxihemoglobina no protonado o desoxihemoglobinato (base conjugada, Hb- ). Por decirlo de otra forma, el cido conjugado de la hemoglobina existe en las formas oxigenadas (HHbO2) y desoxigenadas (HHb). Lo mismo le ocurrira a la base conjugada de la hemoglobina (HbO2- , Hb-). As, hay en cualquier momento, cuatro especies de hemoglobina. La proporcin de cada una depende de la concentracin de oxgeno y el pH. La hemoglobina de los eritrocitos llega a los pulmones, principalmente, como mezcla de formas desoxigenadas, HHb mas Hb-. En los pulmones, la desoxihemoglobina se une al oxgeno producindose la oxihemoglobina, la cual es un cido ms fuerte que la desoxihemoglobina. Un cambio conformacional en las molculas debido a la oxigenacin, disminuye el pK de la histidina de la regin del grupo hemo hasta aproximadamente 5.7. Como resultado, el equilibrio se desplaza hacia la liberacin de iones hidrgeno y con cuyo incremento se acelera su reaccin con el ion bicarbonato, provocando la eliminacin del ion hidrgeno y el desprendimiento de anhdrido carbnico a la atmsfera. Esta especial propiedad hace de la hemoglobina un amortiguador extraordinariamente eficaz, puesto que al modificar su pK puede confiar la proporcin base conjugada /cido sin que se produzca cambio alguno en el pH. La hemoglobina oxigenada (principalmente base conjugada) se transporta a los tejidos donde la baja presin parcial de oxgeno provoca que se disocie, es decir, libere oxgeno producindose hemoglobina desoxigenada que es una base mas fuerte que el oxihemoglobinato. As, despus de la liberacin del oxgeno, la oxidacin de los alimentos libera anhdrido carbnico que al disolverse en agua produce cido carbnico que con su ionizacin libera iones hidrgeno los cuales son captados por el desoxihemoglobinato transformndose en desoxihemoglobina. El cido conjugado de la hemoglobina tiene una menor afinidad por el oxgeno (menor constante de disociacin) que la base conjugada de la hemoglobina.

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