LAPORAN PRAKTIKUM TOKSIKOLOGI LINGKUNGAN Uji Toksisitas Akut pada Mus Musculus

Dosen Pembimbing : Ibu Indri Ganarsih M, Si. Ibu Etyn Yunita M, Si.

Kelompok Kelas Ayu Septiawan M Fazri Hikmatyar Mutia Widi Riani Rachma Fauziah Hartadi Wiryawan

: 4 (Empat) : Biologi 5 A (1110095000004) (1110095000010) (1110095000016) (1110095000025) (11100950000xx)

PROGRAM STUDI BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 2012 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Efek toksik dari bahan pencemar yang berasal dari logam berat dapat mengakibatkan kerusakan organ-organ atau bahkan bahkan kematian pada makhluk hidup. Salah satu logam berat yang dapat memberikan efek toksin adalah Cd (Cadmium). Cadmium merupakan salah satu jenis logam berat yang berbahaya karena elemen ini beresiko tinggi terhadap pembuluh darah. Cadmium berpengaruh terhadap manusia dalam jangka waktu panjang dan dapat terakumulasi pada tubuh khususnya hati dan ginjal. Zat beracun tersebut dapat masuk ke tubuh manusia elalui sistem pencernaan dan sistem pernapasan. Keracunan logam kadmium terdiri dari 15-50% penyerapan melalui sistem pernapasan dan 2-7% melalui sistem pencernaan. Target organ adalah hati, plasenta, ginjal, paru-paru, otak, dan tulang. Uji toksisitas akut dilakukan untuk mengetahui efek dari logam Cd (Cadmium) didalam larutan kadmium sulfat (CdSO4). Penggunaan larutan kadmium sulfat (CdSO4) bertujuan untuk memudahkan pendedahan yang dilakukan secara intraperitoneal terhadap mencit. Uji toksisitas akut ini dilakukan untuk memperkirakan LD50 sehingga dapat diketahui besarnya dosis zat toksik yang mangakibatkan kematian 50% hewan uji untuk selanjutnya dapat dikonversi ke manusia.

1.2 Rumusan Masalah 1. Pengaruh dosis logam berat CdSO4 terhadap kondisi Mus musculus betina. 2. Pengaruh pemaparan CdSO4 yang dibandingkan dengan kontrol terhadap organ visceral Mus musculus betina.

1.3 Tujuan 1. Menentukan Lethal Dose Cadmium Sulfat / LD50 CdSO4 pada Mus musculus. 2. Mengetahui tingkat toksisitas CdSO4 berdasarkan konsentrasi tertentu. 3. Mengetahui efek toksisitas akut sebagai akibat dari pendedahan jangka pendek dengan dosis tertentu.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Hewan Percobaan Pemilihan spesies hewan coba yang lazim digunakan pada uji toksisitas akut adalah tikus, mencit, marmut, kelinci, babi, anjing, dan monyet. Pertimbangan dalam memilih hewan coba biasanya didasarkan pada avaibilitas, harga, dan kemudahan dalam perawatan. Namun seiring perkembangan zaman, tipe metabolisme, farmakokinetik, dan perbandingan catatan atau sejarah avaibilitas juga ikut dipertimbangkan. Hewan yang paling sering dipakai adalah mencit dengan mempertimbangkan faktor ukuran, kemudahan perawatan, harga, dan hasil yang cukup konsisten dan relevan. Hewan percobaan yang digunakan dalam praktikum kali ini memiliki klasifikasi sebagai berikut: Kerajaan : Animalia Filum Kelas Ordo Famili Genus Spesies : Chordata : Mamalia : Rodentia : Muridae : Mus : M. musculus

Hewan mencit atau Mus musculus adalah tikus rumah yang termasuk ke dalam ordo rodentia dan family Muridae. Mencit dewasa biasa memiliki berat antara 25-40gram dan mempunyai berbagai macam warna. Mayoritas mencit laboratorium adalah strain albino yang mempunyai warna bulu putih dan mata merah muda (Hrapkiewicz etal, 1998). Mencit merupakan hewan yang tidak mempunyai kelenjar keringat, jantung terdiri dari empat ruang dengan dinding atrium yang tipis dan dinding ventrikel yang lebih tebal. Percobaan dalam menangani hewan yang akan diuji cenderung memiliki karakteristik yang berbeda, seperti mencit lebih penakut dan fotofobik, cenderung sembunyi dan berkumpul dengan sesama, mudah ditangani, lebih aktif pada malam hari (nocturnal), aktivitas terganggu dengan adanya manusia, suhu normal 37,40 C, lajurespirasi 163/menit sedangkan pada hewan tikus sangat cerdas, mudah ditangani, tidak bersifat fotofobik, lebih resisten terhadap infeksi, kecenderungan berkumpul dengan sesama sangat kurang, jika makanan kurang atau diperlakukan secara kasar akan menjadi

liar dan galak, suhu normal 37,50 C, laju respirasi 210/menit pada mencit dan tikus persamaannya gigi seri pada keduanya sering digunakan untuk mengerat /menggigit benda-benda yang keras.

2.2. Uji Toksisitas Akut Uji toksisitas adalah untuk menentukan sifat akut atau kronik limbah. Pengujian toksisitas bertujuan untuk menilai efek racun terhadap organisme, menganalisis secara obyektif resiko yang dihadapi akibat adanya racun di lingkungan. Toksisitas akut terjadi pada dosis tinggi, waktu pemaparan pendek dengan efek parah dan mendadak dimana organ absorpsi dan eksresi terkena. Sedangkan toksisitas kronis terjadi pada dosis tidak tinggi pemaparan menahun, gejala tidak mendadak atau gradual, intensitas efek dapat parah/ tidak.Jenis uji yang digunakan tergantung pada penggunaan zat kimia dan manusia yang terpapar. Uji toksisitas akut dilakukan dengan memberikan zat kimia yang diuji sebanyak satu kali, atau beberapa kali dalam waktu 24 jam. Terdapat beberapa macam cara untuk pengujian toksisitas akut, yaitu oral, parenteral, inhalasi, kulit dan mata. Suatu indeks untuk mendefinisikan toksisitas akut dikenal dengan istilah LD50. Pengertian dari LD50 adalah dosis tunggal dari suatu zat, yang diturunkan secara statistik, yang menyebabkan kematian 50% hewan uji. Uji toksisitas akut bertujuan untuk menyelidiki intrinsik dari suatu bahan kimia, untuk menilai jenis hewan yang peka, menyeleksi tingkat dosis dalam penelitian lebih lanjut, dan untuk memperoleh informasi mengenai dampak merugikan yang dapat muncul pada organ. 2.3. Uji Toksisitas CdSO4 terhadap Hewan dan Tumbuhan Bahan kimia yang masuk ke dalam tubuh manusia atau hewan dengan dosis, waktu dan cara pemberian tertentu telah banyak dilaporkan menyebabkan kelambatan perkembangan dan embrio abnormal. Selain efek tersebut bahan-bahan kimia dapat menyebabkan terjadinya penurunan indeks mitosis pada sel, baik sel tubuh ataupun sel embrio (blastomer) serta menyebabkan terjadinya aberasi kromosom. Penurunan indeks mitosis berarti telah terjadi kelambatan pembelahan sel, jika waktu pembelahan sel lambat maka akan menyebabkan kelambatan perkembangan suatu organisme. Cd termasuk dalam logam berat non-esensial, dalam jumlah yang berlebih menyebabkan toksisitas pada manusia, hewan dan tumbuhan. Akumulasi pada tumbuhan dapat memicu perubahan ekspresi protein. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui profil protein bayam cabut

(Amaranthus tricolor, L.) pada cekaman Kadmium (Cd) dilaksanakan di Laboratorium Botani Biologi ITS, secara deskriptif eskperimental dengan metode elektroforesis SDS-PAGE. daun bayam cabut (Amaranthus tricolor, L.) diperlakukan CdSO4 dengan konsentrasi 0 ppm (kontrol), 1, 2, dan 3 ppm. Analisis dengan elektroforesis SDS-PAGE menunjukkan bahwa dengan perlakuan konsentrasi 1, 2 membentuk 18 pita protein dan 3 ppm 17 pita protein. Pita protein yang terlihat pada perlakuan 1, 2 dan 3 ppm yang berbeda dengan kontrol di duga sebagai fitokelatin mempunyai berat molekul 15.9 kDa, 39.2 kDa, 21 kDa dan 64.28 kDa. Protein fitokelatin pada tumbuhan diketahui berperan sebagai protein pertahanan dan pengikat logam cadmium (Cd). 2.3. Efek Toksisitas CdSO4 terhadap Sistem Organ Manusia Cadmium ditemukan dalam pembuatan baterai, plastik PVC, pigmen cat, pupuk, rokok, dan kerang yang berada di sekitar lingkungan pabrik. Logam berat ini bergabung bersama timbal (Pb) dan merkuri sebagai the big three heavy metal yang memiliki tingkat bahaya tertinggi pada kesehatan manusia. Cadmium di alam biasanya berikatan dengan sulfat membentuk senyawa CdSO4. Walaupun kadar logam dalam tanah, air, dan udara rendah, namun dapat meningkat apabila manusia menggunakan produk-produk dan peralatan yang mengandung logam, pabrikpabrik yang menggunakan logam, pertambangan logamdan pemurnian logam.

Efek Kadmium Terhadap Ginjal

Logam Cd dapat menimbulkan gangguan dan bahkan mampu menimbulkan kerusakan pada sistem yang bekerja di ginjal. Kerusakan yang terjadi pada sistem ginjal dapat dideteksi dari tingkat jumlah atau jumlah kandungan protein yang terdapat dalam urine. Petunjuk kerusakan yang dapat terjadi pada ginjal akibat logam kadmium yaitu terjadinya asam amniouria dan glokosuria, dan ketidaknormalan kandungan asam urat kalsium dan fosfor dalam urine.

Efek Kadmium Terhadap Paru

Keracunan yang disebabkan oleh peristiwa terhirupnya uap dan atau debu kadmium juga mengakibatkan kerusakan terhadap organ respirasi paru-paru. Kerusakan paru-paru tersebut dapat terjadi sebagai akibat dari keracunan kronis yang disebabkan oleh Cd.

Efek Kadmium Terhadap Tulang

Efek keracunan kadmium juga dapat mebgakibatkan kerapuhan pada tulang. Gejala rasa sakit pada tulang sehingga menyulitkan untuk berjalan. Terjadi pada pekerja yang bekerja pada industri yang menggunakan kadmium. Penyakit tersebut dinamakan itai-itai.

Efek Kadmium Terhadap Sistem Reproduksi Daya racun yang dimiliki oleh kadmium juga mempengaruhi sistem reproduksi dan organya. Pada konsentrasi tertentu kadmium dapat mematikan sel-sel sperma pada laki. Hal inilah yang menjadi dasar bahwa akibat terpapar oleh uap logam cadmium mengakibatkan impotensi. organlakidapat

2.4. Jalur-jalur Pendedahan dan Penjelasannya Cara pendedahan zat pada hewan percobaan harus dilakukan secara tepat. Hal ini dikarenakan pendedahan hewan dilakukan dengan tujuan untuk meneliti anatomi dan fisiologi hewan percobaan tersebut. Jika cara pendedahan yang dilakukan tidak sesuai prosedur, maka hewan percobaan akan cacat atau bahkan mati ketika kita memerlukan data-data untuk proses penelitian. Jalur pendedahan melalui kulit adalah yang paling mudah. Cukup hanya dengan mengoleskan zat pada bagian kulit yang diinginkan. Pendedahan melalui saluran pernapasan juga cukup mudah untuk dilakukan, yaitu dengan cara memaksa hewan menghisap zat yang ingin kita masukkan. Oral gavage merupakan metode yang banyak dilakukan di kalangan ilmuan. Untuk mengurangi resiko yang tidak baik dalam penggunaanya, penting untuk dianjurkan bahwa ketrampilan merupakan hal yang harus dimiliki orang yang melakukan pendedahan secara oral gavage. Menurut Zhang (2012) sebagai alternatif gavage, beberapa bahan bisa dimakan secara sukarela pada campuran yang enak. Pemberian secara oral gavage dilakukan melalui saluran pencernaan, oleh karena itu penting untuk membuat mencit agar tidak stress. Volume maksimal pendedahan secara oral gavage adalah 0,1 mL. Injeksi secara subkutan biasanya paling tidak menyakitkan diantara metode injeksi yang lain. Injeksi ini dilakukan dengan cara memasukkan zat ke dalam lapisan kulit menggunakan jarum suntik. Meskipun demikian, metode ini hanya digunakan untuk beberapa maksud penelitian saja. Jika ingin meneliti sistem pencernaan, maka metode ini tidak tepat digunakan (anonim, 2012). Volume maksimal zat yang dapat dimasukkan melalui metode subkutan adalah 0,05 sampai 0,2 mL bergantung pada berat hewan.

Injeksi intravena merupakan metode injeksi yang cukup sulit dilakukan oleh orang yang kurang berpengalaman. Untuk melakukan injeksi intravena dapat menyebabkan masalah pada mencit bila terjadi kesalahan saat dilakukan injeksi (Institute of Animal Technology, 2012). Injeksi intravena langsung memasukkan zat ke aliran darah melalui ekor (pada mencit). Injeksi ini digunakan untuk meneliti penyakit-penyakit atau gangguan kesehatan yang membutuhkan penedahan zat langsung ke aliran darah. Volume maksimal zat yang dapat dimasukkan melalui metode subkutan adalah 0,1 sampai 0,25 mL bergantung pada berat hewan. Injeksi intraperitonial dilakukan dengan cara memasukkan zat ke rongga abdomen. Menurut tim dari Procedures with care (2010), injeksi intraperitonial meskipun sering dilakukan sebagai salah satu metode untuk injeksi zat seperti anestesi, tingkat kegagalannya cukup tinggi, oleh karena itu disarankan untuk beralih ke injeksi subkutan atau oral gavage jika hanya untuk memasukkan zat anestesi. Volume maksimal zat yang dapat dimasukkan melalui metode subkutan adalah 0,25 sampai 1,5 mL bergantung pada berat hewan.

BAB III METODE KERJA

3.1

Waktu dan Lokasi Praktikum dimulai pada 18 Oktober 1 November 2012. Praktikum ini dilakukan selama

4 hari untuk aklimasi, dan 10 hari untuk waktu pengamatan setelah pendedahan. Lokasi di Pusat Laboratorium Terpadu Lantai 4 Lab. Biologi Dasar.

3.2

Alat dan Bahan Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah kandang mencit, tempat makan mencit,

tempat untuk air minum mencit, timbangan analitik, timbangan presisi, pinset, wadah plastik, cawan petri, syrinx, spatula, gelas beaker, batang pengaduk atau magnetic stirrer, botol larutan, gunting bedah, pisau bedah, jarum pentul, papan bedah, dan kamera Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah mencit (Mus muscullus), sarung tangan, aquabidestilata, CdSO4, alumunium foil, aquadest, pelet anak babi, kertas, plastik, label, tisu, dan sabun pencuci tangan.

3.3

Cara Kerja

3.3.1 Pemilihan hewan uji Hewan uji yang dipakai adalah Mus musculus dimana kondisi fisiknya harus sehat. Sebelum digunakan untuk pengujian Mus musculus sudah diaklimatisasi terlebih dahulu (penyesuaian dengan kondisi laboratorium) selama satu minggu. Umur reproduksi Mus musculus sudah cukup (dewasa) dimana untuk Mus musculus jantan umurnya adalah 12 minggu dan untuk Mus musculus betina umurnya adalah 10 minggu. Distribusi dari berat badan Mus musculus harus merata dengan range persentase 10-20% dan jumlah ulangan perdosis adalah (n-1) (t-1) 15. 3.3.2 Penentuan jumlah dosis yang digunakan untuk mencit (Mus musculus) Sebelum membuat larutan CdSO4 yang diperlukan adalah jumlah dosis untuk LD50. Dosis tertinggi CdSO4 diperoleh dari studi literatur penelitian sebelumnya dimana didapat sebesar dosis tertinggi = 10 mg/Kg b.b. Dosis terendah = 2,5 mg/Kg b.b dan jumlah kelompok perlakuan ada 4. Perhitungan dosis menggunakan rumus Laurence & Bacharah (1964) yaitu F= . Setelah

nilai F sudah didapat maka dosis tertinggi dibagi dengan nilai F tersebut. Hasil pembagian tersebut dibagi lagi dengan nilai F sampai batas dosis terendah. 3.3.3 Pembuatan Larutan CdSO4 Setelah perhitungan jumlah dosis didapat, dosis-dosis tersebut dikonversikan kedalam 0,1 mL/ 10 gram b.b. dan satuan hasil konversinya adalah mg/10 mL. Setelah itu praktikan harus membuat larutan stok CdSO4 yang dosisnya 10 lipat lebih pekat dari dari zat uji dengan dosis tertinggi. Pembuatan larutan stok untuk menghindari penguapan berlebih dari zat. Langkah pertama pembuatan larutan stok CdSO4 yaitu padatan CdSO4 diambil dengan menggunakan spatula dan ditimbang menggunakan timbangan analitik digital dengan memberi alas alumunium foil. Padatan CdSO4 dibungkus menggunkan alumunium foil yang sebelumnya menjadi alas pada saat penimbangan. Setelah itu CdSO4 dipindahkan dari kertas alumunium foil kedalam gelas beaker. Tuangakan akuabidestilata sesuai dengan volume hasil perhitungan sekaligus dengan membilas alumunium foil pembungkus CdSO4 untuk menghindari CdSO4 yang tersisa. Larutan tersebut diaduk dengan meggunakan batang pengaduk atau magnetic stirrer hingga terlarut dengan sempurna. Larutan stok tersebut dipindahkan kedalam botol larutan yang gelap atau ditutup alumunium foil untuk menghindari pengaruh cahaya. Larutan stok yang sudah jadi diberi label tanggal pembutan dan nama pembuat. Larutan stok disimpan didalam lemari es serta untuk menghindari ketidakakuratan konsentrasi sebaiknya jangan digunakan lebih dari satu bulan. Setelah larutan stok dibuat langkah selanjutnya adalah membuat larutan dengan berbagai macam dosis. Pembuatannya dilakukan dengan cara pengenceran menggunakan rumus V1 x M1 = V2 x M2. 3.3.4 Pendedahan dan pengamatan kondisi pada mencit (Mus muscullus). Pendedahan dilakukan dengan cara intraperitoneal pada Mus muscullus. Pemegangan Mus muscullus harus tepat sehingga apabila disuntik Mus muscullus tidak bisa bergerak. Pemegangan Mus muscullus diusap kulitnya dari bagian dorsal sampai bagian leher lalu Mus muscullus digenggam bagian dorsalnya sampai Mus muscullus tidak bisa bergerak lagi. Penyuntikan dengan cara intraperitoneal diarahkan kebagian rongga perut dengan derajat kemiringan syrinx yaitu 450 . Tepatnya daerah penyuntikkan ditandai dengan lancarnya jarum syrinx saat masuk ke rongga perut. Pendedahan hanya dilakukan 1 kali. Setelah Mus muscullus disuntikan larutan CdSO4 lakukan pengamatan kondisi fisik Mus muscullus. Pengamatan kematian dilakukan pada jam 1, 2, 4,24, 48, 72, 96 dan pengamatan kondisi fisik setiap hari

dilakukan selama 10 hari. Parameter yang diamati adalah: Kulit, rambut, mata, pernafasan, tingkah laku, motorik, tremor, salivasi, letargi, sistem saraf otonom, berat badan mencit dan berat feses. Penimbangan berat badan mencit menggunakan timbangan presisi dan penimbangan berat feses mencit menggunakan timbangan analitik digital. Penimbangan dilakukan rutin setiap hari dan dicatat hasilnya sampai 10 hari. Setiap hari alas kandang harus diganti dan mencit diberi makan yaitu pelet anak babi dan diberi minum air. 3.3.5 Pembedahan dan pengamatan organ viseral mencit (Mus muscullus) Sebelum pembedahan mencit harus dimatikan terlebih dahulu dengan cara dislokasi pada bagian leher mencit yaitu menggunakan alat tumpul untuk menekan bagian leher dan bagian ekor mencit ditarik sampai mencit tidak bergerak atau mati. Setelah mencit mati dilakukan pembedahan dengan menggunakan gunting bedah dimulai dari bagian anus. Organ viseral yang diamati adalah limpa, ren, gastrum, pulmo, cor, intestinum, pankreas dan hepar. Organ tersebut dialas alumunium foil yang telah ditimbang beratnya dengan menggunakan timbangan analitik lalu diletakkan organ yang akan ditimbang. Setelah ditimbang amati secara makroskopis organ viseral tersebut. Organ viseral dibandingkan dengan kontrol yaitu dilihat dari warna organ, tekstur membengkak, mengkerut atau mengeras. Foto organ viseral kontrol dengan organ viseral yang terdedah CdSO4. 3.3.6 Penentuan LD50 pada mencit (Mus muscullus) Penentuan LD50 dapat dihitung dengan menggunakan analisa probit dilihat dari jumlah individu yang mati dan koreksi % kematian. Nilai probit didapat dari perhitungan koreksi % kematian dan nilai probit dilihat menggunakan tabel probit. Selanjutnya dibuat pada microsoft excel grafik regesi linear dengan sumbu X= log10 dosis dan sumbu Y= nilai probit. Rumus yang didapat digunakan untuk mendapatkan nilai X. Setelah nilai X dapat maka hasil harus di antilog terlebih dahulu itulah nilai dari LD50. 3.4 Analisis data

3.4.1 Distribusi berat badan mencit X = Berat rata-rata seluruh mencit Jumlah seluruh mencit Hasil X digunakan untuk distribusi berat badan mencit. Range persentase dari X adalah sebesar 10-20%.

3.4.2 Jumlah ulangan perdosis ( n - 1) ( t 1 ) 15

3.4.3 Menentukan jumlah dosis Berdasarkan Laurence & Bacharah (1964) F= Keterangan: F = nilai koefisien I = nilai dosis tertinggi per dosis terendah r = jumlah kelompok perlakuan yang akan diuji (tidak termasuk kontrol) 1 Dosis tertinggi zat x dibagi dengan nilai F sampai menemukan beberapa dosis dan sampai batas nilai dosis terendah.

3.4.4 Menentukan LD50/LC50 Koreksi % kematian: % kematian yang teramati- % kematian kontrol x 100 % 100- % kematian kontrol Hasil dari koreksi % kematian digunakan untuk melihat nilai probit pada tabel probit.

Contoh hasil rumus regresi linear menggunakan Ms. Excel: Y = 5,045X 4,2501 Dengan Y = nilai probit X = log10 LD50 adalah antilog dari nilai X.

3.4.5 Pembuatan dosis larutan CdSO4 V1 x M1 = V2 x M2 Keterangan : V1 = Volume larutan 1 M1 = Konsentrasi larutan 1 V2 = Volume larutan 2 M2 = Konsentrasi larutan 2

BAB IV PEMBAHASAN

Praktikum kali ini mengenai uji toksisitas akut logam berat CdSO4 yang dilakukan dengan menggunakan hewan coba mencit (Mus musculus) betina. Logam berat CdSO4 didedahkan secara intraperitoneal dalam bentuk larutan dengan konsentrasi yang berbeda. Penggunaan larutan CdSO4 untuk mengetahui efek toksik logam berat Cd dalam praktikum kali ini disebabkan unsur logam berat Cd bukan merupakan unsur bebas yang ada di alam. Sehingga digunakan senyawa dalam bentuk CdSO4. Pengaruh pendedahan logam berat CdSO4 dilakukan dengan mengamati berbagai parameter, diantaranya adalah perubahan berat badan mencit, berat feses, pengamatan fisik, dan berat organ visceral. Berdasarkan hasil pengamatan perubahan berat badan mencit selama 10 hari, di dapatkan hasil sebagai berikut :
30 1 25 Berat badan (g) 20 15 10 5 0 0 2.5 4 Dosis (mg/ml bb) 6.3 10 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Gambar 1. Perubahan Berat Badan Mencit Grafik 1 memperlihatkan adanya perubahan berat badan pada masing-masing kelompok dosis yang didedahkan. Grafik 1 menunjukkan nilai yang berbeda-beda selama 10 pengamatan setelah didedahkan CdSO4. Secara umum pada dosis 2,5 mg/Kg bb. dan 6,3 mg/Kg bb. terjadi penurunan berat badan mencit, sedangkan pada dosis 4 mg/Kg bb. dan 10 mg/Kg bb. terjadi peningkatan berat badan mencit. Hal ini terjadi karena perbedaan nafsu makan akibat pengaruh

dosis yang didedahkan yang berpengaruh pada organ pencernaan yang mengakibatkan kerusakan pada organ pencernaan mencit sehingga terjadi kemapuan penyerapan makanan oleh mencit.

4 3.5 Berat Feses Mencit (gram) 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 2.5 4 Dosis mg/Kg bb. 6.3 10

H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8

Gambar 2. Perubahan Berat Feses Mencit Grafik 2 menunjukkan terjadinya perubahan secara fluktuatis berat feses tiap hari antar kelompok dosis yang didedahkan. Pada dosis 0 mg/Kg bb. (kontrol), terlihat terjadi peningkatan berat feses secara signifikan pada hari ke-4 dan seterusnya. Hal ini karena mencit kelompok kontrol memiliki nafsu makan yang tinggi sehingga feses/hasil buangan metabolismenya pun juga meningkat. Sedangkan pada mencit kelompok dosis yang lain mengalami gangguan pada organ pencernaan sehingga menurunkan nafsu makan mengakibatkan feses yang dihasilkan lebih sedikit,sehingga jauh berbeda dari kontrol. Perbedaan berat feses juga terjadi akibat tigkat toksisitas yang dihasilkan pada masingasing konsentrasi mengakibatkan terganggunya metabolisme yang terjadi pada tubuh mencit. Pengukuran berat feses juga dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui apakah ada pengaruh antara CdSO4 dengan fungsi pencernaan. Cadmium tidak diabsorpsi dengan baik, yaitu sekitar 58%. Namun, itu tetap lebih tinggi dibandingkan absorpsi mineraldan sulit dieliminasi dari dalam tubuh sehingga akan dideposit di dalam tubuh. Cadmium diabsorpsi dan diakumulasi. Ekskresi Cd terjadi melalui urin dan feses (Widowati,2008). Berat feses juga berpengaruh terhadap berat badan, makin banyak feses yang dikeluarkan, maka berat badan akan semakin berkurang karena hanya sedikit makanan yang

diserap akibat terganggunya system pencernaan akibat pendedahan. Begitu pula sebaliknya, semakin kecil berat feses yang dikeluarkan maka semakin bertambah berat badannya. Hal ini dikarenakan penyerapan makanan oleh tubuh dapat diserap secara optimal. Pengamatan fisik mencit dilakukan selama 10 hari. Pengamatan fisik ini dilakukan untuk mengatahui efek pemberian berbagai dosis CdSO4 terhadap mencit. Berikut merupakan tabel pengamatan fisik mencit. Tabel 1. Pengamatan Fisik Parameter 0 Kulit&rambut Normal 10 Berdiri Kelompok dosis (mg/kg bb) 6.3 Rontok 4 Berdiri 2,5 Normal

Mata Pernafasan Tingkah laku Motorik

Normal Normal Aktif Respon positif

Menyipit Normal Aktif Respon positif Normal Normal Normal Aktif

Menyipit Normal Aktif Respon positif Normal Normal Normal Aktif

Menyipit Normal Aktif Respon Positif Normal Normal Normal Aktif

Menyipit Normal Aktif Respon positif Normal Normal Normal Aktif

Tremor Salivasi Letargi Sistem saraf otonom

Normal Normal Normal Aktif

Paparan logam Cd pada mencit dapat terlihat pengaruhnya melalui pengamatan fisik. Secara umum yang terlihat pengaruh adanya paparan Cd dalam tubuh mencit yaitu terjadinya kerontokan pada rambut mencit dan juga membuat rambut menjadi berdiri serta adanya tandatanda mata yang menjadi menyipit merupakan suatu respon terhadap adanya racun didalam tubuh. Pada pengamatan 1, 2, 4 jam setelah pendedahan terlihat adanya perubahan fisik mencit.

Kelompok perlakuan dosis 10 mg/Kg bb., 6,3 mg/Kg bb., 4 mg/Kg bb., dan 2,5 mg/Kg bb., ratarata mengalami tremor, letargi, nafas yang sedikit terengah-engah, mata menyipit dan rambut berdiri. Hal ini terjadi dapat dikarenakan dosis yang didedahkan langsung terabsorbsi dan bereaksi ke organ-organ tertentu yang menyebabkan abnormalitas organ mencit terlihat pada kondisi fisiknya. Namun hal ini tidak berlangsung lama karena adanya mekanisme utuk detoksifikasi dalam tubuh mencit untuk merespon adanya inhibitor seperti logam Cd yang didedahkan pada mencit tersebut. Mencit juga mengalami homeostasis untuk mengembalikan keadaan tubuhnya kembali seperti semula. Efek dari Cd yang terdedah kedalam tubuh akan membuat jantung bekerja lebih keras dan lebih cepat untuk menyesuaikan diri, sehingga membuat nafas terengah-engah. Menurut Gourge, 2006, mamalia memiliki suatu aparatus untuk meningkatkan ketebalan rambut. Termasuk diantaranya adalah piloereksi, berdirinya rambut-rambut tunggal akibat kontraksi otototot piloerektor dibagian dasar masing-masing rambut. Baik temperatur dingin maupun reaksi emosional semacam perasaan takut memicu piloereksi. Jika penyesuaian perilaku, penggerakan aliran darah ke permukaan kulit dan piloereksi ternyata tidak cukup, sebuah respon yang unik bisa dirangsang agar terjadi menggigil. Hal ini juga terjadi pada mencit, sehingga mencit mengalami tremor dan letargi. Organ viseral mencit perlu diamati untuk dapat mengetahui seberapa besar dampak pendedahan CdSO4 terhadap organ-organ serta menganalisis dampak pendedahan terhadap organ tersebut. Berikut merupakan grafik berat organ viseral mencit.

0.18 Proporsi Berat Organ Viseral Mencit (gram) 0.16 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0 2.5 4 Dosis mg/Kg bb. 6.3 10 Pulmo Cor Limpa Pankreas Hepar Ren Intestinum Gastrum

Gambar 3. Proporsi Berat Organ visceral Proporsi berat organ visceral pada gambar 1. Menunjukkan secara keseluruhan adanya fluktuasi proporsi berat organ visceral pada mencit akibat pemberian dosis CdSO4. Gambar 1. Juga menunjukkan bahwa berat organ visceral tidak mengalami penurunan secara signifikan seiring kenaikan dosis CdSO4 yang didedahkan. Berat masing-masing organ visceral pada dosis pendedahan 2,5 mg/kg bb CdSO4 mengalami penurunan secara keseluruhan dari kontrol. Penurunan ini disebabkan oleh penimbunan Cd di dalam berbagai macam-macam organ tubuh terutama ren, hepar, dan pulmo, tetapi dapat juga ditimbun di dalam pankreas, jantung, limpa, dan jaringan adiposa (Peereboom, 1981) . Penimbunan Cd pada berbagai macam organ ini akan menyebabkan terjadinya kerusakan sel yang menyusun organ-organ sehingga berat keseluruhan organ menurun. Berat organ visceral pada dosis pendedahan CdSO4 4 mg/kg bb terlihat bahwa ada fluktuasi jika dibandingkan dengan control maupun dosis pendedahan sebelumnya. Organ hepar, ren, intestinum, cor, pancreas, limpha mengalami kenaikan berat sedangkan organ lain beratnya mengalami penurunan jika dibandingkan dengan dosis 2,5 mg/kg bb. Kenaikan berat organ intestinum dapat dikarenakan adanya variasi pemberian jenis pakan, dan pemberian pakan yang berbeda juga dapat menyebabkan kenaikan berat organ intestinum, sedangkan kenaikan berat organ limpha menurut Yamada et al (1981) dikarenakan secara histopatologis pulpa putih akan berkurang sedangkan dalam pulpa merah terjadi infiltrasi sel leukosit berinti polimorf dan sel-sel

myeloid. Berat seluruh organ visceral pada dosis pendedahan CdSO4 6,3 mg/kg bb mengalami penurunan dari berat control dan berat dosis 2,5 dan 4 mg/kg bb. Penurunan berat badan ini diakibatkan oleh sama halnya dengan penurunan berat organ visceral pada dosis pendedahan 2,5 mg/kg bb. Pendedahan CdSO4 dosis 10 mg/kg bb menyebabkan kematian individu mencit seluruhnya, sehingga tidak ada berat organ viseralnya. Organ-organ viseral selain ditimbang juga diamati secara makroskopis agar dapat mengetahui pengaruh pendedahan CdSO4 terhadap organ viseral yang lebih spesifik. Berikut merupakan tabel pengamatan makroskopis organ viseral mencit pada masing-masing dosis pendedahan. Tabel 2. Pengamatan Makroskopis Organ viseral Dosis (mg/kg bb) Organ 0 Limpha Merah bata 2,5 Merah kehitaman 4 Merah kehitaman Warna Pankreas Krem Krem lebih pucat dari kontrol Warna putih pucat Kuning pucat Merah pucat Merah muda Warna lebih pucat dari kontrol Kuning pucat Merah tua pucat Merah muda pucat Warna lebih hitam dari kontrol Krem 6,3 Merah bata

Gastrum

Krem

Krem

Intestinum

Kuning kehijauan Merah tua segar Merah

Kuning pucat Merah tua

Cor

Pulmo

muda segar Merah tua segar

Merah muda

Hepar

Merah

Merah tua pucat

pucat Ren Merah tua segar Merah kehitaman Merah pucat Merah kehitaman

Tabel 2. . Menunjukkan hampir keseluruhan telah terjadi perubahan kondisi fisik organ viseral mencit yang telah didedahkan CdSO4. Organ limpha pada dosis pendedahan 2,5 dan 4 mg/kg bb mengalami perubahan warna dari control yang berwarna merah bata menjadi warna merah kehitaman. Hal ini menunjukkan bahwa telah terjadi kerusakan limpha akibat Cd. Pemberian Cd dapat menyebabkan penurunan jumlah anti bodi pada mencit sehingga daya tahan terhadap virus dan bakteri berkurang (Pool,1981).. Pengamatan makroskopis organ pancreas menunjukkan perubahan warna pada dosis pendedahan CdSO4 4 mg/kg bb dari warna krem menjadi kepucatan. Keracunan Cd dapat menyebabkan penurunan fungsi pancreas. Efek pemberian Cd pada hewan mempengaruhi metabolisme karbohidrat. Pengamatan makroskopis Organ sistem pencernaan yang terdiri dari gastrum dan

intestinum menunjukkan telah terjadi perubahan warna. Organ gastrum pada dosis 4 dan 6,3 mg/kg bb dari warna krem menjadi kepucatan, sedangkan intestinum mengalami perubahan warna pada dosisi 2,5, 4, dan 6,3 mg/kg bb dari warna kuning kehijauan menjadi kuning pucat. kerusakan organ sistem pencernaan dapat mempengaruhi proses pencernaan mencit, sehingga tidak dapat menyerap nutrisi yang terdapat dalam makanan secara maksimal. Organ sistem ekskresi mencit merupakan organ-organ yang mempunyai dampak yang paling parah. Hal ini dikarenakan organ-organ ini sangat berperan dalam pengeluaran senyawasenyawa toksik yang tidak dibutuhkan lagi oleh tubuh serta organ pada sistem ekskresi merupakan target organ yang paling banyak menyerap Cd (Pool,1981). Sistem organ ekskresi terdiri dari pulmo, ren dan hepar. Organ hepar menunjukkan perubahan warna pada dosis 4 mg/kg bb menjadi lebih pucat dan pada dosis 6,3 mg/kg bb menjadi kehitaman. Menurut Peerebom (1981) Cd yang terserap dalam tubuh sebanyak 64 % akan ditimbun di dalam hati dalam waktu 4 jam, kemudian Cd akan disebarluaskan diantara sel-sel hati. Organ ren menunjukkan perubahan warna pada dosis 2,5 dan 6,3 mg/kg bb menjadi lebih pucat serta pada dosis 4 mg/kg bb menjadi lebih kehitaman. Menurut Benard et al (1981) cadmium yang tertimbun di dalam ginjal akan menyebabkan proteinria yang merupakan awal dari lesio pada ren. Pengamatan makroskopis terhadap organ pulmo menunjukkan perubahan warna menjadi

lebih pucat pada dosis 6,3 mg/kg bb. Pendedahan Cd dengan dosis tinggi akan meenyebabkan emphysema pulmonum. Hal ini disebabkan karena Cd dapat mengakibatkan pecahnya dinding alveoli paru-paru (Anon, 1982). Pengamatan terhadap cor menunjukkan perubahan warna menjadi merah pucat pada dosis 4 mg/kg bb dan merah hitam pucat pada dosis 6,3 mg/kg bb. Cor merupakan salah satu organ penyusun sistem sirkulasi. Pendedahan Cd dalam dosis tinggi pada jantung dapat menyebabkan terjadinya hipertropi cor. Hipertropi adalah peningkatan volume organ atau jaringan akibat pembesaran komponen sel (Anon, 1982). Langkah selanjutnya setelah pengamatan organ viseral ialah penentuan LD50 CdSO4. LD50 merupakan dosis yang menyebabkan 50% kematian dari populasi. Berikut merupakan tabel kematian mencit pada saat 96 jam setelah penyuntikan.

Tabel 3. Penentuan LD50 pada saat 96 jam pengamatan Dosis CdSO4 (mg/ml.bb) 0 2,5 4 6,3 10 Jumlah Individu 3 3 3 3 3 Jumlah Individu Mati setelah 96 jam 0 0 1 0 2

Tabel 2. Menunjukkan individu mencit yang mengalami kematian pada saat 96 jam setelah pendedahan. Individu mencit yang mengalami kematian terdapat pada pendedahan dosis CdSO4 4 dan 10 mg/kg bb masing masing sebanyak 1 dan 2 individu mencit. Individu mencit yang didedahkan CdSO4 0, 2,5 dan 6,3 mg/kg bb tidak mengalami kematian. Hasil tersebut menunjukkan bahwa adanya efek CdSO4 sesuai dengan dosis yang didedahkan. Semakin tinggi CdSO4 yang didedahkan maka efek terhadap tubuh mencit akan semakin besar, hal ini dikarenakan seluruh organ-organ mempunyai batasan maksimum terhadap zat beracun seperti Cd, ketika zat toksik tersebut tidak dapat ditoleransi oleh berbagai organ tubuh, maka zat tersebut dapat merusak suatu unit struktural sel pada organ-organ penyusun tubuh mencit.

Tabel 4. Penentuan Nilai Probit Dosis CdSO4 (mg/ml.bb) 0 2,5 4 6,3 10 0,397 0,602 0,799 1 3 3 3 3 3 Log10 Dosis Jumlah Individu Jumlah Individu Mati 0 0 1 0 2 0 0 33 0 67 0 0 33 0 67 4,56 5,44 % kematian Koreksi % Kematian Nilai Probit

Tabel 2 diatas merupakan tabel nilai probit yang dapat dihitung dari % kematian pada mencit di masing-masing dosis. Pada dosis 4 mg/kg bb dan 10 mg/kg bb memiliki % kematian sebesar 33 % dan 67 %. Kematian dari koreksi % kematian dapat menghasilkan nilai besarnya nilai probit. Pada koreksi % kematian 67 % maka nilai probitnya adalah 5.44, sedangkan pada koreksi % kematian 33 % maka nilai probitnya adalah 4,56. Analisis probit digunakan dalam pengujian biologis untuk mengetahui respon subyek yang diteliti oleh adanya stimuli dalam hal ini CdSO4 dengan mengetahui respon berupa mortalitas. (Negara, 2003 ). Selanjutnya, dengan membuat grafik regresi linier dengan sumbu x = log10 dan sumbu y = nilai probit. Sehingga didapatkan grafik sebagai berikut.
6 5 4 nilai probit 3 2 1 0 0 -1 0.2 0.4 0.6 log10 dosis 0.8 1 1.2 y = 4.3687x - 0.4447 R = 0.3722

Gambar 4. Grafik regresi linear dengan

Pada grafik dapat diperoleh rumus : Y = 4.3687 X 0.4447 Dengan Y = nilai probit X = log10 dosis Untuk LD50 berarti kematian 50% maka nilai probitnya adalah 5 Maka Y = 4.3687 X 0.4447 5 = 4.3687 X 0.4447 X = 1.24 Maka dosis LD50 adalah antilog X = antilog 1.24 = 17.37 mg/Kg bb Grafik 1 telah diperoleh rumus y = 4.3687 X 0.4447 . Sehingga dari hasil tersebut dapat diperoleh nilai LD50 (kematian 50%) sebesar 17.37 mg/kg bb. Nilai LD50 ini menurut Lu (1991) termasuk ke dalam kriteria amat sangat toksik karena nilainya diantara 1-50 mg/kg bb.

BAB V PENUTUP

5.1. Kesimpulan 1. Nilai Lethal Dose Cadmium Sulfat (CdSO4)/ LD50 sebesar 17.37 mg/Kg bb 2. Ada perubahan berat badan, kondisi fisik, serta organ visceral pada mencit di masing-masing kelompok perlakuan yang dibandingkan dengan kontrol. 3. Perbedaan dosis sangat mempengaruhi berat organ viseral dan pengamatan makroskopiss

DAFTAR PUSTAKA

Anon, B.R. 1982. Acute Cadmium Pneumonitis. Ind. Med., 39 (4) : 411-412. Bernard, A. 1981. Characteristic of Proteinuria by Prolonged Oral Administration of Cadmium in Female Rats. Tox. Let., 20 (4) : 411-412 Hrapkiewicz, K., Medina, L. and Holmes, D.D. (1998). Clinical Medicine of Small Mammals and Primates, pp. 330. lowa State University Press. Lu, F. C., 1991. Toksikologi Dasar Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko, diterjemahkan oleh Nugroho,E., Edisi Kedua. UI Press. Jakarta Negara, Abdi. 2003. Penggunaan Analisis Probit Untuk Pendugaan Tingkat Kepekaan Spodoptera exigua Terhadap Deltametrin Di Daerah Istimewa Jogjakarta. Sulawesi Tengah : Balai Pengkajian Teknologi Pertanian. Peerebom, J.W. 1981. Exposure and Toxic Effects of Cadmium Part 2. Toxic Effect of Cadmium to Animals and Man. Tox Environ. Health Perspect., 4 : 107-178 Pool, M.L. 1981. Exposure and Health Effects of Cadmium on Enzymes Activaties., Tox. Environ, Chemist. Rev., 4 : 179-203 Sulastry, feni. 2009. Uji Toskisitas Akut yang Diukur Dengan Penentuan LD50 Ekstrak Daun Pegagan (Centella asiatica (L) Urban) Terhadap Mencit BALB/C. Semarang: UNDIP Wisaksono, Satmoko. Efek Toksik dan Cara Menentukan Toksisitas Bahan

Kimia.DirektoratPengawasan Nazaba, Ditjen POM, Departemen Kesehatan RI Jakarta. Yamada,Y.K. 198. Thymus Atrophy on Mice Caused by Administrated Cadmium., Tox. Let ., B (1-2) : 49-55 Zhang, Lei. 2011. Voluntary oral administration of drugs in mice, Protocol Exchange,. doi: 10.1038/protex.2011.236. Published online 11 May 2011

LAMPIRAN

1. Perhitungan Koreksi % kematian diperoleh dari : Dosis 4 mg/kg.bb

Dosis 10 mg/kg.bb

2. Berdasarkan grafik regresi linear dapat diperoleh rumus : Y = 4.368x 0.444 Untuk LD50 berarti kematian 50% maka nilai probitnya adalah 5 Maka Y = 4.368x 0.444 5 = 4.368x 0.444 X = 1.24 Maka dosis LD50 adalah antilog X = antilog 1.24 = 17.37 g/Kg.bb

3. Foto Organ Visceral

Kontrol

Kelompok 3

Kelompok 4

Kelompok 5