BC Luan An (Fileminimizer)

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.
vn
VIN KHOA HC V CNG NGH VIT NAM
VIN CNG NGH SINH HC
-------------------------
NGHIN CU TO CY C CHUA KHNG BNH XON

VNG L DO VIRUS BNG K THUT CHUYN GEN
Nghin cu sinh:
Nguyn Th Hi Yn
Hng dn khoa hc:
1. GS. TS. L Trn Bnh

2. PGS. TS. Chu Hong Mu
Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn
NI DUNG BO CO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
M U
TNG QUAN TI LIU
MC TIU NGHIN CU
NI DUNG NGHIN CU
VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU
KT QU NGHIN CU
KT LUN V NGH
CC CNG TRNH CNG B LIN QUAN N LUN N
I. M U
C chua l loi cy rau qu c gi tr kinh t cao, d trng, vn

chi ph ban u thp.
Bnh virus ang gy thit hi nghim trng trn c chua
(TYLCV: 90 - 100 %).
Nhiu cy trng chuyn gen khng virus bng k thut RNAi

c to ra (Abhary et al., 2006; Asad et al., 2003; Tenllado
et al., 2003; Andika et al., 2005; Phm Th Vn et al., 2008).
Nghin cu to cy c chua khng bnh xon vng l do

virus bng k thut chuyn gen
II. TNG QUAN TI LIU
TOMATO YELLOW LEAF CURL VIRUS - TYLCV

Chi Bergomovirus
H Geminiviridae
C1
CP
CP (Coat protein): Sinisterra et al., 1999; Raj et al., 2005

C1 (Rep protein): Brunetti et al., 2001; Yang et al., 2004; Noris et al., 2004; Fuentes et al., 2006
II. TNG QUAN TI LIU
CNG NGH RNAi TRONG VIC TO CY TRNG KHNG VIRUS
ihpRNA
Dicer
siRNA
RNA-Induced Silencing
Complex
ds-RNA
RNAi
Virus RNA
Virus RNA target recognition

mRNA degradation
Cleavage
III. MC TIU NGHIN CU
1) Thu nhn c trnh t gen CP v trnh t vng

DNA-A ca mt s chng virus gy bnh xon vng
l c chua TYLCV to nguyn liu phc v thit k
vector cu trc RNAi.
2) Thit k c vector mang cu trc ihpRNA - TYLCV
3) To c dng c chua chuyn gen c kh nng
khng vi TYLCV
IV. NI DUNG NGHIN CU
1) Kho st, thu thp mu l c chua nhim bnh

2) Tch dng, xc nh trnh t gen TYLCV
3) Thit k vector chuyn gen mang cu trc RNAi - TYLCV
4) To cy c chua chuyn gen mang cc cu trc RNAi

5) Kim tra s c mt ca gen chuyn trong cc dng cy
ti sinh. Phn tch s phn li gen chuyn th h T1
6) nh gi kh nng khng vi TYLCV Vit Nam

V. VT
LIU V PHNG PHP NGHIN CU
1. VT LIU
1.1. Vt liu thc vt

L c chua nghi nhim bnh xon vng l do virus TYLCV c thu
thp t cc a phng khc nhau
Ht ging c chua PT18 do Vin nghin cu rau qu cung cp
1.2. Vector v chng vi khun
Vector tch dng pBT v pENTRTM/D-TOPO
Vector chuyn gen pK7GWIWG2(II)
Cc chng vi khun E. coli DH5; E. coli Top 10 v A. tumefaciens
CV58C1
1.3. Ha cht v thit b my mc
Ti Phng CNTBTV v Phng th nghim trng im Cng ngh gen,
Vin CNSH
V. VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU

2. PHNG PHP NGHIN CU
PCR
THU THP MU L
C CHUA
K Thut
GATEWAY
MU C CHUA
NHIM BNH
PHN LP GEN
CA TYLCV
THIT K VECTOR
CU TRC RNAi
Thng qua
A. tumefaciens
BIN NP VO C
CHUA PT18
Phn tch PCR
nh gi kh
nng khng
TYLCV
Cy chuyn gen
Phn tch phn

li gen chuyn
Ti LIU
liu chia
s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
V. VT
V
PHNG
PHP NGHIN CU
2.1. Cc phng php s dng phn lp gen ca TYLCV

Thu thp mu bnh cn c vo mc biu hin bnh (Lapidot &
Friedmann, 2002)
Tch chit DNA tng s t mu l thc vt (Collins & Symons ,1992)
PCR nhn gen ca TYLCV
Tch dng gen v xc nh trnh t nucleotide
2.2. Phng php thit k vector chuyn gen cu trc RNAi
Phn tch trnh t v thit k mi nhn gen
PCR nhn gen v ghp ni cc on gen thit k
Thit k vector pENTRTM/D-TOPO mang CPi; C1.2+CP2
Thit k vector chuyn gen pK7GWIWG2(II) mang cu trc RNAiTYLCV
V. VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU

2.3. Phng php chuyn gen vo c chua thng qua A. tumefaciens
Bin np pK7GWIWG2(II)-TYLCV vo t bo A. tumefaciens
CV58C1 bng xung in
Bin np cc cu trc RNAi - TYLCV vo c chua thng qua vi
khun A. tumefaciens
2.4. Phng php phn tch cc dng c chua chuyn gen
Kim tra s c mt ca gen chuyn bng k thut PCR
Phn tch kh nng khng virus ca cy chuyn gen thng qua ly
nhim b phn v ghp p vi cy bnh
Phn tch s phn li gen chuyn th h T1 bng ch th khng
khng sinh Km
Ti liuVI.
chia
s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU
NGHIN CU
1. PHN LP GEN VIRUS TYLCV
1.1. Kho st v thu thp mu l c chua b bnh xon vng l
X ng t, Ph Lng
DDd
C chua di
Mc
nhim bnh
1
Bn Nguyn, i t
Td
C chua di
Huyn nh Ha
iHd
C chua di
P. ng Quang, TPTN
Qd
C chua di
Tuyn Quang
TQd
C chua di
Bc Kn
BKd
C chua di
Quyt Thng, Thi Nguyn
QTd
C chua di
Huyn V Nhai
VNt
C chua lai
P. Trng Vng, TPTN
TVd
C chua di
10
u, Ph Lng
PLt
C chua lai
11
Tch Lng, TPTN
TLt
C chua lai
12
P. Thnh n, TPTN
Td
C chua di
13
P. Tn Long, TN
TaLt
C chua lai
14
Sc Sn, H Ni
SSt
C chua lai
15
Huyn ng H
Ht
C chua lai
Stt a im thu mu
K hiu
Loi c chua
Ti
liu
chia
sgiti:
Ch thch: mc nhim
bnh
c
nh
theowWw.SinhHoc.edu.vn
tiu chun Lapidot, Friedmann, 2002
Ti liuVI.
chia
s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU
NGHIN CU
1. 2. Nhn dng gen, xc nh v phn tch trnh t nucleotide gen CP
DNA tng s ca cc mu l c chua

nhim bnh
in di sn phm PCR khuch i gen CP
in di sn phm colony-PCR vi cp mi pUC18F1/pUC18R1
Ti liuVI.
chia
s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU
NGHIN CU
QT
PL
QT
PL
QT
PL
QT
PL
QT
PL
QT
PL
QT
PL
10
TGTACAAAAG
..........
90
CATGTAGGGA
..........
170
TAAGTCAGTT
..........
250
TTTTAGTACG
..........
330
ACAGCCACGG
..........
410
TGCAAGCAAG
..........
490
AGTATGATAA
..........
20
CCCTGACGTT
......T...
100
AGGTAATTTG
..........
180
TATGTTTTGG
..........
260
TGATAGAAGA
..........
340
TGAAGAACGA
..........
420
GAGCAGGCAA
..........
500
CCACACAGAG
..........
30
CCACGAGGAT
..........
110
TGTGTCGGAT
..........
190
GTAAGATCTG
..........
270
CCTTTTGGAA
..........
350
TAACAGAGAT
..........
430
TAGTTAGGAA
..........
510
AATGCTTTGT
..........
40
GTGAAGGGCC
.......C..
120
GTTACACGTG
..........
200
GATGGATGAG
..........
280
CTCCCCAAGA
..........
360
CGTTTTCAAG
..........
440
GTTTATGAAG
..........
520
TATTGTATAT
..........
50
ATGTAAAGTC
..........
130
GTAACGGATT
..........
210
AACATTAAGA
..........
290
TTTTGGTCAG
..........
370
TTCTTCGTCG
..........
450
GTGAACAACC
..........
530
GGCATGTACA
.........T
60
CAGTCTTATG
..........
140
GACTCATCGT
..........
220
CGAAGAATCA
..........
300
GTGTTTAACA
..........
380
ATTTCAGGCT
..........
460
ATGTGACGTA
..........
540
CATGCTTCTA
.....C..C.
70
AACAGCGTCA
..........
150
GTTGGGAAGA
..........
230
TACTAATACG
..........
310
TGTATGATAA
..........
390
ACTGTTACTG
..........
470
TAATCATCAA
..........
80
TGATGTAGCC
..........
160
GGTTCTGTAT
..........
240
GTCATGTTCT
..........
320
CGAGCCAAGT
..........
400
GTGGTCAGTA
..........
480
GAGGCTGCGA
..........
ATCC
.C..
Nhm ph bin
ca Vit Nam
Hnh
Biuloi
hnh
phncy
loida
hnh
cy
[da
vo trnh
t ca
vng
gen CP
ca
TYLCV
Biu3.5.
phn
vo
trnh
t vng
gen CP
TYLCV
phn
lp
trn cphn
chua lp
di
trn
c
chua
di
ti
QT
v
DD,
Thi
Nguyn
vi
cc
trnh
t
khc
phn
lp
c
ti
Vit
ti QT v DD, Thi Nguyn vi cc trnh t khc phn lp c ti Vit Nam v cc trnh t
Nam v cc trnh t gen V1 ca TYLCV ng k trn GenBank (bng 3.2)]. Nhng gi tr
gen CP ca TYLCV ng k trn GenBank
bootstrap ln hn 70% mi c bin din.
Ti liuVI.
chia
s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU
NGHIN CU
1.3. Gii trnh t vong gen DNA-A ca TYLCV
STT gene
1
2
3
4
5
6
7
DNA-A
Pre-CP
CP
C3
C2
C1
C4
Kch thc
(v tr nucleotide)
2744
351 (131-481)
774 (291-1064)
405 (1060-1464)
408 (1205-1612)
1089 (1512-2600)
294 (2150-2443)
NA
69.6
90.7
AY602166.1.seq
GU723713.1.seq
DQ641695.1.seq
AF414287.seq
FN434083.1.seq
FN297834.1.seq
TYLCV-QT.seq
DQ641705.seq
AF264063.seq
GQ338767.seq
AJ704603.1.seq
EF165536.1.seq
68.3
99.5
100.0
80.7
99.5
100.0
77.6
20.2
20
15
10
Nucleotide Substitutions (x100)
Bootstrap Trials = 1000, seed = 111
Ti liu VI.
chiaKT
s ti:QU
wWw.SinhHoc.edu.vn
NGHIN CU
2. THIT K VECTOR CU TRC RNAi MANG GEN TYLCV
S m t cc bc thit k vector mang cu trc RNAi bng k thut Gateway

(Karimi et al., 2002)
Ti liu chia
ti: wWw.SinhHoc.edu.vn
VI.sKT
QU NGHIN CU
3. BIN NP CU TRC RNAi MANG GEN TYLCV VO C CHUA
Hnh nh chuyn gen vo c chua
CPi: 24/26
C1.2+CP2: 21/23
Ti liu chia
VI.sKT
QU NGHIN CU
3. BIN NP CU TRC RNAi MANG GEN TYLCV VO C CHUA
Bin np cu trc RNAi/TYLCV-CPi v RNAi/TYLCV-C1.2+CP2 vo c chua PT18
Cu trc
RNAi
RNAi/TYLCV
-CPi
RNAi/TYLCV
-C1.2+CP2
L th
nghim
S mnh l
bin np
S cm
chi hnh
thnh/ C+
Km
134
186
35
420
370
104
11
220
212
37
Tng s
774
768
176
26
104
83
27
142
87
48
300
270
93
14
Tng s
546
440
168
23
30
30
54*
77*
20*
S chi
sng st
/C+Km
S cy ra
r /B + Km
Ti liu chia VI.

s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU NGHIN CU
4. NH GI KH NNG KHNG TYLCV CA CC DNG C CHUA CHUYN GEN
4.1. nh gi kh nng khng vi TYLCV Vit Nam bng ly nhim b phn
Ngun b phn trong vn th nghim v kt

qu in di sn phm PCR kim tra s c mt
ca TYLCV c chua v b phn
Ti liu chia s ti:
Mc biu hin kh nng khng ca dng

LCP1-4 i chng sau 20 ngy v sau 60 ngy
ly nhim b phn
wWw.SinhHoc.edu.vn
Ti liu chia VI.

s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU NGHIN CU
nh gi kh nng khng TYLCV ca cc dng LCP0 bng phng php ly

nhim b phn mang virus
Dng
LCP0-1
LCP0-2
LCP0-3
LCP0-4
LCP0-5
LCP0-6
LCP0-7
LCP0-8
LCP0-9
LCP0-10
LCP0-11
LCP0-12
LCP0-13
LCP0-14
LCP0-15
LCP0-16
LCP0-17
LCP0-18
LCP0-19
LCP0-20
LCP0-21
LCP0-22
LCP0-23
LCP0-24
C
10
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0,3
15
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
Mc biu hin bnh sau ly nhim TYLCV

(Ngy theo di)
20
25
30
35
40
45
0,4
0,4
1,2
1,6
1,6
1,6
0
0,6
1,8
1,6
2
2,4
0
0
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
1,4
1,4
1,4
1,4
0,4
0,4
1,2
1,6
1,6
1,8
0,6
1
1,6
1,6
1,6
1,6
0,6
0,8
1,4
1,8
1.8
1,8
0
0,4
1,2
1,6
1,8
1,8
0,4
0,4
1,6
2,6
2,6
3
0
0,4
0,4
0,6
1
1
0,6
1
2,4
2,8
2,8
3
0
0,6
1,6
2
1,8
2
0
0,4
1,4
1,4
1,6
2,2
0
0
0,6
0,6
0,6
0,6
0,8
1,4
1,6
1,8
1,8
2
0
0,4
1
1,4
1,4
1,8
0,6
0,6
1,6
1,4
1,4
1,6
0
0
0,8
1
1,4
1,4
0,2
0,2
0,8
1,2
1,4
1,4
0
0
0,6
0,6
0,6
0,6
0
0,2
0,4
1,6
1,6
1,8
0,4
0,8
1,6
1,8
1,8
2
0,4
0,8
1,8
1,6
1,6
1,8
0
0,4
0,4
0.6
1
1,2
1,8
2
2,6
3
4
4
Mc bnh TB
50
1,6
2,4
0,6
1,4
1,8
1,6
1,8
1,8
3
1
3
2
2,2
0,6
2
1,8
1,8
1,4
1,4
0,6
2
2
1,8
1,2
4
2
2
1
1
2
2
2
2
3
1
3
2
2
1
2
2
2
1
1
1
2
2
2
1
4
Ti liu chia VI.

s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU NGHIN CU
nh gi kh nng khng TYLCV ca cc dng LCP1 bng phng php ly nhim

b phn mang virus
Dng
LCP1-1
LCP1-2
LCP1-3
LCP1-4
LCP1-5
LCP1-6
LCP1-7
LCP1-8
LCP1-9
LCP1-10
LCP1-11
LCP1-12
LCP1-13
LCP1-14
LCP1-15
LCP1-16
LCP1-17
LCP1-18
LCP1-19
LCP1-20
LCP1-21
C
10
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0,3
15
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1

(Ngy theo di)
20
25
30
35
40
0,2
0,4
1,2
1,4
1,4
0
0
0
0
0
0,4
0,4
1,4
1,6
1,6
0
0
0
0
0
0,6
0,4
0,4
1,4
1,4
0,6
1
1,6
2,2
2,8
0,2
0,6
1,6
1,8
2,6
0
0
0,4
0,2
0
0,6
0,4
1
1,6
1,6
0,2
0,4
1,2
1,4
1,4
0,6
0,4
1
1,6
1,8
0
0,4
0,4
0,4
0,4
0
1
1
1,4
2,6
0
0,8
1,6
1,4
1,6
0
0
0,4
0,6
0,6
0
0
0
0
0
0,6
0,6
0,8
1
1,4
0
0
0,4
0,4
0,4
0
0,4
0,4
0,4
0,4
0
0,2
0,4
1,2
1,6
0
0,2
0,6
1,6
1,8
1,8
2
2,7
3
4
Mc bnh TB
45
1,6
0
1,6
0
1,8
2,8
2,6
0
1,8
1,4
1,6
1
2,6
1,8
0,6
0
1,4
0,6
1
1,6
1,8
4
50
1,8
0
1,6
0
1,8
2,8
2,6
0
2
1,4
1,6
1
3
1,8
0,6
0
1,4
0,6
1
1,6
1,8
4
2
0
2
0
2
3
3
0
2
1
2
1
3
2
1
0
2
1
1
2
2
4
Ti liu chia VI.

s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU NGHIN CU
Tng hp kt qu nh gi kh nng khng TYLCV ca cc dng c chua chuyn gen

Dng
phn tch
LCP0
LCP1
T l cy khng sau ly nhim TYLCV (%)
Mc
nhim
bnh
10
ngy
20
ngy
30
ngy
40 ngy
50 ngy
T l khng
sau phn
tch (%)
100
75
12,5
25
50
37,5
33,3
33,3
33,3
54,2
58,4
58,4
4,2
8,3
8,3
8,3
100
76,2
47,6
38,1
19
19
523,8
38,1
19
23,8
23,8
14,3
28,6
42,9
42,9
14,3
14,3
14,3
20
80
10
50
40
10
90
100
100
100
Ti liu chia VI.

s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU NGHIN CU
4.2. nh gi kh nng khng vi TYLCV Vit Nam bng ghp p
Cy C biu hin bnh mc 2 sau 18

ngy ghp vi cy nhim TYLCV
Dng LCP1-8 biu hin kh nng khng

TYLCV sau 30 ngy ghp
Ti liu chia VI.

s ti:
wWw.SinhHoc.edu.vn
KT
QU NGHIN CU
nh gi kh nng khng TYLCV ca cc dng LCP1 bng phng php ghp p

Mc bnh
(Ngy theo di)
Dng
TB
10
15
20
25
30
35
40
45
50
LCP1-1
0
0
0
0
0,3
0,3
1
1
1
1
LCP1-2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
LCP1-3
0
0
0
0
0
0,3
0,7
1,3
1,3
1
LCP1-4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
LCP1-5
0
0
0
0
0,7
0,7
0,7
1
1
1
LCP1-6
0
0
0
0
0,7
0,7
1
1,3
1,7
2
LCP1-7
0
0
0
0
0,3
1
0,7
1,3
2
2
LCP1-8
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
LCP1-9
0
0
0
0
0,3
0,7
0,7
1
1,3
1
LCP1-10
0
0
0
0
0
0,3
0,7
1,3
1,3
1
LCP1-11
0
0
0
0
0,7
1,3
1,3
1,7
1,7
2
LCP1-12
0
0
0
0
0,3
0,3
1
1
3S1
1
LCP1-13
0
0
0
0
0,7
0,7
1
1,3
1,3
1
LCP1-14
0
0
0
0
0,7
1,3
1,3
1,7
1,7
2
LCP1-15
0
0
0
0
0
0,3
1
1
1,3
1
LCP1-16
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
LCP1-17
0
0
0
0
0,3
0,7
1,3
1,7
1,7
2
LCP1-18
0
0
0
0
0
0,3
0,7
1
1
1
LCP1-19
0
0
0
0
0,3
0,3
0,7
1
1
1
LCP1-20
0
0
0
0
0
0,3
0,7
1,3
1,3
0
LCP1-21
0
0
0
0
0,3
1,3
1,3
1,3
1,3
2
C
0
0
0,6
1
1
1,4
1,4
2,2
2,6
3
Ghi ch: Mi dng chuyn gen tin hnh ghp 3 cy, i chng ghp 5 cy. Biu hin bnh c nh gi theo mc
t 0 n 4. Kt qu ly gi tr trung bnh ca cc ln theo di.
Ti liu chiaVI.
s ti:
KTwWw.SinhHoc.edu.vn
QU NGHIN CU
5. PHN TCH PHN LI GEN CHUYN V NH GI KH NNG KHNG TYLCV TH H T1
5.1.Phn tch phn li gen chuyn bng ch th khng khng sinh Km
Kh nng khng Km
Tng s
ht gieo
S cy
khng Km
LCP1-4
142
102
S cy
khng
khng
Km
36
LCP1-8
54
54
LCP1-16
89
66
23
Dng
T l
2,83 : 1 0.087
-
2,87 : 1 0.034
VI.sKT
QU NGHIN CU
Ti liu chia
5. PHN TCH PHN LI GEN CHUYN V NH GI KH NNG KHNG

TYLCV TH H T1
5.2. nh gi kh nng khng TYLCV mt s dong LCP1 th h T1
T l cy khng sau ly nhim TYLCV (%) sau 50 ngy

Dng
LCP1-4
S cy
phn tch
Mc 0
Mc 1
Mc 2
Mc 3
Mc 4
43
39,6
27,9
20,9
11,6
VII. KT LUN
1. Xc nh c 13/15 mu c chua nhim bnh thu Thi Nguyn v

vng ln cn dng tnh vi TYLCV. Gen CP ca hai dng TYLCVDDd v TYLCV-QTd c gii trnh t v ng k trn GenBank
(FN826907 v FN826908). Vng DNA-A ca TYLCV-QTd phn lp
c c chiu di 2744 nucleotide gm c 2 gen xui chiu (Pre-CP,
CP) v 4 gen theo chiu b sung (C1, C2, C3, C4). Trnh t nucleotide
cho thy hai chng virus phn lp c u thuc nhm gy bnh ph
bin Vit Nam.
2. Thit k thnh cng 2 vector chuyn gen mang cu trc RNAi
(K7WG/TYLCV-CPi v pK7WG/TYLCV-C1.2+CP2) vi on trnh t
gen thit k lp li o chiu c ngn cch vi nhau bng on
trnh t intron. Cc vector c bin np vo A. tumefaciens chng
CV58C1 chuyn gen.
3. Thng qua ng nui cy vi mnh m l mm c chua, hai cu trc

RNAi c chuyn vo cy c chua ging PT18. Phn tch PCR
kim tra s c mt ca gen chuyn trong cc dng c chua cho kt
qu l 24/26 dng
LCP0
dng LCP1 dng tnh.
Ti liu
chiav
s 21/23
VII. KT LUN
4. Kt qu nh gi kh nng khng TYLCV ca cc dng chuyn gen

th h T0 bng phng php ly nhim virus thng qua b phn v
ghp p cho thy cc dng cy chuyn a gen biu hin tnh khng tt
hn cc dng chuyn n gen, trong 4 dng LCP1-2 ; LCP1-4 ;
LCP1-8 v LCP1-16 c kh nng khng hon ton vi TYLCV.
5. Kt qu phn tch di truyn thu c hai dng LCP1-4 v LCP1-16
mang 01 bn gen chuyn vi t l phn li gen l 3:1 theo quy lut di
truyn n gen ca Mendel.
6. nh gi kh nng khng virus ca dng LCP1-4 th h T1 thu c
t l khng hon ton vi TYLCV t 39,6%; Sau 60 ngy ly nhim
b phn, khng c cy biu hin bnh mc 4 v t l cy b nhim
bnh mc 3 ch chim 11,6%.
VIII. NGH
1. Tip tc phn tch tnh khng virus TYLCV ca cc dng c chua

cc th h tip theo v phn tch tnh khng bnh vi mt s chng
TYLCV khc ang c mt ti Vit Nam la chn nhng dng c
trin vng phc v cng tc chn ging.
2. Thit k cu trc vector RNAi c kh nng bt hot ng thi nhiu
gen virus TYLCV tng cng hiu qu khng vi TYLCV
IX. CC CNG TRNH CNG B LIN QUAN N LUN N

1) Nguyn Th Hi Yn, Phm Th Vn, Chu Hong H, Chu Hong Mu, L
Trn Bnh (2008). Phn lp gen m ha protein v ca virus gy bnh xon
vng l c chua thu thp trn cy c chua di ti Thi Nguyn. Tp ch Cng
ngh Sinh hc Tp 5 (2): 467 - 474.
Trn Bnh (2009). Thit k vector chuyn gen mang cu trc RNAi c kh
nng khng virus gy bnh xon l c chua. Bo co hi ngh Cng ngh Sinh
hc Ton quc: 473 477.
Trn Bnh (2011). To dng c chua PT18 khng bnh xon vng l do virus
bng k thut RNAi. Tp ch Cng ngh Sinh hc. Tp 9 (3): 333 340
Trn Bnh (2011). So snh tnh khng bnh xon vng l ca cc dng c
chua chuyn genmang cu trc RNAi n gen v ng thi hai gen ca
Tomato yellow leaf curl Vietnam virus. Hi tho quc gia Bnh hi thc vt Vit
Nam: 290 299.
5) Trnh t gen ng k trn ngn hng GenBank: 02 trnh t gen CP ca TYLCV
vi m s: FN826907 v FN826908

BC Luan An (Fileminimizer)

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

BC Luan An (Fileminimizer)

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.

NGHIN CU TO CY C CHUA KHNG BNH XON

Hng dn khoa hc:

1. GS. TS. L Trn Bnh

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

C chua l loi cy rau qu c gi tr kinh t cao, d trng, vn

Nhiu cy trng chuyn gen khng virus bng k thut RNAi

Nghin cu to cy c chua khng bnh xon vng l do

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

II. TNG QUAN TI LIU

TOMATO YELLOW LEAF CURL VIRUS - TYLCV

CP (Coat protein): Sinisterra et al., 1999; Raj et al., 2005

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

II. TNG QUAN TI LIU

CNG NGH RNAi TRONG VIC TO CY TRNG KHNG VIRUS

Virus RNA target recognition

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

III. MC TIU NGHIN CU

1) Thu nhn c trnh t gen CP v trnh t vng

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

IV. NI DUNG NGHIN CU

1) Kho st, thu thp mu l c chua nhim bnh

4) To cy c chua chuyn gen mang cc cu trc RNAi

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

1.1. Vt liu thc vt

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

V. VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU

Phn tch phn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

2.1. Cc phng php s dng phn lp gen ca TYLCV

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

V. VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Quyt Thng, Thi Nguyn

P. Trng Vng, TPTN

Tch Lng, TPTN

DNA tng s ca cc mu l c chua

in di sn phm PCR khuch i gen CP

in di sn phm colony-PCR vi cp mi pUC18F1/pUC18R1

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

S m t cc bc thit k vector mang cu trc RNAi bng k thut Gateway

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia VI.

4.1. nh gi kh nng khng vi TYLCV Vit Nam bng ly nhim b phn

Ngun b phn trong vn th nghim v kt

Ti liu chia s ti:

Mc biu hin kh nng khng ca dng

Ti liu chia VI.

nh gi kh nng khng TYLCV ca cc dng LCP0 bng phng php ly

Mc biu hin bnh sau ly nhim TYLCV

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

Ti liu chia VI.